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UNIVERSIDSAD NACIONAL AUTONOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN INFORNATIVA III BIOLOGÍA UNIDAD BIOLOGÍA MOLECULAR DE LA CÉLULA I ANTEPROYECTO DEL TRABAJO DE INVESTIGACIÓN GRUPO: 1301 NTEGRANTES: GARCÍA GONZALEZ ALEJANDRA GARCÍA SÁNCHEZ CLAUDIA ORTEGA GARCÍA ALEXIS PAULINA SIERRA MONDRAGÓN EDITH EFECTOS TERATOGENICOS APARTIR DEL DIMETIL SULFOXIDO Y LA VITAMINA A EN RATONES EN ETAPA DE GESTACION Introducción Además de las mutaciones genéticas que pueden afectar el desarrollo, se conocen numerosos factores ambientales que pueden alterar el desarrollo. En el verano de 1962 se recubrió que el DDT, destruía los huevos de aves y evitaba la reproducción en varias especies. Y Lenz en el mismo año descubre que la talidomida, una droga sedante que se administraba en el embarazo, puede causar anomalías en las extremidades y del oído en el feto. Las anomalías causadas por los agentes exógenos son denominadas disrupciones. Los agentes responsables de estas disrupciones se denominas teratógenos La mayoría de los teratógenos produce sus efectos durante ciertos periodos críticos del desarrollo Agentes teratógenos, que se utilizaran en el desarrollo del trabajo de investigación. La vitamina A ayuda a la formación y al mantenimiento de dientes sanos, tejidos blandos y óseos, de las membranas mucosas y de la piel. Se conoce también como retinol, ya que produce los pigmentos en la retina del ojo. Esta vitamina promueve la buena visión, especialmente ante la luz tenue, y también se puede requerir para la reproducción y la lactancia. El retinol es un tipo activo de vitamina A y se encuentra en los hígados de animales, la leche entera y algunos alimentos fortificados. Los carotenoides son tintes de color oscuro que se encuentran en alimentos de origen vegetal y que pueden transformarse en una forma de vitamina A. Uno de ellos es el betacaroteno, que es un antioxidante. La vitamina A proviene de fuentes animales como los huevos, la carne, la leche, el queso, la crema de leche, el hígado, el riñón y el aceite de hígado de bacalao y de hipogloso. Sin embargo, todas estas fuentes, a excepción de la leche descremada fortificada con vitamina A, tienen un alto contenido de grasa saturada y colesterol. El retinol es un tipo activo de vitamina A y se encuentra en los hígados de animales, la leche entera y algunos alimentos fortificados. Las fuentes de betacaroteno son las zanahorias, la calabaza, la batata o camote, el melón, el calabacín, el melón cantalupo, la toronja, el albaricoque, el brócoli, la espinaca y la mayoría de las hortalizas de hoja verde. Cuanto más intenso es el color de la fruta u hortaliza, mayor es el contenido de betacaroteno. Estas fuentes vegetales de betacaroteno no tienen grasa ni colesterol. La deficiencia de vitamina A puede aumentar la susceptibilidad a enfermedades infecciosas y problemas de visión. Sin embargo, si la persona consume grandes cantidades de vitamina A, se puede enfermar. Asimismo, el consumo de grandes dosis de esta vitamina puede causar defectos congénitos. La intoxicación aguda con vitamina A generalmente ocurre cuando un adulto toma varios cientos de miles de unidades internacionales. Los síntomas de intoxicación crónica con vitamina A pueden ocurrir en adultos que toman regularmente más de 25000 UI al día, causa una hipervitaminosis A. Los bebés y los niños son más sensibles y se pueden enfermar después de tomar dosis más pequeñas de vitamina A o productos que la contengan como el retinol (que se encuentra en las cremas desnatadas). El dimetil sulfoxido (DMSO) se prepara industrialmente por oxidación de aire de sulfuro de dimetilo, también es un subproducto de la industria del papel. El DMSO es un disolvente único versátil tiene una constante dieléctrica alta (491), pero no forma enlace de hidrogeno en estado puro. Es un disolvente poderoso para iones inorgánicos y compuestos orgánicos. Los reactivos con frecuencia realizan su reactividad en DMSO al compararlo con la que realizan en disolventes alcohólicos. El DMSO penetra fácilmente la piel y sé a usado para promover la absorción epidérmica de fármacos; sin embargo, el DMSO puede causar la absorción de suciedad y veneno. Algo común en los que trabajan con DMSO es cuando les salpica en las manos, pueden percibir su olor. El dimetil sulfóxido (DMSO) es un líquido orgánico altamente polar y miscible. Es básicamente inodoro y tiene un bajo nivel de toxicidad. El DMSO es un solvente aprótico dipolar y tiene un punto de ebullición relativamente alto. OBJETIVO GENERAL Inducir mutaciones aplicando agentes teratógenos como vitamina A y dimetil sulfoxido a ratones en etapa gestante (dias 4y7) y observar los daños que causan estos agentes a nivel morfológico. OBJETIVO PARTICULAR Observar el efecto producido por estos agentes en el organismo (organo, tejido y/o sistema). Estudiar la importancia que tienen los agentes Teratogénicos asi como los efectos que causan en los diferentes organismos. Conocer el ciclo estral y aprender a manipular a los ratones para un buen trabajo experimental. HIPOTESIS, en base a lo investigado se menciona que la vitamina A puede causar algunas malformaciones tales como fisuras faciales, exoftalmos, malformaciones del pabellón auricular, y el dimetil sulfoxido causa dismorfias graves craneofaciales, defectos cardíacos y alteraciones del sistema nervioso central, además de un elevado índice de abortos espontáneos. Por lo tanto si se administra a los ratones en los primeros dìas de gestaciòn agentes Teratogénicos (dimetil sulfoxido y vitamina A) se esperaria observar algun tipo de malformación (organo, tejido y/o sistema) en los fetos de los ratones trabajados. MATERIAL Y EQUIPO microscopio estereoscopio goteros de punta alargada y angosta portaobjetos estuche de disección sonda gástrica balanza analítica o granataria algodón pipetas aserrín jaula alimento para ratones MATERIAL BIOLOGICO 4 ò 5 ratones hembras 1 ratón macho REACTIVOS Solución salina (prepara al 0.85% de cloruro de sodio) Etanol al 95% Colorante giemsa (dilución 1:20 v/v Vitamina A dimetil sulfoxido éter acetona KON al 1% Solución de rojo de alizarina al 0.1% en solución de OKH al 1% Solución aclarante( agua destilada 79ml,KOH 1g, glicerina 20ml Solución de glicerina al 20%,40%, 60% 80% y 100% Timol PROCEDIMIENTO FROTIS VAGINAL 1.-comprobar el sexo de 4 animal, marcarla ratas y jaula con un marcador 2.-realizar lavados vaginales, tomar con un gotero solución salina, lavar varias veces la vagina d la rata y recuperar liquido, observar al microscopio determinar ciclo estral APAREAMIENTO 3.-colocar a la hembra que se encuentre en fase de proestro con un macho semental 6.-se tomara a una rata muestra a la cual no se le administrara ninguna sustancia, se pesara diariamente 5.-las hembras embarazadas deben pesarse diariamente 4.-horas después realizas frotis para corroborar que ha sido cubierta por el macho VITAMINA A 8.-esta sustancia se administrara por vía gástrica, por medio de una sonda gástrica. La dosis será de 25000 U.I 1ml. En el 4 dia 9.-El animal será trasladado a su jaula observarlo, pesarlo diariamente, buscando en el aserrín indicio de aborto ADMINISTRACION DE SUSTANCIAS 7.-se usara vitamina A, dimetil sulfoxido, la administración será en forma escalonada, empezando el día 4 de gestación hasta el día 8 11.- una vez inyectado colocarlo en la jaula y hacer observaciones y continuar pesando diariamente, buscar en el aserrín algún resto de sangre o indicio de aborto DIMETIL SULFOXIDO 10.-esta sustancia se administrara por vía intraperitoneal en una dosis de 1ml, al 100%, al 7 día 12.-SACRIFICACION A los 19 días de gestación se sacrificaran a las ratas, con éter, cuando se aya muerto, cortar la piel y el músculo de la cavidad abdominal, retirar los intestinos, sacar a los embriones 13.- observar y reconocer las estructuras que contienen y fijan al embrión, colocar a los embriones en solución salina y lavarlos cambiando la solución hasta eliminar la sangre 14.-colocar a los embriones en alcohol al 95% durante 3 días, después pasarlos a acetona de 2 a 4 días, luego colocarlos otra vez en alcohol al 95% por 12 hrs. 17.- se colocan en una solución de agua destilada 79 ml, KOH 1gr,glicerina 20ml.hasta que los tejidos estén bien aclarados y los huesos sean visibles 16.-transferir a los embriones a una solución de rojo de alizarina al o.1% en solución de KOH al 1% hasta que los huesos se tiñan aproximadamente 12 hrs. tener cuidado con la sobre tinción 15.- colocar los embriones en una solución de KOH al 1% hasta que se vean claramente las estructuras 18.-colocar al embrión en pasos OBJETIVOS sucesivos en concentraciones de glicerina de 20%.40%,60%80% de 12 a 24 hrs. cada cambio 19.- colocar a los embriones en glicerina pura con unos granos de timol como conservador 20.-observar los embriones con un estereoscopio para buscar alteraciones, anotar las observaciones Bibliografía Gilbert, Scout F. Biología del desarrollo. Médica Panamericana, 2005 Ford MD, Clinical Toxicology. 1st ed. Philadelphia, Pa: WB Saunders; 2001:297 Institute of Medicine. Food and Nutrition Board. Dietary Reference Intakes for Vitamin A, Vitamin K, Arsenic, Boron, Chromium, Copper, Iodine, Iron, Manganese, Molybdenum, Nickel, Silicon, Vanadium, and Zinc. National Academy Press, Washington, DC, 2001.