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CARACTERIZACIÓN FENO - GENOTÍPICA DE
AISLAMIENTOS DE Shigella flexneri ATÍPICOS
IDENTIFICADAS POR EL SISTEMA DE VIGILANCIA DE
DIARREAS EN ARGENTINA.
MR Viñas 1, SP Brengi1, CA Van der Ploeg 2, MI Caffer 1, XL Bordagorria 2, AD Rogé 2 , SB Bruno 2, E Tuduri 1, MF Galas 1 , M. Panagópulo 1, M Pichel 1
1‐Depto Bacteriología INEI‐ANLIS "Dr C.G.Malbrán", Argentina. 2‐ Instituto Nacional de Producción de Biológicos (INPB) ‐ ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”, Argentina VII Congreso de la Sociedad Argentina de
Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas –
SADEBAC
Buenos Aires- 26 al 29 de junio de 2012
Antecedentes
 Shigella spp. es agente causal de diarreas asociadas a
condiciones higiénicas deficientes. Transmisión de persona a
persona o por ingesta de alimentos contaminados o agua.
 En Argentina, entre los principales agentes bacterianos
asociados a diarrea. Datos de la Red de L de D y PTA, 2007–
2010, el serogrupo predominante fue S. flexneri (71,2%), siendo
el serotipo 2 el 51%.
 Desde 2009 el LRN observó un aumento de aislamientos de
S. flexneri que no pudieron ser clasificados dentro de los
serotipos reconocidos internacionalmente.
Vigilancia del LRN: S. flexneri atípicas: 1,7% en 2008 y 16% en 2009,
reconocidos por 1ra vez en tres provincias y luego en el resto del país
alcanzando un 30,4% en 2010.
OBJETIVOS
 Caracterizar feno-genotípicamente una selección de
aislamientos de S.flexneri atípicos emergentes en
Argentina y estudiar el comportamiento epidemiológico
de esta variante desde su reconocimiento en el país.
Materiales y Métodos
 Selección de 17 aislamientos de S. flexneri negativos para los
serotipos 1 al 6 entre 2007 y 2010 del LRN (n total = 306), y 3 aisl.
de S. flexneri 4a, 2 S. flexneri variante X y 3 S. flexneri variante Y.
 Caracterización por pruebas bioquímicas y molecular: PCR para
S. flexneri (gen rfc), serotipo 4 (gen gtr IV), factor grupal 7,8 (gen
gtrX) y para las enterotoxinas SHET-1 y SHET-2 (set1-b y sen). El
perfil de resistencia a antimicrobianos según CLSI.
 Pruebas de serotipificación con antisueros del (INPB)-ANLIS-“
Dr Carlos G. Malbrán” y de Denka-Seiken (DS). La producción del
antisuero AA479 por el INPB (2010) . Test con antisuero MASF IVI.
 Estudio de la diversidad genética por electroforesis en campo
pulsado ( PFGE , protocolo validado S. flexneri PulseNet ) y análisis
con software BioNumerics (Applied Maths)
Caracterización feno-genotípica de una selección de S. flexneri
atípicas?
Caracterización fenotípica
Car. genotípica PCR
Study of agglutination assay with: Biochemical assays:
S.
flexneri
Serotype
4a
Typing
S.
flexneri
IV sera
(INPB)
Typing
S.
flexneri
IV sera
(DS)
Grouping
+
+
+
3,4 sera
(INPB &
DS)
Grouping
6 sera
(INPB &
DS)
Grouping
7,8 sera
(INPB &
DS)
AA479
antisera
MASF
IV-1
antisera
-
-
-
-
4a
+
+
+
-
-
-
-
4a
+
+
+
-
-
-
-
Y
-
-
+
-
-
-
-
Y
-
-
+
-
-
-
NR
Y
-
-
+
-
-
-
-
X
-
-
-
-
+
-
-
X
-
-
-
-
+
-
-
“atypical”
-
+
-
-
+
+
NR
“atypical”
-
+
-
-
+
+
+
“atypical”
-
+
-
-
+
+
NR
“atypical”
-
+
-
-
+
+
+
“atypical”
-
+
-
-
+
+
+
“atypical”
-
+
-
-
+
+
+
“atypical”
-
+
-
-
+
+
NR
“atypical”
-
+
-
-
+
+
NR
“atypical”
-
+
-
-
+
+
NR
“atypical”
-
+
-
-
+
+
NR
“atypical”
-
+
-
-
+
+
+
“atypical”
-
+
-
-
+
+
+
“atypical”
-
+
-
-
+
+
+
“atypical”
-
+
-
-
+
+
+
“atypical”
-
+
-
-
+
+
NR
“atypical”
-
+
-
-
+
+
+
“atypical”
-
+
-
-
+
+
NR
Acetate / mannitol / Indol
‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ + / ‐ / + ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / + ‐ / + / ‐ ‐ / + / + ‐ / + / + ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐ ‐ / + / ‐
Results of PCR a ssays Resi stant
to:
gtrIV
gtrX
set1-B
S/S
+
-
-
-
S/S
+
-
-
+
R/R
+
-
-
+
S/S
-
-
+
+
S/R
-
-
+
+
S/S
-
+
-
-
R/R
-
+
-
+
R/R
-
+
-
+
R/R
-
+
-
-
R/R
-
+
-
+
R/R
-
+
-
+
R/R
-
+
-
+
R/R
-
+
-
+
R/R
-
+
-
-
S/S
-
+
-
+
R/R
-
+
-
+
R/R
-
+
-
+
R/R
-
+
-
+
R/R
-
+
-
+
R/R
-
+
-
+
R/R
-
+
-
+
R/R
-
+
-
+
R/R
-
+
-
+
R/R
-
+
-
+
-
+
AMP-SXT R / R +
sen
NR: no realizado Mab MASF IV-1, Dr Kaisar Talukder, icddr,Bangladesh
S. flexneri atípicas – análisis PFGE PFGE‐ NotI: relación genética de aislamientos de S. flexneri atípicos y cepas de serotipos variantes X, Y and tipo 4.
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
100
90
PFGE-NotI
80
70
PFGE-NotI
Isolate State Isolate Date NotI‐PFGE pattern S. flexneri serotype
SF461/10
Jujuy
2010-01-04
ARJZXN11.0019
Atypical
SF478/09
Neuquén
2009-07-01
ARJZXN11.0019
Atypical
SF564/09
Neuquén
2009
ARJZXN11.0019
Atypical
SF66/10
Jujuy
2009-11-20
ARJZXN11.0019
Atypical
2010
ARJZXN11.0022
Atypical
2009
ARJZXN11.0012
Atypical
SF1460/10 Río Negro
2010-04-10
ARJZXN11.0028
Atypical
SF612/10
Río Negro
2010-02-09
ARJZXN11.0028
Atypical
SF617/10
Río Negro
2010-02-13
ARJZXN11.0028
Atypical
SF493/09
Neuquén
2009-07-01
ARJZXN11.0010
Atypical
SF479/09
Neuquén
2009
ARJZXN11.0006
Atypical
SF571/09
Neuquén
2009
ARJZXN11.0007
Atypical
SF2080/09 Neuquén
2009
ARJZXN11.0033
Atypical
SF1241/10 Salta
SF412/09
Neuquén
SF730/09
Río Negro
2009-07-01
ARJZXN11.0026
X variant
SFB67X-1
ND
ND
ARJZXN11.0084
X variant
2009-07-01
ARJZXN11.0045
Atypical
SF1004/09 Tucumán
SF465/10
Jujuy
2010-05-05
ARJZXN11.0024
Atypical
SF294/09
Buenos Aires
2009
ARJZXN11.0080
Atypical
SF743/09
La Pampa
2009-07-01
ARJZXN11.0039
Atypical
SFB4a-1
ND
ND
ARJZXN11.0054
4a
SF472/09
La Pampa
SFB69Y-1
ND
ND
SF2029/09 Río Negro
SFB4a-6
ND
SF1944/06 . CABA
ARJZXN11.0046
Y variant
ARJZXN11.0072
Y variant
ARJZXN11.0133
Y variant
ND
ARJZXN11.0044
4a
2006
ARJZXN11.0136
4a
Resultados

En los 17 aislamientos S. flexneri atípicos , por serología
reacción positiva con el antisuero AA479 y resultados
discrepantes entre el antisuero de S. flexneri 4 del INPB
(negativo) y el antisuero IV de DS (positivo).

PCR como S. flexneri, ausencia del gen gtr IV y
presencia del gen gtrX y del gen de la toxina SHET-2 ( 15/17) y
no el de SHET-1. Patrón de resistencia : AMP/SXT (16/17).

PFGE : 12 subtipos genéticos de S. flexneri atípicos con
alta similitud y relacionados genéticamente a los subtipos de
S. flexneri variante X, confirmado por Optical-Mapping,y
diferentes a los de S. flexneri 4a y otros serotipos de S. flexneri
de la BDN .
Conclusiones y Desafios futuros

Los resultados sugieren la emergencia de una variante
de S. flexneri variante X, semejante a lo observado en
China (Ye et al, JCM 2010).

La relación genética determinada entre los aisl. señala su
diseminación. La distribución del antisuero AA479 a la
RD y PTA facilitó la detección de nuevos casos y brotes.

Se destaca la necesidad de evaluar y actualizar el
esquema vigente de serotipificación de Shigella
Acuerdos de estudio y grupos de trabajo en
“Shigella International Meeting”,Mayo, Bs As, Argentina

Fortalecer la vigilancia, diagnóstico , control y
prevención de las infecciones por Shigella spp.
Agradecimientos
•
Laboratorios de la Red de D y PTA , Laboratorios de la
Red WHONET ( Proyecto Midas: Harvard Medical
School, Brigham & Women’s Hospital, Department of
Population Medicine; Martin Kulldorff, Katherine Yih, Tom
O’Brien, John Stelling ) .
•
Dra Norma Binsztein
•
Dr Kaisar Talukder, icddr,Bangladesh