Download DETERMINACIÓN DE UN AISLADO BENIGNO DEL
Document related concepts
no text concepts found
Transcript
DETERMINACIÓN DE UN AISLADO BENIGNO DEL PRSV, PARA LA IMPLEMENTACIÓN DE LA TÉCNICA DE PROTECCIÓN CRUZADA EN EL CULTIVO DE PAPAYO (Carica papaya L.) Resumen ejecutivo El proyecto fue llevado a cabo en cuatro etapas: a) selección en campo de los posibles aislados benignos del virus de la mancha anular del papayo (PRSV); b) evaluación, a nivel de invernadero, de plantas de papayo Maradol y plantas diferenciales; c) caracterización molecular de los aislados seleccionados para ver sus relaciones filogenéticas; d) evaluación en campo, con el fin de obtener un aislado benigno que puedan utilizar los productores de Veracruz. En plantaciones de papayo tipo Maradol de varios municipios (Actopan, Puente Nacional, Medellín de Bravo y Manlio Fabio Altamirano), se marcaron plantas desde el inicio de la infección (manchas cloróticas), y durante tres meses se evaluaron: desarrollo de síntomas, disminución de vigor y retraso en crecimiento. Se seleccionaron las plantas para el estudio, y se les realizó la prueba serológica ELISA con los antisueros del PRSV y PapMV. Al follaje obtenido de las plantas marcadas se les realizó el macerado con buffer de extracción de fosfato de sodio dibásico, pH 7.0, y se inoculó mecánicamente dos hojas de plantas de papayo cv Maradol usando como abrasivo carborundum de 600 mallas y algunas otras plantas diferenciales como Cucumis metuliferus, Cucurbita pepo. En la segunda etapa, los aislados se identificaron mediante la prueba de ELISA con los antisueros del Virus de la Mancha anular del papayo y Virus del Mosaico del papayo, y fueron inoculados mecánicamente en plantas de papayo variedad Maradol; a los 30 o 45 días fueron nuevamente inoculadas con aislados agresivos y se evaluó la protección a nivel de invernadero. Se inocularon, además, diferenciales, los mismos para separar a los aislamientos posibles sobre virus algunas plantas involucrados en la sintomatología. Durante la tercera etapa, con algunos de los aislados obtenidos de plantas de papayo se llevó a cabo la extracción de ARN total, transcripción reversa y reacciones de PCR. Los oligonucleótidos diseñados para llevar a cabo el PCR se basaron en la secuencia de nucleótidos del gene de la cápside de proteína, de secuencias de aislamientos de PRSV mexicanos. Después de la amplificación y clonación, las secuencias de nucleótidos que contenían principalmente el gene putativo de la cubierta de proteína, fueron comparadas con otras secuencias publicadas, para confirmar su identidad y buscar posibles regiones asociadas a los aislamientos benignos. En la cuarta etapa, ya definidos los aislados benignos, éstos se incrementaron en la planta Cucumis metuliferus por medio de transmisión mecánica y posteriormente se inocularon en plantas de papayo cv Maradol, y se mantuvieron en invernadero por un período de 30 a 45 días, para después sembrarse en un lote y evaluar la protección contra razas del PRSV a nivel de campo. Se comparó la eficiencia de la protección por medio del muestreo de la incidencia de virus sobre plantas y la utilización de la escala de severidad, en plantas infectadas por los aislados benignos y los testigos sin inoculación que se infectaron naturalmente. No se pudo obtener un aislado benigno de los aislamientos seleccionados de Veracruz, así que se buscó uno alternativo en la colección de aislados PRSV del Cinvestav, algunos de los cuales habían sido caracterizados parcialmente en sintomatología y molecularmente. A partir de la caracterización molecular se identificaron seis variantes virales en México: JAL (grupo Jalisco); VER (grupo Veracruz); CHIS (grupo Chiapas); QRO (grupo Quintana Roo); OAX (grupo Oaxaca) y SLP (grupo San Luís Potosí). Con estos aislados se realizaron inoculaciones mecánicas sencillas o mezcladas con las seis variantes antes mencionadas, de tal manera que hubo un total de 21 tratamientos y un testigo que fue inoculado con agua. Las inoculaciones fueron en forma seriada con los 21 tratamientos en tres ocasiones. Las inoculaciones tuvieron una secuencia de 5 a 10 días entre las series. De estas variantes la de Quintana Roo se comportó como benigna en las plantas inoculadas. Demanda o problemática que atiende El Virus de la Mancha anular del papayo (PRSV), que tiene varias razas, es el problema principal del cultivo de papayo a nivel mundial, porque causa una disminución de la producción al afectar el desarrollo de la planta. Se requieren estudios para seleccionar un aislado atenuado de dicho virus para usarlo en el cultivo de papaya. Resultados obtenidos y/o descripción. Características de la tecnología generada Información sobre la importancia de factores aislados en el comportamiento variable de las posibles variantes atenuadas veracruzanas del virus de la mancha anular del papayo (PRSV). Información corroborada acerca de la interacción con el Virus del Mosaico como un atenuador del PRSV, dependiendo de la secuencia de infección en la planta: benigno, si es primero el PaPMV y después el PRSV, o sinergismo (agresivo) si es la secuencia contraria. Se obtuvieron de campo posibles ocho posibles aislados benignos del PRSV y uno del PapMV. Impactos Caracterización de los síntomas en plantas de papayo Maradol con posibles aislados benignos del PRSV a nivel de plantaciones de productores de diferentes municipios veracruzanos. Los aislamientos considerados en este proyecto (que ya forman parte del Banco de genes del National Center for Biotechnology Information) fueron: C-1 AF319498; C-2 AF319506; C-3 AF319507 y C-4 AF 319497. Costos estimados de la aplicación de los resultados y/o tecnología generada El estudio aporta avances en materia científica, por lo tanto aún no es posible estimar costos por la aplicación de resultados. Ámbito de aplicación Por el momento, considerando que el estudio no está completamente terminado, el ámbito de aplicación de los resultados del estudio sigue siendo el estado de Veracruz. Información adicional o comentario El investigador señala que no fue posible caracterizar los aislados benignos y compararlos con los agresivos, con base en sus secuencias de nucleótidos o de aminoácidos. Esto afectó la etapa final del proyecto, porque no se pudo probar en campo los mejores aislados benignos y comprobar su eficiencia en plantaciones, ya que no fue posible obtener en las pruebas de invernadero un aislado que diera el 100% de infección benigna y protegiera de aislados agresivos; por lo tanto, el proyecto no concluyó como el investigador lo había planeado. Al parecer, las condiciones abióticas (luz, temperatura, humedad y bióticas (presencia de otros patógenos), influyeron al momento de seleccionar material de inicio del trabajo y al realizar las pruebas de laboratorio e invernadero. Sin embargo, aclara que está en desarrollo una parcela pequeña de papayo cv Maradol en el Campo Experimental Cotaxtla, en donde el experimento continúa en evaluación. Clave del proyecto: SAGARPA 2004-C01-217 Sistema Producto y/o línea estratégica de atención: mejoramiento fitogenético; papaya maradol Investigador: doctor ENRIQUE NOE BECERRA LEOR Institución: INIFAP-Veracruz