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TRABAJOS PRACTICOS
INMUNOLOGIA
Conceptos generales: inmunizacion, inmunógeno, antígeno.
A. Respuesta inmune humoral:
Reacciones inmunológicas secundarias: aglutinación y precipitación.
Reacciones inmunológicas primarias: inmunoenzimáticas (ELISA),
inmunofluorescencia (I F)
Electroforesis en geles de poliacrilamida con SDS (SDS-PAGE).
Inmunoblotting (Western blot).
B. Respuesta inmune celular:
Diferenciación de linfocitos T y B.
Ensayos funcionales de linfocitos T, B, fagocitos.
Citometría de flujo. F
Sistema inmune innato y adaptativo
Inmunógeno: molécula o sustancia capaz de inducir una
respuesta inmune específica.
Antígeno: molécula o sustancia capaz de reaccionar con los
productos de la respuesta inmune específica.
Hapteno:
molécula de bajo pesos molecular incapaz de
inducir una respuesta inmune a menos que se encuentre
conjugada a una proteína carrier
Hapteno
Carrier
ANTIGENOS
ANALITOS
DETECTABLES
ANTICUERPOS
CLASIFICACION DE LOS METODOS SEGUN LA FORMA
DE VISUALIZAR LA REACCION
Fenómeno de prozona
REACCIONES DE AGLUTINACIÓN
Clasificación de las reacciones de
aglutinación
Directas:
El
antígenos
se
encuentra
naturaleza.
Ej: bacterias, globulos rojos
particulado
por
Indirectas:
Los antígenos son solubles pero se los puede acoplar
a una partícula para convertirlos en particulados.
Ej: proteinas o antígenos solubles en general
Partículas utilizadas como soporte en
la aglutinaciones indirectas
Estas particulas deben ser soportes inertes que no
participen de la reaccion AG-AC.
Estas particulas pueden ser:
-Particulas de latex
-Globulos rojos
Cuando se utilizan GR como soporte de una
aglutinacion indirecta la reaccion se conoce como
hemaglutinacion indirecta
Condiciones para obtener reacciones
de aglutinacion
1. El AG debe ser particulado.
2. El AG debe ser multivalente. Osea
debe presentar varios sitios de unión
del AC.
3. El Ac debe ser multivalente.
Formas de informar los resultados
de la reacciones de aglutinación
1. Cualitativa
Se informa si la reacción es (+) o (–).
2. Semicuantitativa
Se informa un titulo como una medida de al cantidad
de analito en la muestra.
Ejemplos de reacciones de
aglutinación de uso común en el
laboratorio de análisis clínico
Ej. 1: Hemaglutinacion directa
Ej. 2 AGLUTINACIÓN DIRECTA DE BRUCELLA
(PRUEBA DE HUDDLESON)
Ej. 3: Hemaglutinacion indirecta (HAI)
Determinación de Ac anti T. cruzi
DETERMINACION SEMICUANTITATIVA: TITULO
Aglutinación indirecta que utiliza como soporte
partícula de latex
Indirecta
Indirecta Reversa
Ej. de aglutinación indirecta reversa
-La prueba de fecuntest
Ej. de indirecta
-Prueba de artritest
-Prueba de inhibición de la aglutinación (fecuntest)
Ej. 4: Fecuntest
+
Partícula de latex con
anticuerpos anti GCH
Orina o suero que contiene
GCH
Aglutinación
Ej. 4: Artritest
+
Partícula de latex con IgG
Suero que contiene el
factor reumatoideo (IgM
que reconoce la porcion Fc
de la IgG)
Aglutinación
INHIBICIÓN DE LA AGLUTINACION POR LA PRESENCIA
DE GONADOTROFINA CORIONICA HUMANA (GCH)
REACCIONES DE PRECIPITACIÓN
Son reacciones Ag-Ac de tipo secundaria donde ambos
reactantes se encuentran solubles. Sin embargo para
poder visualizar el fenómeno de precipitación la reacción
se llevan a cabo en medios semisólidos (agar o agarosa).
CARACTERÍSTICAS DIFERENCIALES DE
LAS REACCIONES DE AGLUTINACIÓN
Y PRECIPITACIÓN
Aglutinación
Precipitación
Ag particulado
Ag soluble
Sensible
Poco sensible
Fase liquida
Fase semisolida (agar)
TIPOS DE REACCIONES DE
PRECIPITACIÓN
Debido a que estas reacciones se realizan en medios
semisolidos y los reactantes difunden a travez de este
medio, estas reacciones son conocidas como reacciones
de inmunodifusión.
Inmunodifusión radial simple (IDRS) o
metodo de Manchini
Inmunodifusión
Inmunodifusión radial doble (IDRD) o
metodo de Ouchterlony
INMUNODIFUSIÓN RADIAL
SIMPLE (IDRS)
En esta variante el anticuerpo se encuentra diluido en el agar y el
antigeno se siembra en un pocillo realizado en el agar. El antigeno difunde
por el agar y cuando encuentra su zona de equivalencia con el Ac precipita
formando un halo de precipitación
IMPORTANTE: El tamaño de halo
depende de la del diámetro del pocillo de
siembra y de la concentración de Ag. En
base a esta característica este método
puede
emplearse
para
cuantificar
antígenos
IDRS CUANTITATIVA
M
T1
T2
T3
D2
Medir el diámetro de halo de
los testigos y realizar curva
calibración. Luego medir el D
de la M y extrapolar en la
curva para obtener la [ ]
[ ]
IDRS CUANTITATIVA
La precipitación es un método que tiene baja
sensibilidad. A través de este método se puede
cuantificar proteínas que se encuentran en altas
concentraciones :
-Inmunoglobulinas: IgG, IgA, IgM
-Factores de complemento: C3 y C4
-Otros: Transferrina
INMUNODIFUSIÓN RADIAL DOBLE
(IDRD)
En este metodo el AC y el AG se siembran en pocillos separados realizado
en el agar. El Ac y el Ag difunden por el agar y cuando encuentra su zona
de equivalencia forman una línea de precipitación.
Este método se utiliza para evidenciar la presencia de un antígeno en una
muestra o para analizar el grado de relación entre antígenos
IDRD CUALITATIVA
INMUNOELECTROFORESIS