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CK-MB (NAC-act.) Método UV MANUAL RX MONZA PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio. PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de CK-MB en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador RX monza. La solución R1a contiene Azida Sódicas. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. No. Cat. CK 1296 R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa 1 x 70 ml 19 x 2.5 ml R1b. Enzima/Coenzimas/ Substrato/Anticuerpo 19 x 2.5 ml CONTROL 1 x 2 ml Las azidas sódicas reaccionan con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido sódico al 10%. CK 1553 5 x 20 ml Atención: Suero de Control El material de origen humano del que se deriva este producto ha sido analizado a nivel de donante para el anticuerpo del Virus de Inmunodeficiencia Humano (HIV 1, HIV 2), el Antígeno de Superficie de Hepatitis B (HbsAg), y el anticuerpo del Virus de Hepatitis C (HCV) y se ha encontrado que es NO-REACTIVO. Sin embargo, dado que ningún método puede ofrecer una seguridad total de la ausencia de agentes infecciosos, este material y todas las muestras de pacientes se deberán manejar como posibles transmisores de enfermedades infecciosas. R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa 1 x 105 ml R1b. Enzima/Coenzimas/ Substrato/Anticuerpo 5 x 20 ml CONTROL 2 x 2 ml SIGNIFICADO CLINICO(1) La Creatina Kinasa (CK) está aceptada internacionalmente como un indicador sensitivo y específico del infarto de miocardio agudo (AMI). Existen 3 tipos de iso-enzimas CK, CK-MM, CK-MB y CK-BB. El CK-BB lo produce el cerebro a partir del tejido del esqueleto y el corazón y el CK-MB se produce a partir del músculo del corazón. En la mayoría de los casos la actividad de CK aumenta durante las 6 horas posteriores a un infarto agudo. Los valores máximos se observan al cabo de unas 20 horas. La actividad de CK normalmente vuelve a su normalidad durante el cuarto o quinto día posterior al infarto. PRINCIPIO(3) Análisis de Inmunoinhibición: Se incorpora un anticuerpo en el reactivo CK. Este anticuerpo se unirá e inhibirá la actividad de la subunidad M de CK-MB. Esto significa que sólo se mide la actividad de la subunidad B en el suero. Si la actividad se multiplica por el factor 2, nos dará la actividad de la CK-MB en suero. MUESTRA Suero, plasma heparinizado o EDTA COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes Concentraciones en la Prueba R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa Tampón Imidazola 0.10 mol/l, pH 6.7 Glucosa 20 mmol/l Mg-acetato 10 mmol/l EDTA 2.0 mmol/l R1b. Enzima/Coenzimas/Substrato/Anticuerpo ADP 2.0 mmol/l AMP 5.0 mmol/l Pentafosfato de Diadenosina 10 µmol/l NADP 2.0 mmol/l HK ≥ 2.5 U/ml G-6-PDH ≥ 1.5 U/ml N-acetilcisteina 20 mmol/l Fosfato de Creatina 30 mmol/l Antibody to CK-M CONTROL Hojas de Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautes locales. Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas. ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C. R1b. Enzima/Coenzimas/Substrato/Anticuerpo Reconstituir un frasco de Enzimas/Coenzimas/ Substrato/Anticuerpo R1b con el volumen adecuado de Tampón/Glucosa R1a: 2,5 ml para el kit de 19 x 2,5 ml (CK 1296) 20 ml para el kit de 5 x 20 ml (CK 1553) Estable durante 21 días entre +2 y +8°C y 3 días entre +15 y +25°C. CONTROL Abrir un frasco de suero de control cuidadosamente, evitando la pérdida de material, y reconstituir en exactamente 2 ml de agua doblemente destilada. Cerrar el frasco y dejar reposar durante 15 minutos, disolver el contenido completamente agitando o rotando suavemente. La CK-MB es estable en suero durante 5 días entre +2 y + 8°C, 8 horas a +25°C y 4 semanas a -20°C cuando se congela sólo una vez. PAGE 1 OF 2 MANUAL/ RX MONZA CK 1296 CÁLCULO MANUAL MATERIAL SUMINISTRADO CK NAC/CK-MB Buffer/Glucose Enzimas/Coenzimas/Substrato/Anticuerpo Suero de control MATERIALES NECESARIO NO SUMINISTRADOS Control CKMB Randox No. (Cat. CK 1212) Control Cardíaco de Tres Niveles Randox, No. (Cat. CQ 3100 Nivel y Nivel 3) Randox CK-MB Calibración (Cat. No. CK 2393) NOTA DE PROCEDIMIENTO(4) La Macro-CK es una forma atípica de CK y se compone de complejos de Inmunoglobulina de Isonenzimas normales. Esta forma migra entre MM y MB y se observa principalmente en mujeres ancianas. Esto no tiene significación clínica, pero su presencia puede causar resultados falsamente elevados. Si se sospecha la contribución de Macro-CK se deberá confirmar su presencia por medio de electroforésis. PROCEDIMIENTO Antes de llevar a cabo el análisis para medir la actividad de la CKMB en suero, es necesario medir la actividad de la CK total utilizando el método NAC activado. PARA RX MONZA Seleccione CK-MB en la pantalla ejecutar prueba y lleve a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en tubos de ensayo: Blanc Reactivo S0 Patrón S1 Muestra 50 µl 500 µl 50 µl 500 µl 50 µl 500 µl Salino Patrón Muestra Reactivo Mezclar y aspirar en la Rx Monza. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda el uso de solución salina y el Calibrador Randox CKMB para calibración. Long. de onda CK-B (U/l) CK-MB (U/l) 340 nm Hg 334 nm Hg 365 nm 825 x ∆A 841 x ∆A 1486 x ∆A 1651 x ∆A 1683 x ∆A 2972 x ∆A El cambio de absorbancia por minuto (∆A/min) también se puede medir y la media de las 5 mediciones de deberá utilizar en el cálculo. Los factores a utilizar entonces serán:Longitud de onda CK-B (U/l) CK-MB (U/l) 4127 4207 7429 8254 8414 14858 ∆A 340 nm/min ∆A Hg 334 nm/min ∆A Hg 365 nm/min CONTROL DE CALIDAD Se recomienda para el control de calidad diario el Control de CKMB Randox o el Control Cardíaco de Tres Niveles Randox. Se deberán analizar dos niveles de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. INTERFERENCIAS La hemólisis interfiere con el análisis. RANGO DE REFERENCIA Infarto de Miocardio(MI) La probabilidad de daño del miocardio es elevado cuando se presentan los siguientes 3 factores:- PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición: 340 nm, Hg 334 nm o Hg 365 nm 1 cm de espesor 25°C, 30°C y 37°C frente al aire 25°C 30°C 37°C Semi-micro Macro 1 CKhombres >80 U/l1 >130 U/l2 >195 U/l* CKmujeres >70 U/l1 >110 U/l2 >170 U/l* 2 CK-MB >10 U/l1 > 16 U/l2 > 25 U/l* 3 una actividad de CK-MB entre 6 y 25% de la actividad CK total 0,04 ml 0,1 ml *Valores calculados 1,0 ml 2,5 ml Se puede sospechar un MI aunque los valores obtenidos sean inferiores a los límites especificados. Para confirmar si ha ocurrido un infarto reciente, el test se deberá repetir al cabo de 4 horas. Pipetear en la cubeta: Muestra Enzimas/Coenzimas/ Substrato/Anticuerpo Temperatura Mezclar, y dejar reposar a la temperatura apropiada durante 10 minutos. Después añadir a la cubeta, y leer la absorbancia A1. Leer la absorbancia A2 exactamente 5 minutos más tarde. ∆A = A2 - A1 Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia para reflejar la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. PAGE 2 OF 2 MANUAL/ RX MONZA CK 1296 CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador RX monza. LINEARIDAD El Anticuerpo inhibe hasta 2000 U/l de CK-MM. Este ensayo es linear hasta 2044 U/l de actividad CKMB. SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de CKMB con un nivel de precisión aceptable se determinó como 23,5 U/l. PRECISION Precisión Dentro del Análisis Nivel 1 Nivel 1 Mean (U/l) 136 161 SD 4.89 7.03 CV(%) 3.61 4.37 n 20 20 Precisión Total Mean (U/l) SD CV(%) n Nivel 1 136 6.83 5.04 20 Nivel 2 161 6.56 4.08 20 CORRELACION Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.0756 X - 18.799 con un coeficiente de correlación r = 0.9903 Se analizaron 43 muestras con valores de entre 34,4 y 1733 U/l. REFERENCIAS 1. Stein, W., Med. Weit 1985; 36: 572. 2. Szasz, G., and E. W. Busch. Paper presented at 3rd Eur. Congr. Clin. Chem., Brighton/England, June 1979; 3 - 8 (abstract). 3. Wurburg, U., et al., Clin. Chem. 1976; 54: 357. 4. Jacobs et al, The Laboratory Test Handbook, 2nd edition Revisado 29 July 11 bm Rev. 001 PAGE 3 OF 3