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UNIVERSIDSAD NACIONAL AUTONOMA
DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES
ZARAGOZA
LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN INFORNATIVA III
BIOLOGÍA
UNIDAD BIOLOGÍA MOLECULAR DE LA CÉLULA I
ANTEPROYECTO DEL TRABAJO DE INVESTIGACIÓN
GRUPO: 1301
NTEGRANTES:
GARCÍA GONZALEZ ALEJANDRA
GARCÍA SÁNCHEZ CLAUDIA
ORTEGA GARCÍA ALEXIS PAULINA
SIERRA MONDRAGÓN EDITH
EFECTOS TERATOGENICOS APARTIR DEL DIMETIL SULFOXIDO Y LA
VITAMINA A EN RATONES EN ETAPA DE GESTACION
Introducción
Además de las mutaciones genéticas que pueden afectar el desarrollo, se conocen numerosos
factores ambientales que pueden alterar el desarrollo. En el verano de 1962 se recubrió que el
DDT, destruía los huevos de aves y evitaba la reproducción en varias especies. Y Lenz en el
mismo año descubre que la talidomida, una droga sedante que se administraba en el
embarazo, puede causar anomalías en las extremidades y del oído en el feto. Las anomalías
causadas por los agentes exógenos son denominadas disrupciones. Los agentes responsables
de estas disrupciones se denominas teratógenos La mayoría de los teratógenos produce sus
efectos durante ciertos periodos críticos del desarrollo
Agentes teratógenos, que se utilizaran en el desarrollo del trabajo de investigación.
La vitamina A ayuda a la formación y al
mantenimiento de dientes sanos, tejidos blandos y
óseos, de las membranas mucosas y de la piel. Se
conoce también como retinol, ya que produce los
pigmentos en la retina del ojo. Esta vitamina
promueve la buena visión, especialmente ante la
luz tenue, y también se puede requerir para la
reproducción y la lactancia.
El retinol es un tipo activo de vitamina A y se encuentra en los hígados de animales, la leche
entera y algunos alimentos fortificados. Los carotenoides son tintes de color oscuro que se
encuentran en alimentos de origen vegetal y que pueden transformarse en una forma de
vitamina A. Uno de ellos es el betacaroteno, que es un antioxidante. La vitamina A proviene
de fuentes animales como los huevos, la carne, la leche, el queso, la crema de leche, el hígado,
el riñón y el aceite de hígado de bacalao y de hipogloso. Sin embargo, todas estas fuentes, a
excepción de la leche descremada fortificada con vitamina A, tienen un alto contenido de
grasa saturada y colesterol.
El retinol es un tipo activo de vitamina A y se encuentra en los hígados de animales, la leche
entera y algunos alimentos fortificados. Las fuentes de betacaroteno son las zanahorias, la
calabaza, la batata o camote, el melón, el calabacín, el melón cantalupo, la toronja, el
albaricoque, el brócoli, la espinaca y la mayoría de las hortalizas de hoja verde. Cuanto más
intenso es el color de la fruta u hortaliza, mayor es el contenido de betacaroteno. Estas fuentes
vegetales de betacaroteno no tienen grasa ni colesterol.
La deficiencia de vitamina A puede aumentar la susceptibilidad a enfermedades infecciosas y
problemas de visión. Sin embargo, si la persona consume grandes cantidades de vitamina A,
se puede enfermar. Asimismo, el consumo de grandes dosis de esta vitamina puede causar
defectos congénitos. La intoxicación aguda con vitamina A generalmente ocurre cuando un
adulto toma varios cientos de miles de unidades internacionales. Los síntomas de intoxicación
crónica con vitamina A pueden ocurrir en adultos que toman regularmente más de 25000 UI
al día, causa una hipervitaminosis A. Los bebés y los niños son más sensibles y se pueden
enfermar después de tomar dosis más pequeñas de vitamina A o productos que la contengan
como el retinol (que se encuentra en las cremas desnatadas).
El dimetil sulfoxido (DMSO) se prepara industrialmente por oxidación de aire de sulfuro de
dimetilo, también es un subproducto de la industria del papel. El DMSO es un disolvente
único versátil tiene una constante dieléctrica alta (491), pero no forma enlace de hidrogeno en
estado puro. Es un disolvente poderoso para iones inorgánicos y compuestos orgánicos. Los
reactivos con frecuencia realizan su reactividad en DMSO al compararlo con la que realizan
en disolventes alcohólicos.
El DMSO penetra fácilmente la piel
y sé a usado para promover la
absorción epidérmica de fármacos;
sin embargo, el DMSO puede causar
la absorción de suciedad y veneno.
Algo común en los que trabajan con
DMSO es cuando les salpica en las
manos, pueden percibir su olor.
El dimetil sulfóxido (DMSO) es un
líquido orgánico altamente polar y miscible. Es básicamente inodoro y tiene un bajo nivel
de toxicidad. El DMSO es un solvente aprótico dipolar y tiene un punto de ebullición
relativamente alto.
OBJETIVO GENERAL
Inducir mutaciones aplicando agentes teratógenos como vitamina A y dimetil sulfoxido a
ratones en etapa gestante (dias 4y7) y observar los daños que causan estos agentes a nivel
morfológico.
OBJETIVO PARTICULAR
Observar el efecto producido por estos agentes en el organismo (organo, tejido y/o sistema).
Estudiar la importancia que tienen los agentes Teratogénicos asi como los efectos que causan
en los diferentes organismos.
Conocer el ciclo estral y aprender a manipular a los ratones para un buen trabajo
experimental.
HIPOTESIS, en base a lo investigado se menciona que la vitamina A puede causar algunas
malformaciones tales como fisuras faciales, exoftalmos, malformaciones del pabellón
auricular, y el dimetil sulfoxido causa dismorfias graves craneofaciales, defectos cardíacos y
alteraciones del sistema nervioso central, además de un elevado índice de abortos
espontáneos. Por lo tanto si se administra a los ratones en los primeros dìas de gestaciòn
agentes Teratogénicos (dimetil sulfoxido y vitamina A) se esperaria observar algun tipo de
malformación (organo, tejido y/o sistema) en los fetos de los ratones trabajados.
MATERIAL Y EQUIPO
 microscopio
 estereoscopio
 goteros de punta alargada y angosta
 portaobjetos
 estuche de disección
 sonda gástrica
 balanza analítica o granataria
 algodón
 pipetas
 aserrín
 jaula
 alimento para ratones
MATERIAL BIOLOGICO
 4 ò 5 ratones hembras
 1 ratón macho
REACTIVOS
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Solución salina (prepara al 0.85% de cloruro de sodio)
Etanol al 95%
Colorante giemsa (dilución 1:20 v/v
Vitamina A
dimetil sulfoxido
éter
acetona
KON al 1%
Solución de rojo de alizarina al 0.1% en solución de OKH al 1%
Solución aclarante( agua destilada 79ml,KOH 1g, glicerina 20ml
Solución de glicerina al 20%,40%, 60% 80% y 100%
Timol
PROCEDIMIENTO
FROTIS VAGINAL
1.-comprobar el sexo de
4 animal, marcarla ratas
y jaula con un marcador
2.-realizar lavados
vaginales, tomar con un
gotero solución salina, lavar
varias veces la vagina d la
rata y recuperar liquido,
observar al microscopio
determinar ciclo estral
APAREAMIENTO
3.-colocar a la hembra
que se encuentre en
fase de proestro con
un macho semental
6.-se tomara a una rata
muestra a la cual no se
le administrara ninguna
sustancia, se pesara
diariamente
5.-las hembras embarazadas
deben pesarse diariamente
4.-horas después
realizas frotis para
corroborar que ha sido
cubierta por el macho
VITAMINA A
8.-esta sustancia se
administrara por vía
gástrica, por medio de una
sonda gástrica. La dosis será
de 25000 U.I 1ml. En el 4
dia
9.-El animal será
trasladado a su jaula
observarlo, pesarlo
diariamente,
buscando en el
aserrín indicio de
aborto
ADMINISTRACION
DE SUSTANCIAS
7.-se usara vitamina A,
dimetil sulfoxido, la
administración será en
forma escalonada,
empezando el día 4 de
gestación hasta el día 8
11.- una vez inyectado
colocarlo en la jaula y
hacer observaciones y
continuar pesando
diariamente, buscar en
el aserrín algún resto de
sangre o indicio de
aborto
DIMETIL SULFOXIDO
10.-esta sustancia se
administrara por vía
intraperitoneal en una
dosis de 1ml, al 100%, al
7 día
12.-SACRIFICACION
A los 19 días de gestación
se sacrificaran a las ratas,
con éter, cuando se aya
muerto, cortar la piel y el
músculo de la cavidad
abdominal, retirar los
intestinos, sacar a los
embriones
13.- observar y
reconocer las estructuras
que contienen y fijan al
embrión, colocar a los
embriones en solución
salina y lavarlos
cambiando la solución
hasta eliminar la sangre
14.-colocar a los
embriones en alcohol
al 95% durante 3 días,
después pasarlos a
acetona de 2 a 4 días,
luego colocarlos otra
vez en alcohol al 95%
por 12 hrs.
17.- se colocan en una
solución de agua destilada
79 ml, KOH 1gr,glicerina
20ml.hasta que los tejidos
estén bien aclarados y los
huesos sean visibles
16.-transferir a los
embriones a una
solución de rojo de
alizarina al o.1% en
solución de KOH al 1%
hasta que los huesos se
tiñan aproximadamente
12 hrs. tener cuidado
con la sobre tinción
15.- colocar los
embriones en una
solución de KOH al
1% hasta que se vean
claramente las
estructuras
18.-colocar al embrión en
pasos OBJETIVOS
sucesivos en
concentraciones de
glicerina de
20%.40%,60%80% de 12
a 24 hrs. cada cambio
19.- colocar a los
embriones en glicerina
pura con unos granos
de timol como
conservador
20.-observar los
embriones con un
estereoscopio para
buscar alteraciones,
anotar las
observaciones
Bibliografía
 Gilbert, Scout F. Biología del desarrollo. Médica Panamericana, 2005
 Ford MD, Clinical Toxicology. 1st ed. Philadelphia, Pa: WB Saunders; 2001:297
 Institute of Medicine. Food and Nutrition Board. Dietary Reference Intakes for
Vitamin A, Vitamin K, Arsenic, Boron, Chromium, Copper, Iodine, Iron, Manganese,
Molybdenum, Nickel, Silicon, Vanadium, and Zinc. National Academy Press,
Washington, DC, 2001.