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UREA -S
Presentación
05409
2x 50ml
Reactivo para la determinación Enzimática
de Urea en suero, plasma y orina.
PRINCIPIO
La urea es el producto final mayoritario del metabolismo del
nitrógeno proteico en los seres humanos. Constituye la fracción
más abundante del nitrógeno no proteico. La urea se produce en
el hígado y es excretada por la orina. Su elevación es producto
de trastornos en la función renal o hepática, problemas dietéticos,
diabetes y otros.
PROCEDIMIENTO
Llevar el reactivo a la temperatura que se realizará el ensayo. Las
pipetas a utilizar deben estar limpias y libres de residuos para no
contaminar el reactivo.
Para la determinación de Urea en Orina, diluir la muestra de Orina
1:50 (0.1 ml Orina + 4..9 ml agua desmineralizada) Multiplicar el
resultado por 50.
La urea presente en la muestra, es desdoblada a amonio por
acción de la enzima ureasa, según la proposición de Faucet y
Scott.
(NH2)2CO + 2 H20
Código
UREASA
2NH3 + C02 + H20
El amonio producido reacciona con salicilato e hipoclorito en
ambiente alcalino, formándose un complejo de color verde. La
intensidad del color producido es directamente proporcional a la
cantidad de urea presente en la muestra, y su absorbancia se lee
a 578 nm (560-620).
PATRON
MUESTRA
Ureasa
50 µl
50 µl
50 µl
Reactivo
Salicilato
1 ml
1 ml
1 ml
Mezclar.
Patrón
--
10 ul
--
Muestra
--
--
10 ul
Incubar 3 minutos a 37ºC o 10 minutos a temperatura
ambiente.
CONTENIDOS
UREASA Suspensión
Ureasa
Estabilizantes y preservantes no reactivos
Reactivo
Hipoclorito
>50 mM
c.s.
Acido Salicílico
Nitroprusiato de Sodio
Tampón Fosfato pH 6.9
5 mM
5 mM
100 mmol/l
200 mM
10 mM
UREA
BUN
1 ml
1 ml
Leer las absorbancias a 578 nm (560–620nm) llevando a cero el
espectrofotómetro con el blanco de reactivo. El color resultante es
estable por lo menos 60 minutos.
REACTIVO HIPOCLORITO
Sodio Hidróxido
Sodio Hipoclorito
1 ml
Mezclar, incubar 5 minutos a 37ºC o 10 minutos a temperatura
ambiente.
REACTIVO SALICILATO
PATRON
Solución estabilizada equivalente a:
BLANCO
CÁLCULOS
66 mg/dl
30 mg/dl
SUERO, PLASMA u ORINA
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
•
Conservado entre 2°C y 8°C y protegido de la luz, estable
hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
•
Los reactivos contienen menos del 0.1% de azida sódica. La
azida sódica puede reaccionar con tuberías de cobre y plomo
formando compuestos explosivos. Las regulaciones locales
para el desecho de compuestos peligrosos deben ser
respetadas, descartar con abundante agua.
FACTOR =
____
66
_______
Absorbancia Estándar
Urea (mg/dl)= Factor x Abs. Muestra
CONCENTRACION DE UREA EN ORINA DE 24 HORAS
MATERIALES
ADICIONALES
REQUERIDOS
NO
SUMINISTRADOS
•
Baño termoregulado.
•
Espectrofotómetro o foto colorímetro de filtros capaz de medir
absorbancia a 578nm. (rango 560-620 nm)
•
Pipetas automáticas.
•
Cronometro y/o timer.
Urea en Orina = mg/dl en Orina X Vol. De Orina en 24 horas X 0.01
(mg / 24 horas)
NOTA: Para expresar los valores obtenidos como Nitrógeno Ureico
(mg/dl) multiplicar el valor obtenido por 0.455.
VALORES DE REFERENCIA
MUESTRAS
Suero, Plasma u Orina (diluida 1:100). El plasma debe obtenerse
utilizando anticoagulantes libres de amonio. No utilizar fluoruro
pues inhibe la acción de la enzima ureasa. La urea es estable en
el suero por lo menos 24 horas a temperatura ambiente, varios
días entre 2º y 8ºC, y hasta 3 meses a -20ºC.
La orina de 24 horas debe ser recogida en un frasco que
contenga 2.0 ml de Acido Clorhídrico (HCL) Solución al 50% y
centrifugar antes de su uso como muestra.
Suero o plasma:
Urea:
10 a 50 mg/dl
Nitrógeno Ureico: 4.5 a 22.7 mg/dl
Orina:
Urea:
15 a 30 mg/24 hrs
Nitrógeno Ureico: 7 a 14 mg/24 hrs
Nota: Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
intervalos de referencia.
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2007-06v4.0
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Reactivo para la determinación Enzimática
de Urea en suero, plasma y orina.
CONTROL DE CALIDAD
Pueden ser empleados todos los sueros con valores de Urea
determinados por este método. Nosotros recomendamos el uso
de nuestro suero de origen animal IHR Diagnóstica para verificar
la funcionalidad del procedimiento de medida. Cada laboratorio
debe establecer su propio programa de control de calidad interno,
así como procedimientos de corrección en el caso de que los
controles no cumplan con las tolerancias aceptables.
CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO
LINEARIDAD
La reacción es lineal hasta 300 mg/dl. Para valores superiores, diluir la
muestra con suero fisiológico y el resultado obtenido se multiplica por el
factor de dilución
REPETITIVIDAD
Concentración media
14 mg/dl
50 mg/dl
S.D.
0.41
1.63
C.V.%
2.83
3.25
REPRODUCIBILIDAD
Concentración media
14 mg/dl
50 mg/dl
S.D.
0.52
1.96
C.V.%
3.54
3.80
LIMITE DE DETECCION
El limite de detección fotométrica hallado fue 0.001 Abs equivalente a 0.2
mg/dl.
EXACTITUD
Una comparación entre este procedimiento y un reactivo similar usando
110 muestras entre 8.0 y 55 mg/dl produjo un ecuación de regresión lineal
de y= 1.00x -0.47 con un coeficiente de correlación (r) igual a 0.998.
INTERFERENCIAS
Valores elevados de hemoglobina hasta 80 mg/dl, Bilirrubina hasta 32
mg/dl, triglicéridos hasta 700mg/dl producen interferencias significativas
(<5%) en este método. Otros medicamentos y sustancias pueden
interferir4 .
BIBLIOGRAFÍA
1. Kaplan, A. and Teng, L.L. in Selected Methods of Clinical Chemistry, Vol. 9, Ed. By W.R. Faulkner and S. Meites,
AACC, Washington, pp 357-363 (1982).
2. Tietz, N.W., textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, p.1270-1271 (1986).
3. Morin, L.G., Clin. Chem. 20:51 (1974).
4. Henry, R.J., Clinical Chemistry, Principles and Technics. 2 Ed. Harper and Row Publisher. New York, 1974.
5 Young D.S., et al., Clin Chem. 21:1D 1975.
th
6.Young D.S. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4 Ed AACC, 1995
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