Download ALPS Síndrome Linfoproliferativo Autoinmune

ALPS
Síndrome Linfoproliferativo Autoinmune
Residencia de Inmunología para Bioquímicos.
Bioq. M. Silvana Bertone
Bioq. Lorena Zanella
Apoptosis en la fisiología animal
Embriogénesis – Desarrollo
Homeostasis
Eliminación de tejidos dañados o infectados
Regulación del Sistema Inmune
Homeostasis Linfocitaria
Desarrollo del repertorio inmune
- Selección positiva; “death by neglect”
- Selección negativa
Mantenimiento de células quiescentes en periferia
Expansión de clones antígeno específicos
Memoria inmunológica
Muerte Celular
Necrosis
Apoptosis
Definición
Muerte accidental
Muere celular Programada
Estímulo
Injuria directa
Mediada por sensores externos e
internos
Desintegración de organelas
Pérdida de integridad de la
membrana
Organelas sin lesiones específicas
Membrana celular intacta
Condensación citoplasmática y nuclear.
Tamaño/Vol. celular
-/Aumentado
Esférica/Disminuido
Destino
Lisis celular
Fagocitosis de cuerpos apoptótico
(Translocación de PS hacia el exterior)
Liberación de enzimas lisosomales
Daño tisular y respuesta
inflamatoria
Sin respuesta inflamatoria
Sin gasto de energía
Procesos dependientes de energía
Requiere nueva expresión de genes
No asociado
Asociado
Degradación del DNA al azar
Fragmentación del DNA no al azar en
mono- y oligonucleosomas
Integridad Celular
Inflamación
Gasto Energético
Ciclo Celular
DNA
Necrosis - Apoptosis
Vías de la Apoptosis
Vía Extrínseca:
Receptores de Muerte
Vía no secretoria
Vía Intrínseca:
Mitocondrial
Vía secretoria
Exocitosis de gránulos:
Granzimas y perforinas
Vía Extrínseca:
Receptores de Muerte: FAS - FASL
CASPASAS
DISC
Gen Fas
Vía Intrínseca:
Mitocondrial
Apoptosis – Vías Intrínseca y Extrínseca
Síndrome Linfoproliferativo autoinmune (ALPS).
Aspectos Históricos
• 1967: Canale y Smith describieron cinco pacientes con linfoproliferación no
maligna crónica (linfoadenopatía, esplenomegalia), citopenias autoinmunes y ↑
de γ globulinas.
•1992: Sneller et al observó que estos pacientes además tenían una población de
células T con fenotipo CD3+ CD4- CD8- (DN) TCR αβ+ aumentada.
• En el mismo año, Watanabe- Fukunaga et al reconocen la conección entre estos
pacientes y un modelo de ratón (mutantes lpr y gld ), los cuales no expresaban en
la superficie celular CD95 o Fas, receptor responsable de la apoptosis de
linfocitos activados.
• 1995: Fisher et al , Rieux-Laucat et al demostraron en un grupo de pacientes
con el síndrome clínico, defectos en apoptosis de linfocitos y mutaciones en Fas
• 1999: Strauss et al propone una definición de la enfermedad.
Criterios Diagnósticos de ALPS
Requeridos:
• Acumulación crónica de LT no malignos. (linfoadenopatía +/- esplenomegalia).
•Mayor a 2% de células T CD3+ CD4- CD8- (DN) TCR αβ+ en sangre periférica o
cortes histológicos.
Generalmente presentes:
• Autoanticuerpos y autoinmunidad
Datos adicionales que apoyan al diagnóstico:
•Historia familiar de ALPS.
•Ensayo de Apoptosis in vitro mediada por Fas defectuosa
• Hallazgos típicos histopatológicos en nódulos linfáticos o tejido linfoide
•Linfoma
Diagnóstico Definitivo
• Mutaciones en genes que codifican proteínas de vía de apoptosis
Características Clínicas
Linfoproliferación
•Proliferación no maligna de linfocitos (100%)
•Linfoadenopatías (87%)
•Esplenomegalia (90%)
•Hepatomegalia (75%)
Autoinmunidad
•Anemia hemolítica autoinmune (53%)
•Trombocitopenia/ Neutropenia autoinmune (31-44%)
•Glomerulonefritis (8%)
•Hepatitis autoinmune (6%)
Neoplasias
•Linfomas (Hodgkin y no Hodgkin) (9%)
•Carcinomas (tiroides, piel, hígado) (6%)
Clasificación
TIPO
ALPS 0
MUTACIÓN
Deficiencia completa de Fas
EDAD PRESENT./
SEVERIDAD
Prenatal/Severo
Clasificación
TIPO
MUTACIÓN
EDAD PRESENT./
SEVERIDAD
ALPS 0
Deficiencia completa de Fas
Prenatal/Severo
ALPS Ia
TNFRSF6 (Fas)
Infancia/ Moderado-Severo
Clasificación
TIPO
MUTACIÓN
EDAD PRESENT./
SEVERIDAD
ALPS 0
Deficiencia completa de Fas
Prenatal/Severo
ALPS Ia
TNFRSF6 (Fas)
Infancia/ Moderado-Severo
ALPS Ib
TNFSF6 (Fas L)
Adultez/LES
Clasificación
TIPO
MUTACIÓN
EDAD PRESENT./
SEVERIDAD
ALPS 0
Deficiencia completa de Fas
Prenatal/Severo
ALPS Ia
TNFRSF6 (Fas)
Infancia/ Moderado-Severo
ALPS Ib
TNFSF6 (Fas L)
Adultez/LES
ALPS II
Caspasa 8 o Caspasa 10
Infancia/ Moderado
Clasificación
TIPO
MUTACIÓN
EDAD PRESENT./
SEVERIDAD
ALPS 0
Deficiencia completa de Fas
Prenatal/Severo
ALPS Ia
TNFRSF6 (Fas)
Infancia/ Moderado-Severo
ALPS Ib
TNFSF6 (Fas L)
Adultez/LES
ALPS II
ALPS III
Caspasa 8 o Caspasa 10
?
Infancia/ Moderado
Infancia/ Moderado
Laboratorio en ALPS
Hallazgos Hematológicos
• Linfocitosis, frecuentemente asociada con linfocitos atípicos en el frotis.
• Anemia, con o sin hemólisis.
• Deficiencia de Hierro.
• Reticulocitosis.
•Trombocitopenia/ Neutropenia
• Algunos pacientes presentan eosinofília.
Perfiles químicos
• Generalmente normal.
• Enzimas hepáticas ↑.
• Bilirrubina conjugada ↑.
• Colesterol ↑.
• Albúmina ↓
Laboratorio en ALPS
Perfil Inmunológico:
• Expansión policlonal de células T CD3+ CD4- CD8- (DN) TCRα
α/β
β+
• ↑expresión de marcadores de activación HLA DR+, CD57+.
• ↓ células TCD4+/CD25+ (T regulatoria).
• ↓ células B CD20+/CD27+ (B Memoria).
• IgG, IgA, IgE ↑, IgM N o ↓ .
• Autoanticuerpos: Anticardiolipina y test Coombs directo o indirecto (+), Anticuerpos antiplaquetas, anti- neutrófilos, FAN, FR generalmente positivos.
• Complemento N (salvo paciente ALPS Ib).
0.2%
33.7%
Ensayo de inducción de Apoptosis in vitro vía Fas
DIA 0: -Obtención de sangre heparinizada en condiciones estériles (paciente y
-S
control normal del día).
-Separación de CMNT por gradiente de Ficoll-Hypaque.
-S
-C
-Cultivo con fitohemaglutinina (PHA), en estufa gaseada 2 días
DIA 3: -Agregado de IL-2
DIA 6 y 8:Renovación del medio de cultivo
DIA 9: -Agregado del Ac. monoclonal Anti Fas (simulando ser FasL) en distintas
concentraciones y por duplicado. Incubación de 1h en estufa gaseada
G
-Agregado del segundo Ac. Monoclonal RAMIG
DIA 10: - Medición del % de núcleos apoptóticos por Citometría de Flujo después
del tratamiento con solución hipotónica de Ioduro de Propidio (IP).
La prueba funcional de apoptosis se expresa en % de núcleos apoptóticos
referidos al control del día.
(+) PHA
(48 hs.)
CMNT
Expandidas con IL 2
(72 hs.)
Células
activadas
Linfocitos
Anti Fas
(1 hs).
Medición de células muertas
por CF
Casos Clínicos
Sexo/Embarazo
Mujer/RNT/PAEG
Varón/RNT/PAEG
Varón/RNT/PAEG
Datos Perinatológicos
Esplenomegalia,
Plaquetopenia, AHA
S/P
S/P
Consulta Servicio de
Inmunología
4 mes: Linfoproliferación,
AHA, Plaquetopenia
15años: Linfoadenopatías
Plaquetopenia
8 años: Recurrentes
neutropenias febriles,
Poliadenopatías
Bicitopenia (GR y pts)
Hipergamaglobulinemia
(IgG, IgM, IgA)
Bicitopenia (GB, pts)
Hipergamaglobulinemia
(IgM, IgA)
Bicitopenia (GB, pts)
Hipergamaglobulinemia
(IgG, IgM, IgA)
Coombs +
FR+, FAN+, ASMA+
Anticardiolipinas +
Coombs + ASMA+
Antecedentes Fliares.
Cosanguineidad, hermano
fallecido
Madre: 2 abortos
No cosanguineidad
No cosanguineidad
LTCD3+ CD4-CD8TCR α/β +
44%
5%
6%
Prueba Funcional de
apoptosis
Ausente
Disminuida
Normal
Mutación homocigota
exón 3 del gen FAS
Mutación heterocigota
exón 9 del gen FAS
ALPS0
ALPS Ia
Laboratorio
Autoinmunidad
Diagnóstico
Molecular
ALPS III
Muchas Gracias por su atención!!!!!!!!!!
Hospital Garrahan
Buenos Aires - Argentina