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INSTITUCIÓN
EDUCATIVA
“INEM
JOSÉ FÉLIX DE
RESTREPO”
MEDELLÍN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS NATURALES Y
EDUCACION AMBIENTAL
LABORATORIO MICROBIOLOGÍA. BACTERIAS
PROFESORA: Rosa Ramírez Suárez
GRADO: 11º. BIOLOGIA
Sección:
Fecha:
NOMBRE: _______________________________________________________________________
EQUIPO Nº _____
LOGROS:
1. Prepara frotis bacterianos empleando las técnicas adecuadas para hacerlo.
2. Aplica con propiedad los pasos para la tinción de Gram y reconoce los grupos de bacterias
como Gram + ó Gram –
3. Identifica algunos microorganismos presentes en medios de cultivo y conoce algunas
diferencias morfológicas entre ellos.
4. Prepara medios de cultivo para microorganismos
PARTE A: CULTIVO DE BACTERIAS
MATERIALES

Microscopios compuestos.

Azul de metileno al 1 %

Portaobjetos y Cubreobjetos

Cajas de Petri.

Papel limpia lentes.

Frascos de compotas

Goteros.

Pañuelos desechables.

Algodón

Gelatina sin sabor

Papel absorbente.

NaCl (sal de cocina)

Solución de lugol al 1 %

Soporte universal

Mecheros de alcohol

Erlenmeyer

Aceite de inmersión

Tapón de algodón y gasa

Asas de metal

Agua destilada.

Agujas de disección o estiletes

Copitos de algodón.

Cultivos de bacterias y hongos.

Tres velas de parafina.

Colorante de Gram

Material de limpieza

Bolsa para desperdicios.
PROCEDIMIENTO
MOMENTO UNO PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO. (Se realizará con anterioridad en la
casa de los estudiantes. La institución facilitará las cajas de petri y el erlenmeyer)
Sigue las instrucciones representadas en las ilustraciones y/o las dadas por la docente.
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Utiliza los 3 sobres de gelatina sin sabor, 1
gr. de azúcar y 1 gr. de caldo de carne
agrégalos a un erlenmeyer con 100 ml de
agua y una pizca de NaCl
Consigue estos materiales: gelatina sin sabor (3
sobres), caldo de carne, cajas de petri, frascos de
compotas
Calienta el contenido del
erlenmeyer y déjalo hervir durante un minuto.
Revuelve de vez en cuando.
Deja hervir la olla durante 15 minutos. Saca la caja,
el erlenmeyer y los frascos de compota y colócalos
junto al mechero encendido, O tres velas
encendidas.
( Cloruro de sodio)
Tapona el erlenmeyer con algodón y
colócalo en una olla pequeña junto con la
caja de petri y los frascos de compota todo
limpio y envuelto en papel. Luego, coloca
todo esto dentro de una olla a presión, a la
que has agregado previamente 1 cm. de
altura de agua.
Vierte, con cuidado y en partes iguales, el
contenido del erlenmeyer en la caja de Petri
y los frascos de compota. Déjalos enfriar
tapados con papel aluminio o papel
encerado y luego colócalos en la nevera
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Ya están listos los medios de cultivo, mínimo 2 por equipo, en la siguiente sesión, se hará la siembra.
MOMENTO Nº 2 SIEMBRA
Cerca de un mechero encendido, toma con
un copito de algodón estéril, una muestra de
la mucosa de la boca de un compañero de
equipo.
Rotúlala con los siguientes datos: fecha y
lugar donde fue tomada la muestra.
Toma la caja y sostenla, cerca del mechero,
entreabierta con tu mano izquierda, y haz la siembra
de la muestra tomada al compañero, haciendo surcos.
Ciérrala inmediatamente.
Colócala en la incubadora a una temperatura de 20 a
25°C. Si no hay incubadora en tu colegio, constrúyela
con una caja de cartón y bombillas; es importante,
entonces, que revises la temperatura del interior, que
sea la adecuada para el crecimiento microbiano.
Realiza el mismo procedimiento para tomar muestras de: la piel de un compañero, una parte del
salón, alguna silla o jardinera del exterior, el baño y el aire (para lo cual debes dejar abierta la caja
durante algunos minutos). Para cada toma de muestras utiliza copitos nuevos; para las muestras en
el baño y las partes exteriores no necesitas utilizar el mechero, sólo toma la muestra y rápidamente
realiza la siembra.
Observa el crecimiento en las cajas, yendo día por medio a revisarlas. En el día número cinco
observa los microorganismos, como se indica a continuación.
1. Observación de bacterias
Coloque en el portaobjetos una o dos gotas de agua destilada, con el asa tome una pequeña cantidad
del cultivo de las bacterias, mézclela con el agua y extienda la preparación unos 2 cm. a lo largo del
portaobjetos formando una película delgada. Pásela varias veces sobre la llama de un mechero,
controlando la temperatura con el dorso de la mano para evitar un excesivo calentamiento. Una vez
seca la preparación agregue azul de metileno hasta cubrir toda la muestra y deje actuar el colorante
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durante un minuto. Luego elimine el colorante lavando la placa con un chorro suave de agua, seque
con papel absorbente sin frotar la muestra y pásela nuevamente por la llama unas tres veces
controlando también la temperatura.
Sin colocarle cubreobjetos, enfoque en el microscopio. Esquematice lo observado con el objetivo de
100X utilizando aceite de inmersión y compare con los diagramas de la figura 1.
¿Para que calentó la preparación antes de colorear? ¿Qué estructuras pudo observar en las
bacterias? Si no se tinturaron las bacterias repita el proceso agregándole el colorante de Gram.
Observar el proceso.
Cerca del mechero, toma la muestra de una
caja de Petri con ayuda de un asa.
Deja secar el agua y luego pasa rápidamente
la lámina sobre la llama para fijar la muestra.
GRAFICO N 1
Colócala sobre un portaobjetos, en el que has colocado
previamente una gota de agua destilada. Disuelve bien
la muestra en el agua.
Agregue azul de metileno hasta cubrir toda la muestra y
deje actuar el colorante durante un minuto. Luego
elimine el colorante lavando la placa con un chorro
suave de agua, seque con papel absorbente sin frotar
la muestra y pásela nuevamente por la llama unas tres
veces controlando también la temperatura. Si no se
tiñen las bacterias repetir el proceso con colorante de
Gram.
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PREGUNTAS
1. ¿Qué formas de asociación pudo usted observar en los cocos? ¿Cómo se llama cada una de
esas asociaciones? ¿Qué otros tipos existen? Dé un ejemplo de cada uno de los tipos de
asociación de los cocos?
2. Consulte algunos procesos industriales que se realizan basados en las bacterias.
5. En general, ¿cómo se nutren las bacterias?
PARTE B: CULTIVOS DE BACTERIAS Y TINCIÓN DE GRAM
MATERIALES:








Asa para siembra.
Porta objetos.
Cubreobjetos
Mechero de alcohol
Fósforos o encendedor
Material de limpieza y bolsa de basura
Guantes
Aceite de inmersión








Solución de tinción de Gram
Frasco lavador
Gasa
Alambre domestico
Cultivos bacterianos
Alcohol industrial
Alcohol antiséptico
Puente de coloración
PROCEDIMIENTO:
1. Elaboración del asa para siembra: Consiste en un alambre (generalmente fabricado con una
aleación de níquel y cromo), en nuestro caso con alambre de uso domestico lo más delgado
posible, que por un extremo se fija a un mango que lo sostiene (de madera, o se adhiere a un
mango de bisturí, o se enrolla en un plástico) y por el otro se dobla formando un pequeño
circulo. Para hacer el asa se utiliza una pinza y cuidando que quede centrada la figura. El
tamaño no debe ser mayor a 10 mm. Observe el dibujo.
2. Preparación del frotis:
 El portaobjetos que se va a utilizar debe ser lavado con agua y jabón, bañado con
alcohol antiséptico y secado con gasa.
 Se enciende el mechero y se flamea el asa hasta que se ponga al rojo vivo, para ello
se sostiene el asa inmediatamente arriba de la porción azul de la llama. El asa se debe
colocar tan cerca de la posición vertical como sea posible.
 Deje enfriar unos 20 segundos.
 Tome una porción de la muestra de bacterias que se va a analizar, la cual se
encuentra en los cultivos de los tubos de ensayo, o en los cultivos preparados por cada
equipo de trabajo.
 Coloque el asa sobre el portaobjetos y aplane ligeramente en el centro de este,
enumere el portaobjetos.
 Sosteniendo todavía el asa aplanada sobre el portaobjetos muévala trazando una
espiral del centro a la periferia. Deje cierto espacio entre la muestra y cada uno de los
4 lados del portaobjetos. Deje secar la muestra al aire.
 Flamee de nuevo el asa hasta que este al rojo vivo para destruir cualquier bacteria que
se encuentre en ella.
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
Confirme que el frotis se ha secado completamente al aire libre. Pase el portaobjetos 3
veces a través de la llama con la muestra hacia arriba. Déjelo enfriar antes de aplicar
la tinción.
3. Tinción:
 Coloque el portaobjetos en un puente de coloración
 Bañe el portaobjetos con colorante de Gram. Deje actuar por 1 minuto.
 Escurra la solución y enjuague el portaobjetos con agua corriente.
 Séquela al aire libre.
4. Observar al microscopio.
 Enfoque en el menor aumento, sin cubreobjetos
 Luego pase a 45X y empiece a buscar los mejores espacios para observar.
 Pase al objetivo de 100X, utilizando aceite de inmersión.
 Realice esquemas o dibujos de los diferentes grupos de bacterias que pudo observar.
 Repita el proceso para mínimo 2 muestras por equipo.
 Elabore informe con esquemas, análisis y conclusiones.
5. Buscar:
 Bacterias teñidas de color violeta oscuro o Gram positivas, como estafilococos,
estreptococos, neumococos algunos bacilos.
 Bacterias teñidas de color rosa o Gram negativas, como gonococos, meningococos,
bacilos coliformes, salmonelas.
NOTA: OBSERVA LA GRAFICA Nº 1: Como preparar un frotis bacteriano.
 GRAFICA Nº 2: Diversos grupos de bacterias.
Recopilado y adaptado por: Rosa Isabel Ramírez Suárez.
Con base en el texto: Manual de técnicas básicas para un laboratorio de salud. Publicación
científica Nº439. Organización Mundial de Salud.1993.