Download Hormona Estimulante del Tiroides [125I] Sistema

Diagnostics Division13 Mountain View Avenue
Orangeburg, NY 10962
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Hormona Estimulante del Tiroides [125I]
Sistema de componentes en fase solida
Catalog No.: 06B-264125 (100 Tube)
06B-264130 (200 Tube)
RIA HOT LINE U.S. ONLY: 1-800-431-1237
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Pharmaceuticals
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HORMONA ESTIMULANTE DEL TIROIDES [125I]
SISTEMA DE COMPONENTES DE FASE SÓLIDA
Para determinación cuantitativa de la hormona estimulante del tiroides humana (TSH) en suero o plasma.
Resumen y explicación de la prueba
La hormona estimulante del tiroides (Tirotropina, TSH) es una glicoproteína producida por la glándula pituitaria
anterior, que estimula la producción y secreción de tiroxina (T4) y Triyodo-tironina (T3) por la glándula tiroides. A
su vez, la T4 libre circulante (FT4) y T3 libre (FT3) regulan la secreción de TSH por una acción inhibitoria sobre las
células tirotióficas de la pituitaria. Cuando la secreción tiroidea es demasiado baja, se estimula la secreción de TSH;
cuando es demasiado elevada, se inhibe. El resultado es que las concentraciones circulantes de T3 y T4 se mantienen
dentro de límites normal-mente estrechos.
En pacientes con hipotiroidismo primario se encuentran concentraciones altas de TSH. Esto sucede no sólo en
pacientes con enfermedad clínica obvia, sino también en casos de hipotiroidismo leve. Se pueden encontrar niveles
elevados de TSH en pacientes con distintas enfermedades, aún con concentraciones normales de hormona tiroidea,
lo que indica que el primer cambio apreciable cuando desciende la secreción tiroidea, es el aumento de TSH.1-4 En
pacientes con hipertiroidismo se pueden encontrar niveles bajos o no detectables de TSH.
El valor clínico principal de los niveles de TSH es el diagnóstico del hipotiroidismo primario, debido a una disfunción
interna del tiroides. Sin embargo puede aparecer hipotiroidismo como consecuencia de una disfunción en la pituitaria
o el hipotálamo, siendo la TSH baja o normal. Además de las determin-aciones de TSH basal sérica, su evaluación
después de la administración intravenosa de TRH (Hormona estimulante de Tirotiopina) puede proporcionar una
información clínica útil.5-8 Se ha indicado que la TSH sérica es un medio más fiable que la T4 sérica y el FTI (Indice
de tiroxina libre) para detectar la enfermedad tiroidea en pacientes gravemente enfermos.9
Fundamento de la prueba
En un ensayo immunoradiométrico (o IRMA), el anticuerpo marcado reaccioná con el analito en presencia de
anticuerpo ligado a un soporte sólido. El IRMA se denomina frecuenteménte "IRMA de dos puntos" o "ensayo
sandwich".
La cuantificación del complejo (anti-cuerpo radioactivo-analito-anticuerpo de la fase sólida) muestra una relación
directa entre el nivel de radiactividad y la concentración del analito en el estándar o en la muestra del paciente.
1
Reactivos
Para uso diagnóstico "in vitro"
1.
Trazador TSH [125I], NE. de catálogo 06B264903, preparación lista para ser utilizada, con menos de 10 FCi
(370 kBq) TSH MAb [125I] (ratón) en tampón con albúmina bovina, suero de cabra, suero de ratón,
colorante, azida sódica al 0,1%** y otros conservantes. 25 ml. Conservación: Refrigerar a 2-8EC.
Estabilidad: Consultar la fecha de caducidad del vial.
2.
Tubos Recubiertos de Anticuerpo TSH. NE. de Catálogo 06B264901, tubos de poliestireno recubiertos
de anticuerpo purificado de TSH (cabra). Conservación: Refrigerar a 2-8EC en bolsas de papel de aluminio.
Estabilidad: consultar la fecha de caducidad en la bolsa.
3.
Juego de Calibradores A-G de Suero TSH. NE. de Catálogo 06B263893 que contiene TSH humana en
suero humano* con azida sódica al 0,1%** y otro conservante. Los valores figuran en las etiquetas de los
viales. Se ha calibrado la TSH de estos calibradores frente al Standard WHO/MRC (Organización Mundial
de la Salud. Consejo de Investigación Médica) 80/558, que se ha demostrado que es equivalente al
WHO/MRC 63/38.
1
Calibrador
NE
E. Catalogo
A
B
C
D
E
F
G
06B263711
06B263729
06B263737
06B263745
06B263753
06B263761
06B263770
NOTA:
Volumen/vial, ml
Valor Nominal de TSH
(F
FU/ml)1
8
4
4
4
4
4
4
0
0,2
1
4
10
40
80
Los valores de TSH vaviarán de lote a lote. Utilizer los valores impresos en
vial.
las etiquetas del
*
PRECAUCION: MANIPULAR COMO POSIBLE TRANSMISOR DE INFECCIONES: El material
original del que se ha obtenido este producto no reaccionaba frente a HBsAg y era negativo en anti-cuerpos
anti-HIV cuando se analizó con reactivos autorizados. No se conoce ningún método que asegure que los
productos derivados de sangre humana no sean infecciosos. Consultar CDC/NIH, Biosafety in
Microbiological and Biomedical Laboratories (Publicación HHS NE CDC 84-8395).
**
ADVERTENCIA: Los reactivos contienen azida sódica, que puede reaccionar con el plomo y cobre de las
cañerías, formando azidas metálicas explosivas. Para impedir la acumulación de azida, eliminarlos utilizando
grandes volúmenes de agua. Muito tóxico em caso de ingestao. Em contacto com ácido liberta um gaz
muito tóxico. Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com de agua.
ADVERTENCIA: CONTIENE MATERIAL RADIACTIVO
Este Sistema de componentes de Fase Sólida TSH ICN Pharmaceuticals contiene < 10 microcuries (370 kBq) de
[125I]. Este material radiactivo sólo pueden recibirlo, adquirirlo, poseerlo y utilizarlo los médicos, laboratorios
clínicos u hospitales, y solamente para pruebas clínicas o de laboratorio in vitro, que no impliquen la administración
2
interna o externa del producto, o de sus radia-ciones, a los seres humanos o animales. Su recepción, adquisición,
posesión, utilización y transferencia, están sometidas a regulaciones y a una licencia general de la Comisión
Reguladora Nuclear de los EEUU o de un Estado con el que la Comisión haya establecido un acuerdo para el
ejercicio de la autoridad reguladora.
ICN Pharmaceuticals, Inc.
El cumplimiento de las normas básicas para seguridad de las radiaciones proporcionará una protección adecuada.
El usuario debe consultar el National Bureau of Standards Handbook No. 92, "Safe Handling of Radioactive
Materials", publicado el 9 de marzo de 1964, Superintendent of Documents, U.S. Government Printing Office,
Washington, D.C. 20402. A continuación recogemos un resumen del mismo:
ËNo comer, beber, fumar o aplicarse cosméticos donde se utilicen materiales radiactivos. Ë No pipetear soluciones
radiactivas oralmente. Ë Evitar el contacto directo con todo material reactivo, utilizando artículos protectores tales
como batas de laboratorio y guantes desechables. Ë Todo trabajo radiológico se realizará en zonas especiales, que
no sean de paso. Ë Los materiales radiactivos deben ser conservados en sus envases originales, en una zona especial.
Ë Debe llevarse un libro de registro con las entradas y salidas de material radiactivo. Ë El equipo de laboratorio y
material de vidrio sometido a contaminación debe estar separado de forma que se evite la contaminción cruzada de
diferentes radioisótopos. Ë Cualquier posible contaminación por material reactivo se tratará inmediatamente según
los métodos establecidos. Ë El material radiactivo será eliminado de acuerdo con las normas y regulaciones de las
agencias que tengan jurisdicción sobre el laboratorio. Ë Los envases no contaminados se desecharán junto con el
material de desecho no radiactivo, después de destruir sus etiquetas.
Equipo y reactivos necesarios pero no suministrados
1.
Agua destilada.
2.
Qualquier tipo de pipeta semiautomática para 200 Fl, 500 Fl y 2,0 ml.
pipetas/diluidoras por el posible arrastre de muestra.
3.
4.
Gradilla para tubos.
Agitador vortex.
5.
Baño de agua capaz de mantener 37 ± 1EC.
6.
Contador gamma para medir [125I].
7.
Material de control de calidad apropiado, tal como los Controles de Immunoensayo de Tres Nireles.
No se recomienda usar
Recogida de Muestras
No es precisa una preparación especial del paciente. Debe advertirse al laboratorio acerca de la posible radiactividad
de la muestra, procedente de estudios diagnósticos "in vivo" previos.
1.
Preparación de la muestra para su análisis. Recoger la sangre en un tubo de 5 ó 10 ml. Si se prefiere
analizar el plasma, puede utilizarse EDTA como anticoagulante. Dejar que la sangre se coagule a
temperatura ambiente. Centrifugar y recoger el suero o plasma. El suero debe separarse en la hora siguiente
a su obtención y se mantendrá congelado hasta el momento del análisis. No deben utilizarse muestras
lipémicas, hemolizadas o ictéricas.
2.
Conservación: El suero debe se conservado a 2-8EC tras ser tomado durante 7 dias o congelado durante
3
1 mes. Evitar la congelación y descongelación repetida. El suero descongelado debe mantenerse en frío (2E
a 8EC) y analizarse antes de 7 días.
3.
Envío de muestras: El suero, cuidadosamente envasado, se enviará y recibirá congelado.
Procedimiento del ensayo
Los sueros controles deben analizarse paralelamente a las muestras de pacientes.
determinaciones clínicas deben realizarse simultáneamente.
La curva patrón y las
Todos los reactivos y muestras deben ponerse a temperatura ambiente antes de utilizarlos, pero no deben mantenerse
a esa temperatura más tiempo del necesario. Se recomienda utilizar agua destilada para los pasos de lavado.
1.
Si las técnicas de reducción de datos requieren recuentos totales, marcar tubos de poliestireno
adecuadamente y reservarlos.
2.
Numerar una cantidad de tubos recubiertos de anticuerpo para la curva estándar y
muestras de los pacientes.
3.
Añadir 200 Fl de los calibradores de TSH y muestras clínicas a los tubos, de acuerdo con el esquema de
pipeteo indicado a continuación.
4.
Añadir 500 Fl de Solución Trazador de TSH a todos los tubos. Agitar (Vortex) brevemente. Tapar los
tubos.
5.
Incubar a 37E ± 1EC en baño de agua durante 3,0 horas.
6.
Sacar todos los tubos del baño de agua y destaparlos.
7.
Aspirar o decantar. Añadir 2,0 ml de agua destilada.
8.
Repetir el paso 7. Aspirar o decantar una última vez.
9.
Contar la radiactividad en estos tubos y en los de recuento total (si fuera necesario) en un contador gamma,
durante 1 minuto.
Sistema de Componentes de Fase Sólida TSH MAb [125I]
Tubo
NE
Calibrador
(Fl)
Suero
paciente
(Fl)
Marcador
(Fl)
4
Incubar
Lavar
1, 2
3, 4
5, 6
7, 8
9,10
11,12
13,14
Controles
y muestras de
pacientes
200 A
200 B
200 C
200 D
200 E
200 F
200 G
---------------
500
500
500
500
500
500
500
200
500
--Agitar (Vortex)
e incubar todos
los tubos a
37EC durante
3,0 h.
Aspirar y lavar
2 veces todos
los tubos
excepto
recuento total
(si se usa)
Cálculo de resultados
La tabla 1 muestra unos datos típicos. Consultar en los viales de calibrador las concentraciones de TSH.
Cálculos automáticos:
Pueden utilizarse técnicas automáticas de reducción de datos para calcular los resultados de TSH: interpolación
punto-por-punto, logística de 4 parámetros u otros tipos de programas para ajuste de curvas.
Cálculos manuales:
1.
Calcular cpm para los tubos 1-2. Calibrador A.
2.
Sustraer la cpm promedio para los tubos 1-2 de cada cpm en los tubos sucesivos para obtener la cpm
corregida.
3.
Puede trazarse la curva patrón utilizando la cpm corregida para cada punto del calibrador sobre el eje-y frente
a la concentración del calibrador en el eje-x, utilizando papel de gráficas log-log.
4.
La Figura 1 muestra una gráfica de ejemplo los datos se ofrecen únicamente a modo de ejemplo
representativo y no deben utilizarse en lugar de la curva patrón obtenida con cada ensayo.
Ejemplo del cálculo de TSH:
Cpm promedio para el Calib. A
Cpm para muestra 1
Cpm corregidas para muestra 1
Utilizando la Figura 1, 5797 cpm
= 271
= 6068
= 5797
= 4,6 uU/ml TSH
Calibración
Los calibradores de TSH lan sido calibrados par la TSH frente al estándar WHO/MRC 80/558 (consejo de
Investigación Médica, Organización Mundial de al Salud.
Analizer los calibradores en duplicado con cada ensayo. Las curves de calibración se pueden generar utilizando
métiodos manuales o automáticos tal como se describe en la sección de Cáculo de Resultados. Cuando se cambia
a números de lote nuevos de tubos o de trazador, se deben realizer nuevas curvas de calibración. No mezclar
reactivos de lotes diferentes dentro de in ensayo.
5
Control de Calidad
Analizer al menos dos nireles de material de control de calidad (normal y anormal) en duplicado en cada ensayo.
Si los resultados no encajan con el cuterio de aceptación establecido por el laboratorio, se deberian revisor los datos
y repetir el ensayo si fuera necesario sequin el manual de procedimento del laboratorio. Para información y soporte
técnico dirijase a las oficinas locales de ICN Pharmaceuticals.
6
Limitaciones del Procedimiento
1.
Como el trazador radiactivo decae con el tiempo, podrán ser necesarios tiempos de recuento más
prolongados, aunque un buen equipo resolverá seguramente ese problema.
2.
El tiempo total de pipeteado, cuando la muestra y el trazador sean pipeteados separadamente, debe de ser
limitado a dos horas curando se pipetee manualmente y curando se utilizen sistemas de manipulatción liquidos
en un modo secuencial. Cuando se use un sistema de manipulación liquids que pipetee la muestra y el
trazador simultáneamente, el tiempo total de pipteado se deberá limitar a una hora.
3.
La curva patrón cubre aproximada-mente desde 0,0 a 80 FU de TSH por ml. Consultar en las etiquetas las
concentraciones exactas de TSH. El Estándar A actúa como corrección de fijación inespecífica para el IRMA
TSH y se puede utilizar para corregir las cuentas de fondo y el trazador radiactivo fijado inespecíficamente
al tubo.
4.
Para las muestras de suero de paciente con valores de TSH por encima del valor Calibrador G, se prediluye
el suero con Calibrador A de la forma siguiente: Añadir 400 Fl de Calibrador A a una muestra de suero de
50 Fl. Mezclar cuidadosamente y usar 200 Fl de esta muestra diluida por tubo del ensayo. Leer los
resultados a partir de la curva patrón y multiplicar por el factor de dilución nueve 9 para obtener el valor
correcto.
5.
No se la observado el efecto "high dose hook" con niveles de TSH de hasta 500 FU/mL.
6.
No mezclar reactivos de distintos lotes. Si se van a utilizar dos viales del mismo lote de reactivo en un
ensayo, deben reunirse sus contenidos y mezclarlos antes de empezar.
7.
La presencia de radiactividad en una muestra de un paciente puede interferir con el ensayo.
8.
Los valores normales en uso pueden no ser aplicables durante el embarazo.
9.
Este ensayo no ha sido validado para utilizarse en análisis o screening de neonatos. Valores esperados Se
analizaron los sueros de 132 individuos aparentemente eutiroideos (65 varones y 67 hambras) para las TSH
con los reactivos TSH SPCS de ICN Pharmaceuticals. El rango representa un análisis central del 95%.
7
Rango normal
0,54 - 3,70
Media
1,53 uU/ml (mU/l)
Sin embargo cada laboratorio debe definir su propio rango normal en un grupo de sujetos normales.
Se evaluaron sueros de pacientes con diagnóstico clínico de hipertiroidismo (n=66) e hipotiroidismo (n=61) con el
SPCS MAb TSH de ICN Pharmaceuticals.
Rango hipertiroides:
Rango hipotiroideo:
# 0,06 - 0,42 uU/ml (mU/l)
> 9,0 uU/ml (mU/l)
Siempre que los datos de laboratorio estén en contradicción con los resultados o impresiones clínicas, se debe
aplicar el criterio clínico y realizar una evaluación adicional.
Características específicas de la prueba
Funcionamiento Clínico: Estudio de Correlación
Se analizaron trescientas cinquenta y cinco muestras séricas humanas con la técnica TSH SPCS y la TSH MAb
SPCS. Se compararon los resultados por análisis de regresión linear; se resumieron los resultados en las tablas
siquientes.
Comparación de regresión linear del ensayo TSH SPCS con el de TSH MAb SPCS; Todas las muestras.
Técnica TSH SPCS (y) frente a TSH MAb SPCS (x)
Pendiente
0,92
Intercepto (FU/ml)
-0,12
Coeficiente de Correlación (r)
0,991
Rango de Valores (FU/ml)
TSH SPCS
TSH MAb SPCS
# 0,06 - 69,7
# 0,06 - 70,3
n
355
8
Comparación de Regresión Linear de la ticnica TSH SPCS con la TSH MAb SPCS: Muestras < 6 FU/mL.
Técnica TSH SPCS (y) frente a TSH MAb SPCS (x)
Pendiente
0,86
Intercepto (FU/ml)
0,02
Coeficiente de Correlación (r)
0,980
Rango de Valores (FU/ml)
TSH SPCS
TSH MAb SPCS
# 0,06 - 4,47
# 0,06 - 5,33
n
294
Precisión:
Cuatro sueros comerciales testigos dieron las variaciones inter- e intraensayo siguientes, en pruebas repetidas
(mínimo de 20 determinaciones):
Interensayo
Muestra
Media, FU/ml
D.S.
% CV
Intraensayo
1
2
3
4
1
2
3
4
0,52
0,08
16,2
1,10
0,10
9,4
4,69
0,23
4,8
25,6
1,3
5,0
0,43
0,06
13,3
1,11
0,07
6,0
4,76 0,23
4,9
27,0
1,13
4,2
9
Recuperación:
Se añadieron diferentes cantidades de TSH (WHO MRC 80/558) conocida a suero humano. Se recuperaron los
porcentajes siguientes:
Añadida
Esperada
Encontrada
% Recuperada
0
0,5
1,0
5,0
10,0
25,0
50,0
--1,58
2,08
6,08
11,08
26,08
51,08
1,08
1,44
1,90
5,17
10,3
24,0
53,2
--91
91
85
93
92
104
Sensibilidad:
La sensibilidad, definida como +2 D.S. de 20 determinaciones del estándar cero de TSH, es 0,06 uU/ml.
Linearidad Dilucional:
La linearidad dilucional se determinó diluyendo una muestra hipotiroidea con el calibrador cero. Los resultados
se resumer en la tabla siquiente.
Dilución
Resultado TSH SPCS
(FU/ml)
Valor Esperado
(FU/ml)
% Recuperación
Neto
53,2
---
---
1:2
27,1
26,6
102,1
1:4
13,0
13,3
97,8
1:8
6,62
6,65
99,6
1:16
3,27
3,32
98,4
1:32
1,60
1,66
96,3
1:64
0,76
0,83
91,5
10
Especificidad:
El SPCS MAb TSH de ICN Pharmaceuticals contiene anticuerpo monoclonal frente a TSH intacta. Las
reactividades cruzadas con otras hormonas proteicas son las siguientes:
TSH (FU/ml)
Suero Normal
50 mU/ml LH
200 mU/ml LH
1000 mU/ml LH
1,90
2,04
1,91
1,86
50 mU/ml FSH
200 mU/ml FSH
1000 mU/ml FSH
1,91
1,62
1,06
1,000 mU/ml hCG
10,000 mU/ml hCG
100,000 mU/ml hCG
1,95
1,74
0,78
11
TABLE 1
TSH [ I] Solid Phase Component System
Tabulated Data
125
Tube No.
Total
Total
Calibrator A
Calibrator A
Calibrator B
Calibrator B
Calibrator C
Calibrator C
Calibrator D
Calibrator D
Calibrator E
Calibrator E
Calibrator F
Calibrator F
Calibrator G
Calibrator G
Sample 1
Sample 1
Counts per minute
242905
248233
280
261
592
608
1654
1600
5387
5349
12375
12335
38367
38303
60359
61005
6054
6082
Average cpm
245569
Corrected cpm
271
321
327
1383
1329
5116
5078
12104
12064
38096
38032
60088
60734
5783
5811
12
References
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Gordin, A., Heinonen, O.P., Saarinen, P. and Lamberg, B.A., Serum Thyrotrophin in Symptomless
Autoimmune Thyroiditis. Lancet, I, 551-554, 1972.
Emerson, C.H., Dyson, W.L. and Utiger, R.D., Serum Thyrotropin and Thyroxine Concentrations in Patients
Receiving Lithium Carbonate. J. Clin. Endocrinol. Metab., 36, 338-346, 1973.
Evered, D., Young, E.T., Turnbridge, W.M.G., Ormston, B.J., Green, E., Peterson, V.B. and Dickinson,
P.H., Thyroid Function after Subtotal Thyroidectomy for Hyperthyroidism. Brit. Med., J., 1, 25-27, 1975.
Toft, A.D., Irvine, W.J., Seth, J. and Hunter, W.M. Thyroid Function in the Long-term Follow-up of Patients
Treated with Iodine -131 for Thyrotoxicosis, Lancet, 3, 576-578, 1975.
Snyder, P.J. and Utiger, R.D., Response to Thyrotropin Releasing Hormone (TRH) in Normal Man. J. Clin.
Endocrinol. Metab., 34, 380-385, 1972.
Ormston, B.J., Garry, R., Cryer, R.J. and Besser, G.M., Thyrotropin Releasing Hormone as a Thyroid
Function Test. Lancet. 2, 10-14, 1971.
Hall, R., Ormston, B.J., Besser, G.M., Cryer, R.J. and McKendrick, M., The Thyrotropin Releasing Hormone
Test in Disease of the Pituitary and Hypothalamus. Lancet, I, 759-763, 1972.
Snyder, P.J., Jacobs, L.S., Rabello, M.M., Sterling, F.H., Shore, R.N., Utiger, R.D. and Daughaday, W.H.,
Diagnostic Value of Thyrotropin-Releasing Hormone in Pituitary and Hypothalamic Diseases: Assessment
of Thyrotropin and Prolactin Secretion in 100 Patients. Ann. Int. Med., 81 751-757, 1974.
Dubuis, J.M. and Burger, A.G., Thyroid Stimulating Hormone Measurements by Immunoradiometric Assay
in Severely Ill Patients, Lancet, II, 1036-1037, 1986.
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