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Biopelícula: una nueva forma de ver la placa Unidades de formación continua de Pamela R. Overman, doctora en Pedagogía e higienista dental registrada: 2 horas Este curso de formación continua está dirigido a dentistas generales, higienistas y asistentes dentales. El principal objetivo de aprendizaje de este curso es aumentar sus conocimientos generales sobre las distintas formas que los profesionales odontológicos han visto la placa a lo largo de los años, destacando la visión actual de la placa como una biopelícula y las ramificaciones para la terapia periodontal. Declaración de divulgación de conflictos de intereses La autora ha realizado una labor de consultoría para P&G. CERP de la ADA La empresa Procter & Gamble es un proveedor reconocido del CERP de la ADA. El CERP de la ADA es un servicio de la Asociación Dental Americana para ayudar a los profesionales de la odontología en la identificación de los proveedores de calidad en formación odontológica continua. El CERP de la ADA no aprueba ni respalda cursos o instructores individuales, ni tampoco implica la aceptación de horas de créditos por parte de comités de odontología. Las preocupaciones o quejas acerca del proveedor de FC se pueden dirigir al proveedor o al CERP de la ADA en: http://www.ada.org/prof/ed/ce/cerp/index.asp Información general Durante los últimos 120 años, los investigadores en odontología han tratado de entender la naturaleza microbiana de las enfermedades orales. Su visión de la placa y de los microorganismos que la constituyen ha cambiado desde una hipótesis de la placa específica a una hipótesis de la placa inespecífica, y de nuevo a una teoría de patógenos periodontales específicos situados en la placa. Los cambios en la forma en que se ven la placa y sus microorganismos afectan a las estrategias utilizadas para prevenir y controlar las enfermedades periodontales. En estos últimos años, los investigadores en odontología han empezado a ver la placa como una biopelícula. Este cambio en la forma de ver la placa tiene implicaciones importantes para los futuros esfuerzos en prevención y tratamiento. Este curso aborda las diferentes formas en las que 1 ® Oral-B en el curso de formación continua de dentalcare.es, revisado a 23 de septiembre de 2010 ed_ce42_ES.indd 1 24/09/2013 6:34 PM los profesionales de la odontología han visto la placa a lo largo de los años, destacando la visión actual de la misma como una biopelícula y las repercusiones para el tratamiento periodontal. Objetivos del aprendizaje Al acabar este curso, el profesional de la odontología debe ser capaz de: • Establecer una definición de biopelícula. • Comentar los aspectos positivos y negativos de la formación de biopelículas en la naturaleza. Incluir ejemplos de cómo las biopelículas resultan ventajosas o perjudiciales. • Comparar y contrastar los diferentes puntos de vista de la placa bacteriana en tres momentos en el tiempo: 1880-1930; 1930-1960; y de 1960 hasta la época actual • Comparar y contrastar el comportamiento de las bacterias que crecen en placas de cultivo con el de las que crecen en las biopelículas. • Describir estrategias que se utilizan en la actualidad para controlar la biopelícula oral. • Enumerar las estrategias que se están considerando para controlar las biopelículas orales. Contenidos del curso • • • • • • • • • que las bacterias específicas que residen en las placas intraorales son causa necesaria pero no suficiente de la enfermedad. No está completamente clara la forma exacta mediante la que estos microorganismos que habitan en la placa (Figura 2) causan las enfermedades orales. La forma en que se ve la placa dental y sus microorganismos residentes viene determinada por las herramientas analíticas que se utilizan para estudiarla. Por lo tanto, esto influye en las estrategias empleadas para controlar y prevenir las enfermedades dentales.3 Durante las últimas dos décadas los nuevos métodos científicos han cambiado la forma en que se ve la placa dental, de modo que ahora, los científicos de la odontología la ven como una biopelícula.1 Introducción Biopelícula Cambio del punto de vista de la placa La placa como una biopelícula Nuevas fronteras Resumen Prueba del curso Bibliografía Acerca del autor Introducción A pesar de los grandes esfuerzos invertidos por los profesionales de la salud dental, las infecciones orales siguen estando muy extendidas. El adulto medio de los EE. UU. tiene de entre 10 y 17 dientes con caries, ausentes o con rellenos permanentes.1 La mayoría de la población de los EE. UU. sufre gingivitis, con una menor proporción de la población que sufre enfermedad periodontal entre moderada y grave (Figura 1).2 Biopelícula Una biopelícula es una comunidad de microorganismos bien organizada y cooperativa.4,5 La capa fangosa que se forma sobre las rocas de los arroyos es un ejemplo clásico de biopelícula (Figura 3a). También lo es la placa que se forma Hay un reconocimiento universal de que estas infecciones orales son multifactoriales, de modo Figura 2. Microorganismos que habitan en la placa Microorganismos orales de la placa dental mostrando la estructura típica en «mazorca de maíz» de las bacterias. Figura 1. Gingivitis 2 ® Oral-B en el curso de formación continua de dentalcare.es, revisado a 23 de septiembre de 2010 ed_ce42_ES.indd 2 24/09/2013 6:34 PM en la cavidad oral. Las biopelículas están en todas partes en la naturaleza. Se forman en medios líquidos. Se calcula que más del 95 por ciento de las bacterias existentes en la naturaleza están en biopelículas5 Algunas veces las biopelículas se ven de forma positiva, como su uso para la detoxificación de las aguas residuales y del alcantarillado. Con mayor frecuencia, las biopelículas representan un desafío para los seres humanos.3,5 Las biopelículas también se pueden encontrar revistiendo los oleoductos, tanques de peces, catéteres permanentes, implantes internos, lentes de contacto y prótesis (Figura 3b). Las biopelículas son responsables de la mayoría de las infecciones de los humanos.6 Ocasionalmente, las biopelículas son mortales. La legionelosis que mató a 29 personas en Filadelfia en 1976 se atribuyó en última instancia a las bacterias de la biopelícula del sistema de aire acondicionado. Cada año se gastan millones de euros trabajando para controlar estas biopelículas.3,7 Algunas veces las biopelículas se ven de forma positiva, como su uso para la detoxificación de las aguas residuales y del alcantarillado. Con mayor frecuencia, las biopelículas representan un desafío para los seres humanos.3,5 La capa fangosa que se forma en los conductos de agua de las consultas de odontología son un ejemplo conocido para la mayoría de los profesionales de la odontología. Cambio de la forma en que se ve la placa En 1996, el Instituto Nacional de Investigación Dental y Craneofacial (NIDCR) organizó una conferencia internacional sobre ecología microbiana. Esta reunión centró su atención en una nueva forma de ver la placa como una biopelícula. La conferencia puso de manifiesto la importancia de este cambio en el pensamiento acerca de la placa dental y su función en las enfermedades orales.1 Esta no es la primera vez en la historia en la que los profesionales de la odontología han cambiado su forma de pensar acerca de la placa. Durante los últimos 120 años, la forma de ver la placa dental ha sufrido diversos cambios. El periodo comprendido entre 1880 y 1930 se denominó la "edad de oro de la microbiología" (Figura 4).8 Durante este periodo, se identificaron los patógenos que causaban muchas infecciones sistémicas de relevancia médica. Los investigadores también buscaron una causa única y específica de las enfermedades orales. Asumiendo que la placa contenía el microorganismo que ocasionaba la enfermedad periodontal, los científicos de la odontología estudiaron la placa en busca del agente causante. Utilizando las técnicas disponibles en aquel momento (montajes húmedos o microscopía de frotis teñidos), los científicos identificaron cuatro grupos diferentes de agentes etiológicos potenciales para las enfermedades periodontales. Se aislaron Figura 3a. Formación de biopelícula en la superficie de la roca Figura 3b. Biopelícula hallada en el equipamiento dental Patógenos específicos identificados para varias enfermedades Hipótesis de la placa inespecífica Hipótesis de la placa específica Empieza la búsqueda de patógenos orales en la placa Enfermedades ligadas a defectos constitutivos Tratamiento orientado al agente causante BIOPELÍCULA Biopelícula La Edad de Oro Control de la microbiología de la placa Figura 4. Cambio en los puntos de vista de la placa y de las enfermedades periodontales (1880 - 1930). 3 ® Oral-B en el curso de formación continua de dentalcare.es, revisado a 23 de septiembre de 2010 ed_ce42_ES.indd 3 24/09/2013 6:34 PM Patógenos específicos identificados para varias enfermedades Hipótesis de la placa inespecífica Hipótesis de la placa específica Empieza la búsqueda de patógenos orales en la placa Enfermedades ligadas a defectos constitutivos Tratamiento orientado al agente causante BIOPELÍCULA Biopelícula La Edad de Oro Control de la microbiología de la placa Figura 5. Cambio en los puntos de vista de la placa y de las enfermedades periodontales (1930 - 1960). Patógenos específicos identificados para varias enfermedades Hipótesis de la placa inespecífica Hipótesis de la placa específica Empieza la búsqueda de patógenos orales en la placa Enfermedades ligadas a defectos constitutivos Tratamiento orientado al agente causante BIOPELÍCULA Biopelícula Control La Edad de Oro de la placa de la microbiología Figura 6. Cambio en los puntos de vista de la placa y de las enfermedades periodontales (1960 - 2000). amebas, espiroquetas, fusiformes y estreptococos de pacientes con enfermedades periodontales y, por tanto, se sugirieron como posibles etiologías. Los tratamientos periodontales de aquella época variaban de acuerdo con los agentes causantes de los que se sospechaba e incluían tintes, la administración sistémica de preparaciones antimicrobianas que contenían arsénico, la inyección intramuscular de mercurio, así como 9 vacunas. La década de 1930 marcó el comienzo de una forma distinta de ver la función de la placa y de sus microorganismos en la etiología de la enfermedad periodontal (Figura 5). Los científicos de la odontología creían que la enfermedad periodontal estaba ligada a algún defecto constitutivo del individuo.9 También se creía que los irritantes mecánicos, como los Sarros, y las restauraciones sobresalientes, desempeñaban un papel importante en la patogénesis de la enfermedad periodontal.10 Figura 7. Imagen de microscopía electrónica de barrido (SEM) de la placa dental madura humana, demostrando la formación de las mazorcas de maíz. Barra = 10 micras a 2.020 aumentos del original. Imagen por cortesía del Dr. Charles Cobb. Universidad de la Ciudad de Missouri-Kansas de la placa se veía como esencial para limitar la producción de irritantes gingivales que conducían a la inflamación y a la destrucción perdiodontal.11 La identificación de microorganismos específicos no era importante. El control riguroso de la placa era importante, y se convirtió en el centro del tratamiento periodontal. La creencia de que había un solo agente microbiano que ocasionaba la enfermedad periodontal se sustituyó por teorías de la placa inespecífica.9 La hipótesis de la placa inespecífica sostenía que, en lugar de bacterias específicas, toda la flora bacteriana de la placa desempeñaba un papel en la destrucción periodontal. Toda la placa se veía como placa mala. Además, más placa significaba más enfermedad. El control La década de 1960 marcó un regreso a las hipótesis de la placa específica (Figura 6). Los investigadores tuvieron éxito al demostrar que la enfermedad periodontal se podía transmitir entre hámsters.12 El microscopio electrónico confirmó 4 ® Oral-B en el curso de formación continua de dentalcare.es, revisado a 23 de septiembre de 2010 ed_ce42_ES.indd 4 24/09/2013 6:34 PM organisms, and the large number of possible periodontal pathogens that may be found and cultivated from a periodontal pocket. La toma de muestras es más complicada debido al hecho de que las cavidades periodontales contienen no solo patógenos, sino también especies oportunistas. Otras dificultades en la localización de los patógenos periodontales están relacionadas con la naturaleza de las propias enfermedades periodontales. En primer lugar, la enfermedad periodontal no es una sola enfermedad, sino un conjunto de diferentes enfermedades. En segundo lugar, estas enfermedades producen periodos de actividad e inactividad de la enfermedad y variaciones en la actividad de la misma en puntos diferentes en un mismo individuo. Una dificultad final en la identificación de patógenos periodontales específicos es la variación en la 16 respuesta individual del huésped. que había espiroquetas en el tejido conectivo y epitelial de los pacientes con gingivitis ulcerativa necrosante aguda en comparación con los controles sanos.13 Creyendo que había diferencias en la placa producida por diferentes especies, los científicos volvieron de nuevo a la búsqueda de un patógeno periodontal microbiano específico y del tratamiento dirigido al agente causal.9 A pesar de estos retos, los investigadores actuales siguen estando de acuerdo en que las enfermedades periodontales son infecciones causadas por patógenos específicos. Recientemente, la atención se ha fijado en Tannerella forsythensis (anteriormente conocida como Bacteroides forsythus), así como en Porphyromonas gingivalis y Actinobacillus actinomycetemcomitans como principales patógenos en la mayoría de las infecciones periodontales con una evidencia moderada vinculando a otro subconjunto de microorganismos (C. rectus, E. nodatum, F. nucleatum, P. intermedia/nigrescens, P. micros, S. intermedium y T. denticola) como posibles patógenos.14,17 Los investigadores están trabajando para desarrollar pruebas diagnósticas para la detección y tratamientos diseñados para atacar a los patógenos periodontales. Se ha propuesto la administración Los métodos más novedosos de análisis microbiológico, tales como la microscopía de campo oscuro, la microscopía electrónica de transmisión, la microscopía electrónica de barrido, las pruebas de ADN, la hidrólisis BANA y el inmunoensayo, ayudaron en la búsqueda.14 Since that time, scientists have continued to search for the specific etiologic agent with mixed success. Haffajee and Socransky15 have detailed the reasons for the difficulties in pinpointing specific pathologic agents. Some of these difficulties are related to microbial sampling and culturing and include: obtaining a sample from a periodontal pocket, the difficulty cultivating some 5 ® Oral-B en el curso de formación continua de dentalcare.es, revisado a 23 de septiembre de 2010 ed_ce42_ES.indd 5 24/09/2013 6:34 PM Figura 8. Representación artística de la biopelícula de la placa La placa como una biopelícula Con anterioridad, las bacterias se habían estudiado a medida que crecían en colonias sobre las placas de cultivo del laboratorio. Una microscopía más nueva y sofisticada, tal como el láser confocal de barrido y la microscopía de excitación de dos fotones, ha permitido examinar 5,19 las biopelículas en sus estados naturales. Los microorganismos de la biopelícula se comportan de forma diferente a las bacterias en un medio de cultivo (véase la Tabla 1). Figura 9. Canales de líquido Vistas a través de un microscopio, las bacterias de una biopelícula no se distribuyen de manera uniforme. Están agrupadas en microcolonias rodeadas por una matriz intermicrobiana envolvente (Figura 8). La matriz de la biopelícula está atravesada por canales de líquido que conducen el flujo de nutrientes, productos de desecho, enzimas, metabolitos y oxígeno. Las microcolonias del interior de la biopelícula tienen microambientes con diferentes valores de pH, disponibilidad de nutrientes y concentraciones de oxígeno (Figura 9). Las bacterias de una biopelícula se comunican entre ellas mediante el envío de señales químicas (Figura 10). Estas señales químicas provocan que las bacterias produzcan proteínas y enzimas potencialmente dañinas, factores de virulencia que ayudan a que la biopelícula intraoral eluda los sistemas de defensa del huésped.5,6 Figura 10. Las bacterias de la biopelícula se comunican mediante el envío de señales químicas. de antibióticos sistémicos, como la amoxicilina, metronidazol, tetraciclina, doxiciclina y Augmentine.15 También se ha introducido la administración local de agentes antimicrobianos (fibras de tetraciclina, metronidazol y geles de minociclina, chips de clorhexidina y polímero de doxiciclina).18 Al tiempo que estos enfoques han mejorado nuestra capacidad para tratar las enfermedades periodontales, siguen aún sin poder proporcionar un éxito uniforme. El hecho de ver la placa como una biopelícula promete ayudar en el esfuerzo de tratar de forma eficaz la enfermedad periodontal. Nuestros intentos anteriores de predecir y controlar las enfermedades periodontales se han basado en el funcionamiento de las bacterias 6 ® Oral-B en el curso de formación continua de dentalcare.es, revisado a 23 de septiembre de 2010 ed_ce42_ES.indd 6 24/09/2013 6:34 PM cultivadas en condiciones de laboratorio.1,5 Una mayor comprensión de las biopelículas ha supuesto grandes diferencias entre el comportamiento bacteriano en cultivo en el laboratorio y en sus ecosistemas naturales. Por ejemplo, las bacterias de la biopelícula producen compuestos en el interior de esta que no producen cuando se las cultiva. Por otro lado, la matriz de la biopelícula que rodea las microcolonias sirve como barrera protectora. Esto ayuda a explicar por qué los agentes antimicrobianos administrados de forma sistémica y local no siempre han demostrado tener éxito, incluso cuando se dirigían a microorganismos específicos. Un investigador ha estimado que puede ser necesario tomar 1.000 veces más la cantidad del fármaco para matar a un microorganismo de la biopelícula que para matar al mismo microorganismo en un entorno de flotación libre o planctónico.20 La matriz protectora de la biopelícula también ayuda a explicar por qué el control mecánico de la placa y la higiene oral personal han seguido siendo una parte integrante del tratamiento periodontal.17,21 Las biopelículas se pueden eliminar por medios mecánicos. Sin 7 ® Oral-B en el curso de formación continua de dentalcare.es, revisado a 23 de septiembre de 2010 ed_ce42_ES.indd 7 24/09/2013 6:34 PM embargo, se empiezan a formar inmediatamente, de modo que la investigación sigue en busca de formas de combatir las biopelículas. para la biopelícula subgingival, el control del FCG se puede emplear en el futuro para controlar la biopelícula subgingival. La utilización de agentes antiinflamatorios no solo puede ayudar a inhibir las rutas destructivas del huésped, sino que también puede reducir el aporte de nutrientes del FCG para la comunidad de la biopelícula. En la actualidad, el NIDCR está apoyando la investigación en esta área con el objetivo de crear nuevos tratamientos para el futuro.1 Nuevas fronteras Los investigadores especializados en odontología están buscando nuevas tecnologías para combatir la biopelícula. Un enfoque es interferir en la señalización entre las bacterias de la biopelícula de modo que no se puedan comunicar entre ellas. Otra táctica es imitar las defensas naturales desarrolladas por las criaturas del océano, como las ballenas y los delfines, que no acumulan biopelículas bacterianas.5 Los investigadores de la odontología también están buscando nuevas estrategias para controlar las biopelículas orales1,22 (ver Tabla 2). Resumen Durante los últimos 120 años, los investigadores del área de la odontología han tratado de entender la naturaleza microbiana de las enfermedades orales. La visión de la placa y de sus microorganismos constituyentes ha cambiado desde una hipótesis de la placa específica a una hipótesis de la placa inespecífica, y de nuevo a una teoría de patógenos periodontales específicos situados en la placa.Recientemente, los investigadores del área de la odontología han empezado a ver la placa como una biopelícula. La naturaleza de una biopelícula ayuda a explicar por qué las enfermedades periodontales han sido tan difíciles de prevenir y tratar. Una mejor comprensión de la biopelícula conducirá a nuevas estrategias para el tratamiento de estas enfermedades generalizadas. La variación de la concentración de oxígeno, el pH y la disponibilidad de nutrientes en la placa se ha visto que modula la microflora de la misma biopelícula y puede resultar útil. Por ejemplo, los patógenos periodontales necesitan un potencial redox bajo para su crecimiento. Añadir un agente redox, como el azul de metileno, a las cavidades periodontales ha 24 mostrado inhibir el crecimiento de P. Gingivalis. Puesto que el aumento en el flujo crevicular gingival (FCG) incrementa el aporte de nutrientes 8 ® Oral-B en el curso de formación continua de dentalcare.es, revisado a 23 de septiembre de 2010 ed_ce42_ES.indd 8 24/09/2013 6:34 PM Para recibir créditos de formación continua por este curso, debe realizar la siguiente prueba en línea. Vaya a www.dentalcare.es y encuentre este curso en la sección de formación continua. Vista preliminar de la prueba del curso 1. Una biopelícula es _______________. a. un conjunto disperso de bacterias que flotan libremente b. un conjunto calcificado de bacterias que no se puede eliminar con facilidad c. una película translúcida y homogénea de células que cubre las superficies húmedas d. una comunidad bien organizada y cooperativa de microorganismos 2. Un uso positivo de la biopelícula es _______________. a. detoxificación de los productos de desecho de origen humano b. recubrimiento de catéteres permanentes c. revestimiento de acuarios d. capa de los conductos de agua de los centros odontológicos 3. La hipótesis de la placa específica soportaría la siguiente creencia: a. «Cuanta más placa hay, más enfermedad». b. «Todas las bacterias situadas en la placa contribuyen a la gingivitis y a la periodontitis». c. «El Sarro juega un papel importante en la causa de la periodontitis». d. «La presencia de la placa bacteriana es necesaria para desarrollar la enfermedad periodontal, pero no es suficiente para asegurar la enfermedad». 4. En la actualidad los investigadores creen que todas las bacterias siguientes juegan un papel como patógenos periodontales EXCEPTO: a. T. pallidum b. P. gingivalis c. A. actinomycetemcomitans d. B. forsythus 5. Los científicos han tenido dificultades para identificar los patógenos periodontales específicos debido a que _______________. a. las cavidades periodontales contienen tanto patógenos como no patógenos b. las diferentes bacterias de las cavidades periodontales requieren diferentes medios de cultivo c. la enfermedad periodontal pasa por periodos de actividad y de quiescencia d. Todas las anteriores. 6. Para estudiar las biopelículas, los científicos han utilizado las técnicas de microscopía más modernas, tales como _______________. a. microscopía de montaje húmedo b. microscopía electrónica de barrido c. microscopía confocal láser de barrido d. microscopía del frotis 7. ¿Cuál de las siguientes características es típica de las bacterias de una biopelícula? a. Las bacterias se comunican entre ellas mediante el envío de señales químicas. b. Las bacterias se dispersan por la placa de un modo más o menos uniforme. c. El ambiente que rodea a las bacterias está formado por el mismo valor de pH o por valores similares. d. Las bacterias existen en forma aislada unas de otras. 9 ® Oral-B en el curso de formación continua de dentalcare.es, revisado a 23 de septiembre de 2010 ed_ce42_ES.indd 9 24/09/2013 6:34 PM 8. Dada la naturaleza de las bacterias de la biopelícula, ¿qué técnicas pueden ser útiles en el control de las biopelículas orales? a. Evitar que las bacterias se comuniquen entre sí. b. Evitar el flujo de líquido entre las microcolonias de las bacterias de una biopelícula. c. Cambiar la concentración de oxígeno con los microambientes de la biopelícula. d. Todas las anteriores. 9. ¿Cómo puede la formación de la biopelícula subgingival proteger a los agentes patógenos periodontales de la administración local de agentes antimicrobianos? a. La biopelícula evita que el agente antimicrobiano penetre en la cavidad periodontal. b. La matriz de la biopelícula sirve como barrera protectora. c. Los canales de líquido de la biopelícula dirigen al agente antimicrobiano hacia el exterior de la cavidad. d. La biopelícula cambia el pH del agente antimicrobiano y lo inactiva. 10. Las posibles nuevas estrategias para controlar las biopelículas orales incluyen todas las siguientes EXCEPTO: a. Control de las fuentes de alimento de la biopelícula. b. Alteración del pH del interior de las microcolonias de la biopelícula. c. Variación de la concentración de oxígeno dentro de la biopelícula. d. Adición de antibióticos sistémicos. 10 ® Oral-B en el curso de formación continua de dentalcare.es, revisado a 23 de septiembre de 2010 ed_ce42_ES.indd 10 24/09/2013 6:34 PM References 1. Slavkin HC. Biofilms, microbial ecology and Antoni Van Leeuwenhoek. J Am Dent Assoc 1997;128: 492-495. 2. Douglass C, Fox C. Cross-sectional studies in periodontal disease: Current status and implications for dental practice. Adv Dent Res 1993;7: 25-31. 3. DuPont GA. Understanding dental plaque; biofilm dynamics. 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Aporta al programa una gran experiencia en ayudar a los médicos a realizar la transición a sus funciones como nuevo facultativo. La Dra. Overman se graduó en Higiene Dental en la Facultad de Odontología de la UMKC, obtuvo su título de máster en la Facultad de Estudios de Posgrado de la UMKC, y en 2001 se doctoró en Política Educativa y Liderazgo en la Universidad de Kansas. Su servicio profesional ha incluido numerosos cargos de liderazgo nacional, incluyendo la presidencia de los Directores de Higiene Dental Nacional de la ADEA (Asociación Educativa Dental Americana), la presidencia del Consejo de Directores del Programa Aliados de la ADEA, y del Comisionado de Acreditación Dental de la Asociación Americana de Higienistas Dentales. Actualmente es presidenta electa de la Sección de Asuntos Académicos de la ADEA, así como revisora de las revistas Journal of Contemporary Dental Practice, Journal of Dental Education y Journal of Dental Hygiene. Correo electrónico: [email protected] 12 ® Oral-B en el curso de formación continua de dentalcare.es, revisado a 23 de septiembre de 2010 ed_ce42_ES.indd 12 24/09/2013 6:34 PM