Download instrucciones generales para el usuario de los servicios

SUBGERENCIA DE PROTECCIÓN Y REGULACIÓN PECUARIA
Grupo de Diagnóstico Veterinario
INSTRUCCIONES GENERALES PARA
EL USUARIO DE LOS SERVICIOS OFICIALES
DE DIAGNÓSTICO
VETERINARIO EN COLOMBIA
José Darío Mogollón Galvis, MSc. PhD. María Antonia Rincón Monroy, DMV, MSc.
Rafael Mauricio Villalobos Álvarez, DMV, MSc. Claudio Bohórquez Caicedo, DMV, MSc
Néstor Alfonso Mossos Campos, DMV, PhD. Gustavo Arbeláez Rendón, DMV, Ms, PhD.
John Jairo Navarro Bahamón, DMV
Bogotá D. C., 2003
© Publicación del Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
ISBN:
Código:
primera edición: diciembre de 2003
PRODUCCIÓN EDITORIAL
Fotomecánica, impresión y encuadernación
Tel: 288 5338, Bogotá, DC, Colombia
Impreso en Colombia
Printed in Colombia
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
2
CONTENIDO
INSTRUCCIONES GENERALES PARA EL USUARIO DE LOS SERVICIOS
OFICIALES DE DIAGNÓSTICO VETERINARIO
PRESENTACIÓN
7
1. MISIÓN DEL GRUPO DE DIAGNÓSTICO VETERINARIO..................................................9
2. OBJETIVOS...............................................................................................................................9
2.1 Introducción
9
3. PROPÓSITO GENERAL DE ESTE DOCUMENTO..............................................................10
4. INFORMACIÓN GENERAL PARA LOS USUARIOS...........................................................10
4.1 Horario general de trabajo en el laboratorio nacional de diagnóstico
4.2 Localización del laboratorio
4.3 Atención fuera del horario
4.4 Horario general de trabajo en los centros de diagnóstico
4.5 Localización de los centros de diagnóstico
4.6 Portafolio de servicios
10
10
10
10
10
10
5. DELINEAMIENTOS GENERALES PARA LA TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS................11
5.1 Envío de muestras
5.2 Formas para envío de muestras
5.3 Guía general para el empaque de las muestras
5.4 Enfermedades bajo programa oficial
5.5 Interpretación de resultados y atención de consultas
5.6 Tarifas de los servicios
5.7 Envío de especímenes o muestras
5.8 Procesamiento de las muestras
5.9 Bioseguridad y control de enfermedades en el laboratorio
5.10 Informe de resultados
11
11
11
13
13
13
14
14
14
14
6. ORGANIZACIÓN DEL LABORATORIO NACIONAL DE DIAGNÓSTICO.........................15
6.1 Patología
6.2 Servicio de necropsias
6.3 Guía general para necropsias de campo
6.4 Lesiones macroscópicas
6.5 Recomendaciones generales para el envío
6.6 Preparación de la formalina neutra tamponada
6.7 Histoquímica e inmunohistoquímica
16
16
16
16
17
18
18
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
3
7. CRITERIOS GENERALES EN LA SELECCIÓN DE LAS MUESTRAS PARA EL
DIAGNÓSTICO, SEGÚN LOS PROBLEMAS MÁS FRECUENTES EN EL CAMPO ..........19
7.1 Aborto bovino
7.2 Bovinos con síndrome nervioso
7.3 Enteritis (diarrea) en terneros menores de dos meses de edad
7.4 Enteritis (diarrea) en terneros mayores de dos meses de edad y adultos
7.5 Neumonía bovina (complejo respiratorio bovino)
7.6 Aborto en porcinos
7.7 Síndrome nervioso en porcinos
7.8 Diarrea en lechones lactantes
7.9 Causas de diarrea en lechones destetos (precebo), levante y ceba
7.10 Complejo respiratorio porcino
7.11 Aborto en ovinos y caprinos
7.12 Diarrea en ovinos y cabritos jóvenes menores de un año
7.13 Diarrea en ovinos y caprinos mayores de un año
7.14 Sindrome nervioso en ovinos y caprinos
7.15 Neumonía en ovinos y caprinos (complejo respiratorio)
7.16 Aborto en equinos
7.17 Causa de diarrea en equinos
7.18 Síndrome nervioso en equinos
7.19 Neumonía en equinos
7.20 Síndrome nervioso en caninos y felinos
7.21 Neumonía en caninos y felinos
7.22 Enteritis (diarrea) en caninos y felinos
7.23 Síndrome nervioso en aves
7.24 Complejo respiratorio aviar
7.25 Enfermedades de tipo generalizado-sistémico
7.26 Enfermedades aviares que afectan el sistema linfoide y producen
signos de inmunodepresión
7.27 Enfermedades aviares asociadas con neoplasias (linfoproliferativas)
19
20
21
22
23
23
24
25
26
27
28
28
29
30
30
31
31
32
33
33
34
35
36
36
37
38
39
8. USO DE LA SEROLOGÍA PARA EL DIAGNÓSTICO DE CASOS DE ABORTO...............40
8.1 Comentarios generales
8.2 Comentarios sobre ciertas enfermedades en particular
40
41
9. BACTERIOLOGÍA GENERAL ..................................................................................................42
9.1 Recomendaciones generales para el envío de muestras
9.2 Muestras para cultivos de bacterias anaerobias
9.3 Susceptibilidad a los antibióticos, antibiograma
9.5 Enfermedades que se pueden diagnosticar con ayuda en el estudio bacteriológico
9.4 Información por teléfono de los resultados de bacteriología
9.6 Exámenes especiales en bacteriología (referencia)
43
43
44
45
45
47
10. SEROLOGÍA ...........................................................................................................................48
10.1 Oferta del servicio
10.2 Requisitos generales para el envío de muestras para exámenes serológicos
10.3 Serologias para casos de importación y/o exportación
10.4 Informe de los resultados delas pruebas serológicas
10.5 Interpretación de los resultados de algunas pruebas serológicas para bovinos
10.6 Interpretación de algunas pruebas serológicas en porcinos
10.7 Interpretación de las pruebas serológicas para aves
10.8 Interpretación de algunas pruebas serológicas en la especie equina
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
4
48
48
49
49
50
51
53
53
11. VIROLOGÍA Y DIAGNÓSTICO POR MÉTODOS MOLECULARES...................................54
11.1 Guía para recolección y envío de muestras
11.2 Métodos convencionales para detección de virus
11.3 Inmunofluorescencia directa en secciones congeladas de tejidos
11.4 Prueba de elisa para captura de antígeno
11.5 Pruebas moleculares para estudiosde los virus
11.6 Reacción en cadena de la polimerasa (pcr)
11.7 Análisis de las secuencias de nucleótidos
11.8 Pruebas moleculares disponibles en el laboratorio nacionalde diagnóstico
11.9 Oferta del servicio
11.10. Guía especial para envío de muestras para las enfermedades
virales de control oficial
54
55
56
56
56
56
57
57
57
58
12. RECOLECCIÓN Y ENVÍÓ DE MUESTRAS AL LABORATORIO DE
PATOLOGÍA CLÍNICA Y PARASITOLOGÍA........................................................................60
12.1 Ácaros de la Sarna
12.2 Clasificación de ectoparásitos y parásitos adultos de: bovinos,
pequeños rumiantes, porcinos, aves, caninos, felinos, dípteros (abejas)
entre otros y animales silvestres.
12.3 Muestras de materia fecal para recuento de huevos de parásitos
gastrointestinales, coccidias y Fasciola sp. y presencia de larvas de
parásitos pulmonares
12.4 Muestra(s) de orina para observar huevos de nematodos
(ejemplo: Stephanurus dentatus en cerdos)
12.5 Muestra de sangre para hemoparásitos y hemograma
12.6 Muestra para uroanálisis
60
61
61
61
61
62
13. LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA ....................................................................................62
13.1 Guía general para la toma y envío de muestras para diagnóstico toxicológico
13.2 Toma y remisión de la muestra para análisis de laboratorio
13.3 Observaciones importantes:
13.4 muestras precisas para análisis específico
13.5 Interpretación de resultados del laboratorio
13.6 Pruebas cualitativas disponibles en el laboratorio
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
5
62
63
64
64
65
65
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
6
PRESENTACIÓN
E
l mercado globalizado ofrece oportunidades a los países productores de alimentos pero a la vez
implica riesgos por el intenso intercambio de mercancías, que pueden transmitir organismos
patógenos y/o contaminantes que se constituyen en peligro para la salud pública y a la salud animal.
Para lograr una mayor competitividad del sector pecuario nacional, el Instituto Colombiano Agropecuario, a través del Grupo de Diagnóstico Veterinario, tiene la misión de reconocer e identificar las
enfermedades endémicas y exóticas de los animales en el país con métodos y procedimientos diagnósticos
e investigación aplicada de laboratorio y de campo, para que se posibiliten las acciones de lucha contra
estas enfermedades y así disminuir las pérdidas económicas de este sector de la economía y contribuir
a la seguridad alimentaria de Colombia. Es indudable que estas acciones también contribuyen a la
obtención de productos inocuos en las cadenas agroalimentarias de la producción pecuaria primaria,
evitando los riesgos biológicos para la salud humana y/o animal.
De otro lado, durante la última década se han desarrollado en el mundo numerosos métodos
serológicos de diagnóstico que permiten la identificación rápida de agentes bacterianos y/o virales, los
cuales se consiguen fácilmente en el comercio y de los que existen un gran número disponibles en el
portafolio de servicios que ofrece el Instituto. Debido al avance de la biotecnología, el ICA también
cuenta con nuevos procedimientos de diagnóstico de tipo molecular como la Reacción en Cadena de
la Polimerasa (PCR), que permite en cortos períodos detectar pequeños fragmentos del genoma de
los virus o bacterias en muestras de los animales afectados y facilita una confirmación rápida de los
problemas de campo.
El sistema de aseguramiento de la calidad de los procedimientos y servicios de diagnóstico veterinario garantiza un servicio eficiente y preciso a los usuarios, para apoyar todas las decisiones de campo
relacionados con la prevención, control y/o erradicación de las enfermedades.
ÁLVARO ABISAMBRA A.
Gerente General
LUZ ALBA CRUZ DE URBINA
Subgerente Protección y Regulación Pecuaria
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
7
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
8
Instrucciones generales para
el usuario de los servicios oficiales de
diagnóstico veterinario
INTRODUCCIÓN
E
l Laboratorio Nacional de Diagnóstico Veterinario y los Centros de Diagnóstico pertenecen al Grupo
de Diagnóstico Veterinario dentro del proceso de Protección y Regulación Pecuaria, del Instituto
Colombiano Agropecuario (ICA). El laboratorio ofrece un portafolio de servicios de referencia en las áreas
de bacteriología, patología, serología, toxicología, virología y biología molecular.
tación de los resultados a los Médicos Veterinarios
Zootecnistas y/o los productores.
1. MISIÓN DEL GRUPO DE
DIAGNÓSTICO VETERINARIO
La misión del Grupo de Diagnóstico Veterinario y del
Laboratorio Nacional de Diagnóstico Veterinario del
Instituto Colombiano Agropecuario (ICA) es proteger
la salud de los animales domésticos para lograr productos
de origen animal más seguros para los consumidores
colombianos, mediante el apoyo a los Médicos Veterinarios oficiales o de campo, a sus clientes y a las autoridades responsables de la salud animal para la detección
y prevención de las enfermedades. Para tal efecto, realiza
investigación diagnóstica en salud animal ofreciendo servicios de diagnóstico precisos, oportunos y accesibles a
los diferentes tipos de usuarios.
2. OBJETIVOS
Ø
Ø
Ofrecer un portafolio de servicios de diagnóstico
veterinario, accesible, preciso y oportuno a los productores, a los Médicos Veterinarios, Zootecnistas y
demás profesionales del sector pecuario y al servicio
de la salud pública.
Ø
Contribuir a la vigilancia epidemiológica de las
enfermedades de control oficial y de aquellas
enfermedades que pueden ser una amenaza para la
salud humana por ser transmisibles de los animales
al hombre.
Ø
Establecer planes de investigación diagnóstica que
permitan una continua actualización en el desarrollo
tecnológico de las metodologías de diagnóstico.
Ø
Promover la capacitación en diagnóstico veterinario
de los funcionarios del laboratorio, de la unidad de
diagnóstico del país y de particulares.
Ø
Autorizar y supervisar actividades de diagnóstico
veterinario que puedan realizar otros entes particulares y/o oficiales.
Estos objetivos se alcanzan por la continua adaptación y ajuste tecnológico de pruebas de laboratorio, de
la interpretación de los procedimientos de diagnóstico
y los planes de educación sanitaria de los profesionales
y/o productores, quienes al final son los responsables
de la salud de los animales.
Realizar pruebas de diagnóstico, registrar los resultados, reportar los hallazgos y ayudar en la interpre-
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
9
el conmutador 3686827-29 y en el teléfono 3686826
de Bogotá.
3. PROPÓSITO GENERAL DE ESTE
DOCUMENTO
El propósito de este documento, es informar y ayudar
a los Médicos Veterinarios, Zootecnistas, productores y
sus asistentes en la selección apropiada de las muestras y
en la preservación para su envío al laboratorio, con el fin
de obtener resultados oportunos y de mejor calidad que
faciliten la solución de la problemática de campo.
4.2 Localización del laboratorio
El Laboratorio está localizado dentro del perímetro del
campus de la ciudad universitaria (Universidad Nacional
de Colombia), cuya dirección es Avenida El Dorado No.
42-42 Bogotá-Cundinamarca
4. INFORMACIÓN GENERAL PARA LOS
USUARIOS
4.3 Atención fuera del horario
La recepción y procesamiento de muestras fuera del
horario normal se efectúa para aquellas enfermedades
de control oficial que tienen proyectos de erradicación
como son: la Fiebre Aftosa, Peste Porcina Clásica y la
Enfermedad de Newcastle y en casos de emergencia
sanitaria por presentación de enfermedades exóticas y
epidemias generadas por enfermedades endémicas.
4.1 Horario general de trabajo en el
laboratorio nacional de diagnóstico
Las horas laborables son de lunes a viernes de 8:00 AM
a 5:00 PM, con excepción de los días feriados en los
cuales no hay servicio.
En casos de emergencia relacionados con el diagnóstico de enfermedades de control oficial se debe acudir
al personal respectivo.
4.4 Horario general de trabajo en los centros
de diagnóstico
Directorio:
Las horas laborables varían en cada región del país.
En general, los Centros de Diagnóstico deben permanecer abiertos 8 horas al día. Los días feriados no
hay servicio.
Centro de Recepción de Muestras.
Telefax: 3686826
Coordinación Nacional de Diagnóstico Veterinario
Telefax: 3686830
Líder de Medicina Aviar
Teléfono: 3686820
Líder de Medicina Porcina
Telefax 3686836
Líder de Enfermedades Zoonóticas
Telefax: 3686836
Líder Enfermedades Vesiculares
Telefax: 3686821/24
E. Mail: [email protected]
4.5 Localización de los centros de diagnóstico
Los Centros de Diagnóstico están ubicados estratégicamente en diferentes ciudades del país. La dirección
precisa con sus respectivos teléfonos se puede apreciar
en la siguiente página.
4.6 Portafolio de servicios
Los Centros de Diagnóstico ofrecen los servicios básicos
de diagnóstico veterinario como son: necropsia y toma
de muestras para estudios histopatológicos, patología clínica (examen de hematozoarios y parasitología general),
Además, Información y consulta de los servicios
de diagnóstico en salud animal se puede obtener en
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
10
Bacteriología básica (aislamiento y perfil bioquímico de
gérmenes patógenos), Virología. Además, los Centros de
Diagnóstico de Bucaramanga, Tulúa y Cúcuta ofrecen
el servicio de evaluación histológica de tejidos. También
los Centros de Diagnóstico de Bucaramanga, Tulúa,
Villavicencio, Neiva, Medellín, Aguachica, Valledupar
y Barranquilla cuentan con equipo lector de ELISA
y tienen a disposición pruebas serológicas para aves,
bovinos y cerdos. Se debe consultar directamente con
cada uno de estos Centros en caso de requerir exámenes
de esta naturaleza.
tras, cuando se sospecha de una enfermedad de
control oficial, sin excepción. En estos casos debe
diligenciarse también el Formato Único de Recepción de Muestras.
Las formas de envío de muestras y/o especímenes
están disponibles en el Centro de Recepción de Muestras
en el Laboratorio Nacional y en los Centros de Diagnóstico del país. Estos formatos también están disponibles
en la página Web del ICA: www.ica.gov.co.
Para la remisión de las muestras, se debe consultar la
información sobre su empaque y envío en las diferentes
secciones del laboratorio.
5. DELINEAMIENTOS GENERALES PARA
LA TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS
5.3 Guía general para el empaque de las
muestras
5.1 Envío de muestras
Los laboratorios reciben muestras para su procesamiento,
las cuales preferiblemente deben estar acompañadas por
la historia clínica del problema. Además, las muestras y/o
especímenes deben ser remitidas en forma apropiada,
según el diagnóstico que se pretende obtener. En el
momento de recibir la muestra el profesional o técnico
del Centro de Diagnóstico debe proceder a diligenciar
la Forma 3-877 que corresponde al Formato Único de
Recepción de Muestras.
El propósito del empaque (embalaje) adecuado es proteger las muestras de las condiciones de temperatura
extremas (congelación y/o calor excesivo), y proteger
a las personas, que pueden estar en contacto con el
paquete, de la exposición a los agentes infecciosos. Por
esta razón, se considera muy importante prevenir la salida
de líquidos (goteo) de los recipientes y las cajas o neveras
de icopor que contienen las muestras. Las condiciones
generales para el empaque son las siguientes:
5.2 Formas para envío de muestras
Ø
Las formas para envío o recepción de muestras son
formularios que permiten registrar en forma precisa la
historia del problema. Esta información se requiere para
determinar en forma apropiada las pruebas de laboratorio y así obtener rápido un resultado.
Todas las muestras deben estar bien identificadas,
con rótulos que no se desprendan con el agua, o
usar marcadores indelebles. La nevera de icopor
debe estar correctamente identificada en su parte
externa.
Ø
Los formularios de remisión de muestras se pueden
incluir en bolsas plásticas que eviten la humedad si
van dentro del recipiente (nevera de icopor), o se
pueden colocar en un sobre que se puede adherir
y/o pegar en la superficie externa de la tapa de la
nevera de icopor.
Ø
Si en una nevera de icopor se van a enviar múltiples
casos, se deben empacar en forma separada con su
identificación. Esto es muy importante en caso de
envío de varios casos para estudios serológicos.
Ø
Formulario único de Recepción de Muestras: (Forma
ICA 3-877), este formato se utiliza para el envío de
todas las muestras y/o especímenes de laboratorio
y debe diligenciarse en su totalidad.
Ø
Formato único de Notificación de una enfermedad
de Control Oficial (Forma ICA 3-106 Información
inicial de Ocurrencia de Enfermedad en un Predio).
Esta forma debe diligenciarse para todas las mues-
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
11
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
12
Ø
Los sueros deben enviarse en lo preferible en viales
bien tapados y sellados, para evitar que se salga su
contenido.
Ø
Se debe colocar en cada nevera de icopor suficiente refrigerante para preservar los tejidos
frescos y los sueros. Se recomienda tener en
cuenta una proporción de 2:1 entre refrigerante
y tejidos frescos.
Ø
Los tejidos frescos se deben colocar en bolsas
plásticas estériles (tejidos bolsas Nasco), correctamente identificadas. En ocasiones es conveniente
usar doble bolsa para asegurar la bioseguridad del
espécimen, como por ejemplo en casos de rabia o
encefalitis equina.
Ø
Ø
Ø
Enfermedades bajo programa oficial en los bovinos,
equinos y porcinos.
Endémicas
Fiebre Aftosa
Estomatitis Vesicular
Brucelosis bovina
Tuberculosis bovina
Encefalitis Equina Venezolana
Enfermedad de Newcastle
Salmonelosis aviar
Rabia silvestre
Peste porcina clásica
Exóticas
Influenza aviar
Encefalopatía Espongiforme Bovina (EEB)
Peste Porcina Clásica
Para el envío de tejidos fijados en formalina se deben
usar frascos de plástico de boca ancha y con una
tapa que no permita la salida del formol; así mismo
colocar cinta de enmascarar alrededor de la tapa.
Estos frascos deben estar bien identificados. No se
deben usar frascos de vidrio.
Ø
Enfermedades de Control Oficial en las Aves:
Influenza Aviar
Salmonelosis
Enfermedad de Newcastle
Tener en cuenta que las bolsas y los frascos que
se envían dentro de una nevera de icopor tienen
el potencial de derramarse y producir goteo.
Por esta razón, se debe colocar alrededor de los
paquetes internos toallas de papel absorbente
o un material que permita evitar el acúmulo de
líquido dentro de la nevera. Es decir, todos los
especímenes y/o muestras se deben empacar de
tal manera que se pueda evitar el derrame o la
ruptura que se puede dar por la manipulación
de estos materiales en los servicios de correo o
envíos rápidos terrestre o aéreos.
5.5 Interpretación de resultados y
atención de consultas
Los profesionales de los Centros de Diagnóstico y del
laboratorio del Centro de Recepción de Muestras están
siempre disponibles para brindar asesoría en la selección
de las muestras y la prueba de laboratorio de elección, así
como también para informar sobre los métodos de preservación y transporte de las muestras. Los profesionales
tanto de los Centros de Diagnóstico como del Centro
de Recepción de Muestras del Laboratorio Nacional,
podrán ayudar en la interpretación de los resultados pero
el diagnóstico final y las estrategias del plan de acción a
nivel de campo serán de la responsabilidad del Médico
Veterinario oficial y/o privado, o del asistente técnico
que esté apoyando a cada productor en particular.
5.4 Enfermedades bajo programa oficial
De acuerdo con la legislación sanitaria nacional varias
enfermedades infecciosas son de notificación obligatoria,
pues existe un sistema de regulación y cuarentena que
forma parte del sistema de vigilancia epidemiológica del
Instituto Colombiano Agropecuario. Las enfermedades
bajo programa oficial son las siguientes:
5.6 Tarifas de los servicios
El Grupo de Diagnóstico Veterinario del ICA está
autorizado por el sistema de tarifas para cobrar por
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
13
los servicios ofrecidos por los laboratorios. Estas tarifas generan recursos que se utilizan para mantener el
amplio portafolio de servicios ofrecidos por el ICA.
Para mayor información sobre las tarifas vigentes, consultar el teléfono del Centro de Recepción de Muestras
(3686826), o visite la página web del ICA. Para cancelar
cualquier servicio se debe tener en cuenta que el pago
debe realizarse en efectivo, no se recibe dinero a través
de cheques o tarjetas de crédito.
ciones o exámenes de animales para compra o venta, se
debe solicitar la disponibilidad de la prueba y el tiempo
de respuesta para obtener el resultado, con el propósito
de evitar contratiempos. Los funcionarios del ICA o
profesionales autorizados para controlar las cuarentenas y/o las movilizaciones de animales en lo posible
deben hacer los contactos previos con el Centro de
Diagnóstico o con el Centro de Recepción de Muestras
más cercano, para preparar la prueba respectiva antes
del envío de las muestras.
5.7 Envío de especímenes o muestras
5.9 Bioseguridad y control de enfermedades
en el laboratorio
Es conveniente seleccionar la forma adecuada de transporte para asegurar la llegada oportuna al laboratorio. Para
tener certeza en el arribo oportuno en horas laborables
se recomienda efectuar sus envíos de lunes a jueves. Se
prefieren los envíos vía aérea usando el servicio de couriers
(aeromensajería) o entregas aeropuerto-aeropuerto.
Ø
Existe un sistema de bioseguridad y de contención
de agentes infecciosos en el Laboratorio Nacional
de Diagnóstico Veterinario y en los Centros de
Diagnóstico. El ingreso de personas no autorizadas
al laboratorio de bioseguridad y/o la sala de necropsias está estrictamente prohibido. En el Laboratorio
se examinan diariamente muestras y/o animales con
múltiples agentes infecciosos que se pueden transmitir a otros animales o al hombre. Los profesionales
pueden atender solicitudes para discutir el diagnóstico en la sala de recepción del laboratorio, o de cada
centro de diagnóstico.
Rotular en forma clara los datos del remitente y si es
necesario rotular como peligro o material biológico.
El Laboratorio Nacional de Diagnóstico tiene un
servicio de recolección de muestras animales a través
del servicio de aeropuerto-aeropuerto. Para tal fin se
debe llamar al Centro de Recepción de Muestras para
informar sobre el número de la guía (o número de envío)
de la remesa.
5.10 Informe de resultados
Siempre se debe tener en cuenta el riesgo que
representa el enviar muestras cerca de los fines de
semana o puentes, lo cual puede conducir a su pérdida
o deterioro.
A todas las muestras que se reciben en los Centros de
Diagnóstico o en el Centro de Recepción de Muestras
del laboratorio, se les asigna un número de recepción
(número de caso). El costo de los exámenes se paga con
cargo a dicho número. Los resultados finales respectivos
se entregan con base en el número de ingreso. Los resultados se pueden entregar personalmente presentando el
respectivo recibo o se envían por fax a los Centros de
Diagnóstico del país.
5.8 Procesamiento de las muestras
La misión del ICA es proporcionar un servicio eficiente
y oportuno. Sin embargo, se debe prever que muchas
pruebas de diagnóstico no se realizan diariamente o que
los procedimientos requieren de más de un día para la
obtención final del resultado.
El diagnóstico presuntivo de necropsia y/o
resultados preliminares de aislamiento bacteriano
y/o sensibilidad antibiótica, se puede informar vía
telefónica citando el número de ingreso del espécimen
al laboratorio.
En caso de necesitar exámenes para importación o
exportación de animales, para ingreso a ferias y exposi-
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
14
gerencia de Protección y Regulación Pecuaria. El
laboratorio está organizado en varias secciones o
laboratorios por especie animal, para proporcionar
un servicio eficiente y con un alto grado de habilidad
diagnóstica (Figura 1).
6. ORGANIZACIÓN DEL LABORATORIO
NACIONAL DE DIAGNÓSTICO
El Laboratorio Nacional de Diagnóstico está dentro
del subproceso de diagnóstico veterinario de la Sub-
FIGURA 1. Organigrama del Laboratorio Nacional de Diagnóstico Veterinario
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
15
signos clínicos y las lesiones macroscópicas observadas
determinan cuáles tejidos se deben tomar. Los siguientes
criterios pueden servir como recomendaciones generales
para optimizar la información que se pueda obtener con
el diagnóstico.
6.1 Patología
El Laboratorio Nacional de Diagnóstico ofrece el servicio de Patología Diagnóstica mediante la realización de
necropsias, evaluación histopatológica de muestras de
tejidos. En casos especiales se pueden realizar estudios
de Inmunohistoquímica para la detección de antígenos
(agente causal) en los tejidos fijados en formalina
6.4 Lesiones macroscópicas
Siempre se deben tomar muestras representativas de
cualquier órgano que presente lesiones macroscópicas.
En ocasiones, por ejemplo se describen erosiones o úlceras en un animal especialmente en bovinos con casos
sospechosos de enfermedades vesiculares, pero raras
veces se toman tejidos para histopatología, no obstante
los tejidos fijados en formalina que tengan úlceras son
una buena muestra para realizar el diagnóstico diferencial
con diarrea viral bovina (DVB).
Cualquier consulta previa al envío de los tejidos es
bienvenida en especial cuando se piensa enviar series de
tejido para evaluación en casos de investigación o para
dilucidar una situación de campo en particular( ejemplo
envío seriado de bolsas de fabricio para estudiar la situación de la enfermedad de Gumboro).
6.2 Servicio de necropsias
Piel
Los patólogos veterinarios están disponibles para examinar cadáveres de animales domésticos, silvestres, o peces,
o analizar tejidos fijados en formalina para detectar la
presencia de lesiones microscópicas para asociarlas con
una posible causa de enfermedad. Para estudio se reciben
animales vivos con signos típicos de la enfermedad, sin tratamiento, o animales muertos pero que no tengan signos
de descomposición. No se realizan exámenes en animales
o tejidos descompuestos o muestras enviadas en forma
incorrecta para evitar pérdida de tiempo, gasto en reactivos
de laboratorio y/o dificultades con los usuarios.
Se deben colectar tanto segmentos de piel fijada en
formol como sin fijar. En casos especiales por medio
de Inmunoperoxidasa se pueden detectar infecciones
persistentes de diarrea viral bovina (la muestra ideal es
piel de la oreja o banda coronaria).
Lengua
Los fragmentos de lengua fijada en formalina son útiles
para detectar miopatías generalizadas (deficiencia de vitamina E), especialmente en fetos y neonatos (casos de
Neospora caninum). El músculo del diafragma también
puede ser útil para el mismo propósito.
Es absolutamente necesario el envío de una historia
completa del caso o en su defecto completar el formulario único de recepción de muestras en su totalidad.
Cuando se requiera un diagnóstico para fines legales
de peritazgo o casos de animales con seguro, se debe
informar tanto en la historia como al Médico Veterinario
encargado del Centro de Recepción de Muestras o del
Centro de Diagnóstico respectivo y se debe registrar en
el formulario de ingreso respectivo.
Encéfalo y médula espinal
Es conveniente colectar médula espinal tanto como
se pueda una vez se remueva la cabeza. Se requiere
enviar medio cerebro refrigerado y medio cerebro
fijado en formalina (realizar incisiones sagitales para
permitir la fijación). Es muy importante estar seguros del envío del cerebelo, tallo encefálico (óbex),
hipocampo y corteza cerebral para facilitar el diagnóstico diferencial del síndrome nervioso (bovino,
aviar o porcino)
6.3 Guía general para necropsias de campo
Cuando se colectan tejidos de animales a los cuales se les
haya practicado la necropsia en el campo, la historia , los
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
16
Timo
1-2 centímetros de ancho de ileon, yeyuno y uno de
duodeno para fijación en formalina. Es importante
darse cuenta que la formalina penetre a través del
segmento de intestino, una vez ocurre la inmersión
del tejido. También se debe tomar una porción del
colon para fijación.
El timo es un órgano que permite detectar infecciones
por el virus de la diarrea viral bovina y el síndrome respiratorio y reproductivo porcino (PRRS). Si se puede,
colectarlo fresco y/o fijado en formalina.
En ocasiones es muy útil tomar varios pedazos
(no mayores de 1cm) de las diferentes secciones de los
espirales del colon. Se debe siempre tomar segmentos
de los ganglios linfáticos mesentéricos.
Tráquea
En general, la tráquea es útil para un examen histológico
si hay lesiones macroscópicas. En casos de membranas
fibrinonecróticas (tejido muerto adherido a la mucosa)
presentes en la mucosa, se podría utilizar segmentos de
tráquea para el diagnóstico de IBR.
Estómago
Si hay lesiones se deben tomar tejidos. En los rumiantes si hay lesiones, un pedazo pequeño de abomaso es
suficiente.
Pulmón
Es conveniente enviar siempre tanto segmentos frescos
de pulmón como fijado en formalina. Las muestras se
deben colectar de diferentes áreas del pulmón: craneales
(anteriores), de la parte media (región cardiaca) y lóbulos
caudales. Las porciones frescas de pulmón deben ser tan
grandes como sea posible.
6.5 Recomendaciones generales para el envío
En la gran mayoría de casos el envío de muestras fijadas
en formalina al 10% es el mejor método para llevar a
cabo un diagnóstico preciso. Sin embargo, la selección
adecuada y la preservación de las muestras es esencial
para un uso económico y eficiente del laboratorio de
Histotecnia y Patología. Las dos condiciones que con
más frecuencia interfieren con el diagnóstico son (1)
los cambios autolíticos (descomposición) postmorten
y (2) la colección de muestras muy tarde en el curso de
la enfermedad.
Corazón
Se debe abrir el corazón y examinar todas las válvulas,
en caso de encontrar lesiones se toman muestras de las
que se hayan identificado. Si no hay evidencia de falla
cardiaca, se debe enviar músculo papilar del ventrículo
derecho.
Si se colectan muestras frescas de diferentes órganos
estos se deben empacar por separado para impedir la
contaminación cruzada. Nunca se deben colocar segmentos de intestino con otros tejidos.
Hígado, riñón y bazo
Es recomendable que en todos los casos cuando se practique una necropsia se tomen muestras de estos órganos,
pues son muy útiles en caso de enfermedades infecciosas
o problemas tóxicos (hígado, riñón).
Las muestras para histopatología como se viene
observando deben incluir fragmentos de órganos con
lesiones macroscópicas, tomando tanto la parte lesionada
como la parte aparentemente sana del tejido. Estos se
deben depositar en un frasco de plástico de boca ancha.
Nunca se deben usar frascos de vidrio debido a la
posibilidad de que se rompan en el transporte. La
proporción de formalina en tejido es de 10:1, con el
propósito de permitir una buena fijación.
Intestinos
Cuando se piense enviar intestino delgado, grueso o
estómago es necesario empezar a trabajar desde la
válvula Ileocecal y analizar luego hacia el estómago.
Se deben tomar tres segmentos bien separados de
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
17
Normalmente se requiere un mínimo de 48 horas para
un diagnóstico por histopatología, 24 horas para la fijación
y 24 horas para el procesamiento. Por esta razón los tejidos
que se tomen para histopatología se deben colectar en la
necropsia e irlas fijando inmediatamente, para reducir la
posibilidad de autólisis. El resultado se puede obtener por
lo general dos días después de realizada la necropsia.
bufferada (tamponada). Por favor nunca enviar tejidos
fijados en alcohol o en formalina al 37% sin diluir.
Tener en cuenta, además, que los tejidos para estudios
histológicos jamás se deben congelar o refrigerar.
La formalina neutra al 10% se prepara como
sigue:
En general, para el envío de tejido fijados en formalina para histopatología se deben tener en cuenta las
siguientes consideraciones:
Ø
Órganos sólidos: fragmentos o pedazos de 0.5-1 cm
que incluyan la lesión y las áreas de transición entre
el tejido sano y la lesión.
Ø
Intestino: segmentos de 1-2 cm de tamaño para que
al sumergirlos en formalina ésta penetre perfectamente. No se debe amarrar los extremos.
Ø
Agua destilada
Solución de formalina al 37%
Cloruro de sodio
Fosfato de potasio monobásico
Fosfato de potasio dibásico
6.7 Histoquímica e inmunohistoquímica
Existen varias técnicas de Histoquímica para demostrar
la presencia de agentes infecciosos o estructuras de
hongos o bacterias dentro de secciones histológicas de
tejidos fijados con formalina. Estas técnicas incluyen:
El encéfalo, incluyendo el tallo encefálico: depositar
la mitad en formalina haciendo incisiones sagitales (como cortando pan), para permitir una mejor
fijación.
Ø
Tumores: Colocarlos totalmente en formalina, si la
muestra es mayor de 1 cm. hay que cortarla sagitalmente.
Ø
Las impresiones o frotis y los aspirados de los
tumores tienen poca utilidad. Siempre se requiere
de biopsias de la masa tumoral para el diagnóstico
definitivo.
900 ml
100 ml
8g
4.0 g
6.5 g
6.7.1 Técnicas Especiales de Histoquímica
Estas técnicas permiten demostrar la presencia de
bacterias, hongos o componentes celulares mediante
el uso de coloraciones diferenciales. Como ejemplo se
puede mencionar la coloración de Gram para demostrar
bacterias, o la coloración Giemsa para la detección de
Babesia o Anaplasma o detección de gránulos en las
células de Mast. También se puede examinar tejidos
para detectar hongos con la coloración de PAS o la
de Grocott.
6.6 Preparación de la formalina neutra
tamponada
6.7.2 Técnica Inmunohistoquímica
Este tipo de método sirve para demostrar la presencia
de antígenos específicos dentro de secciones histológicas
de tejidos. El agente (virus o bacteria) se puede localizar y observar mediante microscopio de luz dentro del
tejido y su asociación con las lesiones. Esta técnica se
desarrolla en tejidos fijados en formalina. En general se
pueden tener resultados en 48-72 horas si se envían los
tejidos apropiados.
La formalina concentrada se puede conseguir en los diferentes proveedores de reactivos químicos del país. En
caso de emergencia la formalina al 37% no tamponada
(bufferada) se puede usar para el envío de tejidos (en una
proporción de 1:9 formalina al 37%: agua).
No obstante, lo recomendable es enviar los tejidos para
estudios histológicos fijados en formalina neutra al 10%
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
18
La técnica está disponible para los siguientes agentes:
Agente
Lawsonia intracellularis
Virus del PRRS
Virus sincitial bovino
Diarrea viral bovina
Neospora caninum
IBR
Contenido estomacal:
Fluido Toráxico:
Tejidos que se prefieren
Timo:
Pulmón:
Yeyuno, ileon y colon
Amígdalas y pulmón
Pulmón
Ileon, ganglio linfático, piel y
lesiones de las mucosas, encéfalo, riñón.
Cerebro, corazón y músculo
esquelético
Encéfalo, corazón, hígado,
pulmón, tráquea, bazo, riñón.
Alternativamente se puede enviar el feto completo y
la placenta refrigerados, lo más pronto al laboratorio.
7.1.1 Técnicas de Muestreo
1. No congelar los tejidos que se remitan en formol
buferado
2. Se requiere en lo posible el envío de placenta. Si
esta no se envía se disminuye en forma ostensible
la posibilidad de llegar a un diagnóstico.
3. Es útil enviar sueros de las vacas afectadas y de las
vacas no afectadas para propósitos de comparación.
7. CRITERIOS GENERALES EN LA
SELECCIÓN DE LAS MUESTRAS
PARA EL DIAGNÓSTICO, SEGÚN LOS
PROBLEMAS MÁS FRECUENTES EN EL
CAMPO
7.1.2 Agentes que se pueden detectar mediante el
examen rutinario de tejidos de fetos y placentas
Esta guía rápida se preparó para ayudar a los usuarios
cuando se tenga un problema en determinado sistema
de producción.
Bacterias
Arcanobacterium pyogenes, Bacillus spp,
Brucella spp, Campylobacter spp, Listeria
monocytogenes, Leptospira spp., etc.
Hongos
Aspergillus fumigatus, Phycomicetos, etc.
Protozoos
Virus
Neospora caninum, Toxoplasma gondii, Sarcosporidiosis, IBR-DVB
7.1 Aborto bovino
Si se practica la necropsia de los fetos en el campo, las
muestras que se requieren son las siguientes:
Suero de la madre:
Cerebro fijado en formalina :
Corazón fijado en formalina:
Ileon fijado en formalina:
Riñón:
Hígado:
Placenta:
Músculo esquelético:
Piel:
Bazo:
1-3 ml en una jeringa estéril,
refrigerado
1-3 ml en una jeringa estéril,
refrigerado
Fijado en formalina 1-2 cm
1-3 cm fijado en formalina
4-5 ml de las vacas afectadas.
En la sección de serología se
mencionan posteriormente
otros detalles.
1-2 cm
1-2 cm
1 cm
1 riñón completo, refrigerado, en una bolsa plástica
(estéril si es posible), y fijado
en formalina 1-2 cm
fijado en formalina 1-2 cm
3-4 cotiledones refrigerados,
2 cotiledones fijados en
formalina.
Lengua y diafragma fijado en
formalina 1-2 cm
Fijado en formalina 1-2 cm
Fijado en formalina 1-2 cm
7.1.3. Agentes que requieren procedimientos
especiales
Bacteria
Leptospira, se detecta más fácilmente en
el riñón.
Protozoos
Tricomona fetus. Su diagnóstico es mejor
mediante el examen de lavados prepuciales o fluidos fetales como el contenido del
estómago.
7.1.4 Comentarios Generales
La Leptospira es un organismo muy frágil (débil) y en la
mayoría de las veces no se puede detectar en muestras
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
19
que toman mucho tiempo en llegar al laboratorio. Si se
sospecha Leptospirosis se debe tratar en lo posible de
enviar al laboratorio un feto fresco, refrigerado. Se puede
hacer una prueba de Inmunofluorescencia con el riñón.
El chequeo serológico de los sueros de las madres es
muchas veces práctico y útil.
7.2.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
1. En lo posible no enviar la cabeza completa, pero
si no hay oportunidad de sacar el encéfalo se debe
refrigerar para el envío.
2. Nunca se debe congelar el cerebro fresco o la
cabeza.
El diagnóstico del aborto por Neospora caninum
está basado en el examen histopatológico del cerebro,
corazón, músculo esquelético, hígado, pulmón, placenta
para observar las lesiones características. La presencia
de los organismos en los tejidos se debe confirmar por
Inmunohistoquímica. La ausencia de anticuerpos en la
vaca descarta la posibilidad de Neosporosis.
3. La mitad del encéfalo se debe empacar cuidadosamente en una bolsa plástica estéril en lo posible
tratando que no se vaya a desintegrar.
4. La mitad del encéfalo se debe incidir por lo menos
dos veces en forma transversal para facilitar la fijación y enviarlo en formol buferado.
7.2 Bovinos con síndrome nervioso
7.2.2 Agentes que se pueden detectar con este examen
rutinario
Muestras para enviar Se deben tomar tejidos del SNC, de
animales que se sacrifiquen, con los
signos clínicos o muertos
Muestras de sangre
Como opcional investigar por ejemplo
intoxicación con plomo o fosforados.
Sangre con EDTA para análisis de
plomo o inhibición de la colinesterasa.
Cerebro (incluyendo Medio cerebro dividido longitudinalbase del encéfalo y mente, fresco y refrigerado.
médula oblonga)
Medio cerebro fijado en formalina
o en su defecto pedazos de 2 cm
de corteza cerebral, tallo encefálico,
cerebelo e hipocampo.
Colon
Opcional, según el caso, para investigar intoxicación con plomo, se toma
fragmento de hígado refrigerado y otra
porción en formol buferado.
Riñón
Para investigar intoxicación con plomo
se toma un fragmento de riñón refrigerado y otro fragmento en formol
buferado.
Médula espinal
Listeria monocytogenes, Arcanobacterium
pyogenes, Haemophilus somnus etc.
Virus
Rabia, IBR, DVB
Prion
Encefalopatía espongiforme bovina
Enfermedades
no infecciosas
Polioencefalomalacia (deficiencia de
tiamina), Necrosis cortical, láminar por
intoxicaciones
Hemoparásitos Babesiosis cerebral
7.2.3 Agentes que requieren pruebas de diagnóstico
especiales
Opcional para Coccidiosis cerebral,
se toman varias asas intestinales con
el contenido y se envían en una bolsa
de plástico refrigeradas.
Hígado
Bacterias
El examen de las muestras de cerebro para el diagnóstico
del virus rábico se realiza por medio de la Inmunofluorescencia directa con un conjugado específico. Si la
prueba es negativa, se procede a la inoculación de ratones y se espera hasta 3 semanas; si los ratones mueren,
la prueba es positiva y confirma el diagnóstico.
Si hay incoordinación motora se toma
médula espinal. Se toman secciones
de 1-2 cm de diferentes sitios y se fijan
en formalina.
Parásitos
Coccidiosis, flotación de las heces. No hay
lesiones en el cerebro
Toxicosis
Plomo: sangre completa con EDTA, hígado y
contenido estomacal refrigerado.
Organofosforados: sangre completa con EDTA,
cerebro, contenido ruminal refrigerado
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
20
7.2.4 Comentarios
7.3.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
Se debe tener en cuenta que el cerebro y la base del
encéfalo (tallo encefálico) se afectan en la mayoría de las
enfermedades del sistema nervioso central, por lo tanto
siempre se deben enviar las muestras respectivas.
1. Las muestras deben tomarse tan pronto ocurra la
muerte (en los siguientes 10 minutos)
2. Por ningún motivo se deben amarrar los extremos
del intestino.
En el caso de enfermedades de tipo toxico, nutricional o metabólica que causen signos nerviosos que
no produzcan lesiones en el cerebro, se debe recurrir al
análisis de otros tejidos.
3. Es importante tomar secciones de intestino no
mayores de 1 cm y tratar de que el formol penetre
fácilmente en la luz del intestino
4. Todos los tejidos de un ternero se pueden colocar
en un frasco de plástico con formalina. Las muestras
de intestino se deben enviar por separado y cada
ternero por separado. Los tejidos frescos se deben
refrigerar, no congelar.
7.3 Enteritis (diarrea) en terneros menores de
dos meses de edad
Muestras que se deben enviar : las muestras de materia
fecal son útiles solamente si se colectan el primer día que
se presenta la diarrea. Como alternativa también se pueden
tomar tejidos de un ternero que se sacrifique o muera.
Abomaso
7.3.2 Agentes que se pueden detectar por el examen
rutinario
Segmentos de 4-5 cm fresco y refrigerado,
en bolsas estériles. Segmentos de 1-2 cm
fijados en formalina.
Contenido
cecal
10 ml de contenido, refrigerado
Ileon
Dos o tres segmentos de 10 cm refrigerado,
colocados en bolsas plásticas estériles
Yeyuno
Dos o tres pedazos de 10 cm refrigerado,
en bolsas plásticas
Hígado
Fragmentos o pedazos refrigerados y pedazos de 1-2 cm, en formalina
Ganglios
mesentéricos
Muestras de varios ganglios en una bolsa
plástica y se colocan en refrigeración, fragmentos de 1-2 cm en formalina
Colon en
espiral
Se toman varias asas y se colocan en una
bolsa estéril, se envían en refrigeración.
También se toman varios pedazos de 1
cm en formalina
Bazo
Se colecta un fragmento de moderado
tamaño y se envía refrigerado en bolsa
estéril. En formalina se coloca 1 cm
Bacterias
Escherichia coli, Salmonella spp, Clostridium
spp, Enterococcus durans
Parásitos
Crystosporidium, coccidias
Virus
Rotavirus, coronavirus
7.3.3 Agentes que requieren técnicas especiales
Virus DVB
Se puede realizar Inmunohistoquímica del
Ileon, colon, ganglio linfático mesentérico,
bazo, piel. Si se intenta aislamiento viral se
puede colectar ganglio linfático, bazo, riñón,
timo y pulmón
7.3.4 Comentarios
Se sugiere que en casos de enteritis necrótica se deben
colectar segmentos de intestino necrótico y no necrótico tanto fresco como fijado en formalina. Se pueden
hacer impresiones de la mucosa (para colorear con
Gram o Zielh Neelsen), en especial si se quiere buscar
Crystosporidium.
Como la autólisis (descomposición) ocurre muy
rápido en los intestinos de bovino, las muestras se deben
tomar muy pronto en la necropsia. Esto es más conveniente que llevar todo el ternero al laboratorio.
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
21
en el formol es necesario asegurarse que el formol
penetre fácilmente.
7.4 Enteritis (diarrea) en terneros mayores de
dos meses de edad y adultos
3. Se puede tomar un grupo de muestras de cada
ternero en un frasco con formol. Las muestras de
intestino nunca se deben colocar juntas con otros
tejidos para el envío. Todos los tejidos que vienen
frescos se refrigeran previamente y durante el envío.
Nunca se deben congelar los tejidos.
Colección de muestras para envío: las muestras de materia fecal se pueden tomar preferiblemente el primer día
de la diarrea. De un animal muerto o que se sacrifique
se pueden tomar las otras muestras.
Abomaso
Un pedazo (fragmento) refrigerado y otro
de 1-2 cm fijado en formalina
Otros órganos
que tengan
lesiones
microscópicas
Fragmentos de tejido de 1-2 cm, fijados
en formalina
Contenido del
colon
10 ml del contenido, refrigerado
Ileon
Dos o tres pedazos de intestino de 10 cm en
una bolsa plástica estéril y refrigerado.
Tres pedazos de 1-2 cm fijados en formalina.
Yeyuno
Dos o tres segmentos, de 10 cm, refrigerados.
Tres pedazos de 1-2 cm fijados en formalina
7.4.2 Agentes que se detectan durante el examen
rutinario
Bacterias
Salmonella spp. Clostridium perfringens,
Mycobacterium paratuberculosis
Parásitos
Coccidia
Virus
DVB
7.4.3 Agentes que requieren exámenes especiales
Bacterias
Ganglio linfático Varios ganglios colocados en una bolsa
mesentérico
plástica estéril y refrigerados. 2-3 pedazos
de 1-2 cm fijados en formalina.
Salmonella, cultivo de materia fecal, ganglios
linfáticos, intestino, bazo e hígado. Paratuberculosis
Histopatología de intestino delgado y
ganglios linfáticos y coloración de Zielh
Neelsen
Parásitos
Coccidia y parásitos gastrointestinales
(nematodos)
Bazo
Virus
Coronavirus bovino, examen de materia
fecal para microscopía electrónica y colon
para histopatología.
Hígado
1 pedazo de 5 cm refrigerado, colocado
en una bolsa estéril y otro fragmento en
formol buferado.
Un pedazo de 5 cm fresco en una bolsa
plástica y refrigerado.
Un fragmento de 1-2 cm fijado en formalina.
Se considera que es mejor colectar las muestras en
el campo, pues son de mejor calidad que si se lleva todo
el animal al laboratorio.
7.4.4 Comentarios
Si se considera el diagnóstico de diarrea viral bovina
o enfermedad de las mucosas, es conveniente enviar
fragmentos fijados de ileon, bazo, ganglio linfático
mesentérico, piel, corazón, pulmón y cualquier tejido
con lesión macroscópica.
7.4.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
1. Las muestras deben colectarse lo más pronto posible
después de haber ocurrido la muerte del animal.
2. Los segmentos de intestino no se deben ligar en sus
extremos. Al sumergir los segmentos de intestino
Si se quiere intentar el aislamiento viral: timo,
bazo, ganglio linfático mesentérico y riñón en refrigeración.
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
22
7.5.2 Agentes infecciosos que se pueden identificar en
la rutina del diagnóstico
7.5 Neumonía bovina (complejo respiratorio
bovino)
Muestras que se
requieren:
Se toman muestras de animales muertos o que se sacrifiquen. Estas muestras
son:
Ganglio linfático bronquial y
mediastínico
Ganglio completo o un fragmento en una
bolsa plástica refrigerado.
Pulmón
Una buena porción de la zona que presente la lesión y de la zona vecina de
apariencia sana.
Este se coloca en una bolsa plástica y
se refrigera. Se deben enviar, además,
cuatro o más pedazos delgados de
pulmón (1-2 cm) del límite de la zona
con lesión y sin lesión, fijados en formalina.
Hisopos nasales
Arcanobacterium pyogenes, Mannheimia
hemolitica, Pasteurella multocida
Virus
IBR, DVB, PI3, Virus Sincitial Bovino
7.5.3 Agentes que requieren exámenes especiales
(según el caso)
Mycoplasma
Mycoplasma bovis
7.5.4 Comentarios
Las lesiones agudas por lo general tienen la presencia
de los agentes causales y lo más probable es que estén
localizados en el límite del tejido sano y el tejido afectado (lesionado). Las lesiones de tipo crónico puede
que ya no tengan el agente causal.
Si se requiere en forma opcional se
puede tomar un hisopo nasal que
alcance la parte profunda de la cavidad
nasal. Estos hisopos se pueden usar para
aislamiento bacteriano o viral. No congelar estas muestras.
Los hisopos nasales pueden tener flora normal pero
en los casos agudos de problemas respiratorios son de
mucha utilidad. Los hisopos nasales también son de
gran ayuda para la identi-ficación de agentes virales en
muestras que se tomen en la primera fase del proceso
respiratorio (descarga nasal serosa).
Sueros sanguíneos Se toman sueros en la fase aguda y
fase convaleciente de la enfermedad
(intervalo de 2-3 semanas), de 5-10
terneros.
Tráquea
Bacterias
Se toma una porción de tráquea o laringe
en una bolsa plástica y se refrigera. Si se
observan lesiones, se pueden también
fijar pequeños pedazos en formalina.
Los lavados traqueales con medio de cultivo
refrigerados se pueden también utilizar para el
aislamiento bacteriano y/o viral.
7.5.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
7.6 Aborto en porcinos
1. Las muestras de tejidos que se van a enviar frescos se
refrigeran previo al envío. No se deben congelar.
Especímenes que se deben enviar: se prefiere por lo
general el envío de fetos y placentas con el mínimo de
contaminación. Seleccione 3 fetos representativos y 3
fetos por camada y tome las siguientes muestras:
2. Si se sospecha de una enfermedad viral, la muestra
se toma al momento de la aparición de los primeros
signos respiratorios.
Cerebro
3. Los hisopos siempre deben permanecer refrigerados
antes y durante el transporte.
Medio cerebro (un hemisferio) en una bolsa
plástica y refrigerado, medio cerebro fijado
en formalina
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
23
Corazón
La mitad del órgano en refrigeración y un
fragmento de 1-2 cm en formalina
Riñón
Un riñón completo refrigerado.
Segmentos de 1 cm fijados en formalina
Pulmón
Un pulmón completo (medio lado), en refrigeración, colocado en una bolsa plástica estéril, más segmentos de 1-2 cm en formalina.
Placenta
Varios pedazos colocados en una bolsa
plástica y en refrigeración, pedazos de 1-2
cm fijados en formalina
Sueros de las
madres
3 ml de las cerdas afectadas.
Contenido
estomacal
1-3 ml en una jeringa estéril y se refrigera
Fluido
torácico
1 ml por cada momia grande o feto abortado
Ombligo
Varios fragmentos de 1-2 cm fijados en
formalina.
Síndrome
respiratorio y
reproductivo
porcino PRRS
Intoxicación
Sangre del corazón, con EDTA
con monóxido
de carbono
7.6.4 Comentarios
La detección de IgG (anticuerpos) en el suero o líquido
torácico de los fetos puede ser una prueba tamiz, luego
los fetos o muestras positivas se examinan para Leptospira, Parvovirus o PRRS para detectar anticuerpos
específicos.
7.6.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
7.7 Síndrome nervioso en porcinos
1. No congelar nunca los tejidos
2. Envíe siempre la placenta
3. La investigación de un problema de aborto siempre
incluye la evaluación de las madres.
Las muestras que se deben remitir: se prefiere enviar al
laboratorio uno o más cerdos vivos, que estén afectados
en forma aguda por el problema en cuestión. En caso
contrario, si se practica la necropsia en el campo, se
deben tomar muestras de los siguientes tejidos:
7.6.2 Agentes infecciosos que se pueden encontrar
con la rutina diagnóstica
Bacterias
Arcanobacterium pyogenes, Bacillus spp, Brucella spp, E. coli, Salmonella spp, Streptococcus
spp, etc.
Virus
Parvovirus porcino, circovirus y pseudorabia
7.6.3 Agentes que requieren exámenes especiales
Leptospira
No se intenta el aislamiento del virus de tejidos porque no se encuentra el virus viable.
Se prefiere la histopatología del pulmón,
cordón umbilical, corazón.
El PCR y la serología en el fluido torácico
pueden ser de gran ayuda en el diagnóstico. La serología de las madres puede ser
también útil, pero es difícil de interpretar si
el hato está vacunado.
Si se sospecha un problema de leptospirosis
se debe realizar un esfuerzo para enviar un
feto fresco refrigerado. Se requiere detectar
la Leptospira por campo oscuro o con una
prueba de Inmunofluorescencia del riñón.
La serología de las madres también ayuda
en el diagnóstico.
Cerebro
(incluyendo la
base del cerebro y medula
oblonga)
Líquido cefalorraquídeo en una jeringa
estéril para cultivo bacteriológico o un
hisopo tomado entre la base del cerebro
(tallo encefálico) y el cerebelo.
Se requiere medio cerebro (un hemisferio),
dividido longitudinalmente, en refrigeración
(bolsa plástica estéril) y medio cerebro
fijado en formalina.
Intestino
Solo en casos de enfermedad de los
edemas y Peste Porcina Clásica, un segmento de 10-15 cm del Ileon y yeyuno,
refrigerado.
Se necesitan también varios pedazos de 1-2
cm del Ileon fijados en formalina.
Médula espinal
Cuando haya problemas locomotores se
toman segmentos de la médula espinal,
1-2 cm de diferentes segmentos, fijados
en formalina
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
24
Bazo
Segmento fresco en refrigeración y 1-2
pequeños segmentos fijados en formalina
Amígdala
Segmento de 1-2 cm fijado en formalina y
media amígdala en refrigeración.
Riñón
Segmento fresco en refrigeración y uno
o dos segmentos de 0.5-1 cm fijado en
formalina.
7.7.4 Comentarios
El cerebelo, la base del cerebro (tallo encefálico) y la
corteza cerebral se afectan en la mayoría de las enfermedades del sistema nervioso central del cerdo, por lo
tanto, siempre se deben remitir al laboratorio.
Muchas causas de intoxicación que generan signos
de tipo nervioso no producen lesiones en el cerebro y
su diagnóstico se puede lograr sólo con el análisis de
otros tejidos. Para la mayoría de los problemas de tipo
tóxico se requiere el envío de hígado, riñón, cerebro,
sangre completa con EDTA, contenido del estómago,
alimento y agua.
7.7.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
1. Se prefiere el envío del cerebro, sólo en caso de
necesidad se acepta la cabeza.
2. No se debe congelar el cerebro o la cabeza
3. Siempre se debe enviar la mitad del cerebro (un
hemisferio), empacada en una bolsa plástica (estéril
en lo posible), teniendo especial cuidado para no
destruirlo.
7.8 Diarrea en lechones lactantes
Los especímenes que se deben enviar: es mejor un lechón
vivo, que no haya sido tratado, con la forma aguda de la
enfermedad y que el curso del problema lleve menos de
24 horas. En caso contrario, se debe sacrificar un lechón
y tomar los siguientes tejidos:
4. La mitad del cerebro se debe fijar en formalina,
tomando la precaución de hacer 2-3 incisiones o
cortes transversales para facilitar la fijación del tejido,
en especial si es de un animal grande.
Colon y ciego
Todo el órgano refrigerado, varios pedazos
de 1 cm fijados en formalina.
Ileon
Segmentos de 10-15 cm refrigerados. Tres
pedazos de 1 cm fijados en formalina
Yeyuno
Un segmento de 10-15 cm refrigerado
–dos-tres pedazos de 1 cm fijados en
formalina.
7.7.2 Agentes que se detectan por el examen rutinario
Bacterias
Streptococcus suis, Haemophilus parasuis,
Arcanobacterium pyogenes, Escherichia
coli.
Virus
Enfermedad de Aujeszky, Peste Porcina Clásica, Síndrome reproductivo y respiratorio
(PRRS) y Rabia
No Infeccioso
En general, las muestras obtenidas directamente
durante la necropsia en el campo, son de mejor calidad
que las colectadas de un lechón que se lleva muerto al
laboratorio.
Deprivación de agua
7.7.3 Agentes que requieren una prueba especial
(según el cuadro clínico)
Intoxicación
Organofosforados (sangre completa con
EDTA, cerebro y contenido estomacal
refrigerado)
Virus
Peste Porcina Clásica (Inmunofluorescencia
directa con bazo, amígdala, ileón, ganglio
linfático y riñón), Rabia (cerebelo, hipocampo).
7.8.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
1. Las muestras se deben tomar lo más pronto
después de la muerte del animal (en lo posible en
minutos).
2. Por ningún motivo se debe amarrar los extremos de
los segmentos de intestino.
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
25
3. Asegúrese que los segmentos de intestino delgado o
grueso no pasen de 1-2 cm y que se sumerjan bien
en el formol.
haya sido tratado. Si no es posible se puede practicar
la necropsia y tomar los tejidos de un cerdo que se
sacrifique para tal fin.
4. Se pueden reunir los tejidos de un lechón en un
solo frasco o una bolsa. Pero los intestinos frescos
no se deben enviar junto a otros tejidos, para evitar
contaminación. No congele los tejidos que se envían
frescos
5. No envíe lechones lactantes muertos, el intestino
delgado se autolisa rápidamente y se dificulta el
diagnóstico.
7.8.2 Agentes que se pueden detectar con el examen
rutinario
Bacterias
Brachyspira spp, Clostridium spp, Escherichia
coli, Enterococcus durans, Salmonella spp.
Parásitos
Coccidia
Virus
Rotavirus y Gastroenteritis transmisible
Colon y ciego
Se puede enviar todo el órgano refrigerado.
Colectar varios pedazos de 1 cm fijados en
formalina.
Materia fecal
Tomar 2-5 ml de contenido, refrigerados
Ileon
Segmento de 10-15 cm refrigerado y 2-3
pedazos de un cm fijados en formalina.
Yeyuno
Pedazo de 10-15 de yeyuno, refrigerado y
2-3 pedazos de un cm fijados en formalina
En general, las muestras tomadas a la necropsia de
un cerdo en el campo son de mejor calidad que las que
se colectan de un cerdo muerto llevado al laboratorio.
7.9.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
1. Las muestras se deben tomar en lo posible tan
pronto ocurra la muerte del animal.
2. Es importante no amarrar (ligar) los extremos de
los segmentos de intestino
7.8.3 Comentarios
3. Se deben sumergir muy bien los segmentos de
intestino dentro del formol.
En casos de enteritis necrótica, se deben enviar pedazos
de intestino tanto del área necrótica como del área normal,
tanto frescos en refrigeración como fijados en formalina.
4. Los tejidos de un solo lechón se pueden depositar
en un frasco o una bolsa. El intestino fresco y
refrigerado no se debe enviar junto a otros tejidos
para evitar la contaminación. Nunca congele las
muestras de tejidos.
También se debe tener en cuenta que los resultados
(positivos y negativos) se deben evaluar considerando
los signos clínicos. Las muestras de 10-20 ml de la diarrea se deben tomar en el primer día de la diarrea. Los
raspados o frotis de la mucosa del Ileon y la mucosa
del colon son de utilidad para la detección de coccidias
(Ileon), y para valorar la presencia de clostridium (colon)
o Brachispira sp.
5. En lo posible no envíe cerdos muertos, el intestino
delgado y grueso se autolisan (descomponen)
rápidamente.
7.9.2 Agentes que se pueden detectar por el examen
de rutina
7.9 Causas de diarrea en lechones destetos
(precebo), levante y ceba
Muestras que se deben remitir: lo ideal es llevar al
laboratorio un cerdo vivo con los signos clínicos del
problema y que lleven menos de 24 horas, que no
Bacteria
E. coli, Salmonella spp, Clostridium perfringens
Parásitos
Coccidia (el diagnóstico se confirma por
histopatología)
Virus
Rotavirus, Gastroenteritis transmisible
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
26
7.9.3 Agentes que requieren pruebas especiales para su
diagnóstico
Bacterias
Pulmón
La colitis asociada con Brachispira hyodysenteriae y con Brachispira pilosicoli se puede
detectar con frotis de la mucosa y campo
oscuro (o raspado de la mucosa coloreado
con cristal violeta), pero la confirmación es
sólo por aislamiento bacteriano. No obstante, las lesiones, la histopatología y la
coloración de plata ayudan al diagnóstico.
La ileítis proliferativa porcina por Lawsonia
intracelullaris se puede sospechar por
histopatología, pero la Inmunohistoquímica
permite confirmar el diagnóstico.
Hisopos nasales Hisopos que faciliten la penetración profunda, con medio de cultivo para el aislamiento viral y/o bacteriano.
7.9.4 Comentarios
Segmentos de cornetes nasales fijados en
formalina.
Amígdalas
La mitad fijada en formalina y la mitad
refrigerada
1. Los tejidos frescos se deben refrigerar antes de su
envío, pero durante el transporte no los congele.
2. No envíe tejidos frescos en glicerina porque se
alteran para exámenes de Inmunofluorescencia
3. Si se quiere detectar agentes virales se deben tomar
muestras en el comienzo de la enfermedad.
Con los hallazgos histológicos se pueden hacer
inferencias sobre problemas de índole nutricional
como la hipersensibilidad al alimento (soya) o la colitis
inespecífica, pero estas no se pueden confirmar si no
hay una evaluación epidemiológica de la situación de
campo.
4. Transporte de hisopos nasales: siempre deben estar
en medios húmedos de conservación antes y durante
el transporte.
7.10.2 Agentes infecciosos que se pueden detectar con
los exámenes de rutina
Complejo respiratorio porcino
Muestras que se requieren: se prefiere uno o dos cerdos
que presenten la sintomatología característica. Si no es
posible, como alternativa se sacrifica en el campo un
animal y se colectan los siguientes tejidos.
Cerebro
Cornetes
nasales
7.10.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
Cuando se observe enteritis necrótica se deben tomar
segmentos (1 cm) tanto del área necrótica como del
área sana y fijarlos en formalina. En general, las muestras de materia fecal son de poco valor al menos que se
requieran para flotación e identificación de parásitos.
Los resultados tanto positivos como negativos deben
estudiarse siempre en relación con la sintomatología
de los cerdos en el campo.
7.10
Tomar un pulmón completo (un lado) o una
buena porción del sitio de la lesión junto
con la porción adyacente sana, y enviarla
en refrigeración.
Colectar 4 a 6 pedazos de un cm de espesor ( 1 cm ancho) de la lesión, incluyendo
tejido sano, fijados en formalina.
Medio cerebro fresco refrigerado y medio
cerebro fijado en formalina
Hacer 2-3 secciones sagitales (transversales) para facilitar la fijación.
Bacterias
Pasteurela multocida, Streptococcus
suis, Salmonella cholerasuis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Actinobacillus
suis, Arcanobacterium pyogenes, Haemophilus parasuis, Bordetella bronchiceptica
Virus
Virus del PRRS, Circovirus porcino, virus
de la Influenza porcina, Citomegalovirus
porcino, Rinitis de cuerpos de inclusión
(en los cornetes).
Mycoplasma
Mycoplasma hyopneumoniae
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
27
7.10.3 Agentes que requieren exámenes especiales
Virus
7.11.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
1. No congelar los tejidos
Virus de la Influenza porcina (aislamiento viral a
partir de hisopos nasales y tejido pulmonar)
2. Es muy importante el envío de la placenta
3. Envíe siempre el suero de la madre. La mitad de este
suero se debe congelar.
7.10.4 Comentarios
Los cultivos de Mycoplasma se pueden realizar de tejido
pulmonar fresco y refrigerado. Sin embargo, por ser un
organismo frágil y de difícil manejo no se intenta el aislamiento en forma rutinaria.
7.11.2 Agentes que se pueden detectar por el
diagnóstico rutinario
En caso de sospecha de Coronavirus respiratorio
se debe estudiar la presencia de anticuerpos mediante
la prueba diferencial de Elisa.
7.11
Aborto en ovinos y caprinos
La mitad del cerebro (un hemisferio), fijado
en formalina
Suero de la
madre
Tres a cinco ml del suero de la madre
Corazón
Un fragmento de 1-2 cm fijado en formalina
Riñón
Un riñón completo colocado en una bolsa
y refrigerado
Hígado
Un pedazo significativo del órgano (1/8 del
órgano), fresco y refrigerado un segmento
de 1-2 cm fijado en formalina.
Pulmón
Un segmento de órgano, fresco y refrigerado 1-2 segmentos de 1 cm fijados en
formalina.
Placenta
3 cotiledones frescos colocados en una bolsa
plástica (estéril en lo posible) y refrigerados.
2 cotiledones, fijados en formalina
Contenido
estomacal
Uno a tres ml en una jeringa estéril o un
tubo refrigerado.
Arcanobacterium pyogenes, Bacillus, Campylobacter, Chlamydia, Listeria monocytogenes,
Salmonella spp.
Parásitos
Toxoplasma gondii
7.11.3 Comentarios
Muestras que se requieren: los especímenes que se prefieren son el feto y la placenta. De los tejidos fetales se
debe seleccionar:
Cerebro
Bacterias
El diagnóstico de aborto por toxoplasma se puede lograr
por medio de la detección de las lesiones características
en placenta y cerebro y la detección de anticuerpos en
el fluido torácico del feto.
El diagnóstico de aborto clamidial se puede intentar
mediante frotis del exudado presente en el espacio
intercotiledonario, coloreado con Zielh Neelsen, para
observar los cuerpos elementales.
Las dos causas más comunes de aborto en ovinos
son Chlamydia y Toxoplasma, sin la placenta, cerebro, y/
o el fluido torácico y sueros pareados de la madre (agudo
y fase convaleciente) es difícil llegar a un diagnóstico
diferencial adecuado.
7.12 Diarrea en ovinos y cabritos jóvenes
menores de un año
Las muestras que se requieren son: un cordero o un
cabrito con los síntomas agudos de la enfermedad. Se
pueden tomar muestras de un animal muerto pero se
debe tener en cuenta que el intestino se descompone
rápidamente.
Fluido torácico Uno a tres ml en una jeringa estéril, sin
contaminar, se refrigera para el envío
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
28
Yeyuno
Dos a tres segmentos de intestino delgado
(parte media) de 1 cm, fijado en formalina
Un segmento de 10 cm fresco y refrigerado
Ileon
Dos a tres segmentos de intestino delgado
(parte final) de 1 cm fijados en formalina
Un segmento de 10 cm fresco y refrigerado.
Colon y ciego
Uno o dos segmentos fijados en formalina. Dos segmentos de 10 cm de intestino
grueso refrigerado.
Riñón
Uno o dos segmentos de 1 cm fijados en
formalina
7.13 Diarrea en ovinos y caprinos
mayores de un año
Muestras que se requieren: se prefiere estudiar un
animal vivo con menos de 24 horas de presentar
la sintomatología. Como alternativa se pueden
enviar tejidos de un animal que se sacrifique para
necropsia.
7.12.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
1. No se deben congelar los tejidos para su envío.
3. Es conveniente estar seguro que los segmentos de
intestino no son mayores de 1 cm para su fijación
en formalina. Es necesario tomar muestras de varios
animales afectados para tener una mejor opción en
el diagnóstico.
Parásitos
Coccidia, parásitos gastrointestinales
Virus
Rotavirus
Yeyuno
Dos segmentos 1-2 cm fijados en formalina.
Un segmento de 10 cm refrigerado.
Colon y ciego
Dos o tres fragmentos fijados en formalina
de 1-2 cm
Hígado
Dos–tres fragmentos de 1-2 cm fijados en
formalina
7.13.1 Agentes que se pueden diagnosticar en el
examen rutinario
7.12.2 Agentes que se pueden detectar con el
diagnóstico rutinario
E coli, Salmonella spp, Clostridium perfringens
Segmentos finales del intestino delgado,
fijados en formalina, 5-6 pedazos de 1
cm.
Ganglio linfático Dos o tres segmentos de 1-2 cm de
mesentérico
tamaño fijados en formalina. Dos a tres
ganglios, refrigerados .
2. El intestino delgado o grueso se autolisa rápidamente,
lo cual dificulta el diagnóstico final.
Bacterias
Ileon
7.12.3 Comentarios
Bacterias
Salmonella spp, Mycobacterium paratuberculosis,
Parásitos
Parásitos gastrointestinales
Fasciola hepática
7.13.2 Comentarios
Debido a la rápida descomposición del intestino delgado y el grueso, se dificulta el diagnóstico. Se prefiere
el estudio de un animal vivo con menos de 24 horas de
presentar los signos clínicos. En caso de enterotoxemia por Clostridium perfringens en corderos, el bazo está
aumentado en tamaño y el riñón se reblandece lo cual se
puede confundir con autolisis. Se debe tener en cuenta
que los corderos afectados tienen glucosuria pero esto
no se observa en otras especies.
Las causas más frecuentes de pérdida de peso en
ovinos son en primer lugar el parasitismo gastrointestinal o la fasciolasis y en segundo lugar la paratuberculosis. El diagnóstico preciso depende de las muestras
que se examinen. En caso de la paratuberculosis, un
estudio de serología por Elisa de la población puede
mostrar el porcentaje de reactores positivos que han
sido expuestos a la enfermedad.
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
29
serología, para detectar la presencia de reactores al virus
de Artritis Encefalitis Caprina.
7.14 Sindrome nervioso en ovinos
y caprinos
Especímenes que se deben remitir: se prefiere enviar al
laboratorio dos ovinos vivos con los signos nerviosos. Si
esto no es posible se debe practicar la necropsia de uno
de ellos o tomar las muestras de uno muerto.
Cerebro (incluyendo la base
del encéfalo y el
tallo encefálico)
La mitad del cerebro (un hemisferio) en
una bolsa plástica, refrigerado. La otra mitad
en un frasco con formalina, para su fijación
se necesita hacer 2 a 3 secciones sagitales
(transversales) en la masa encefálica.
Médula espinal
Si se observan problemas de locomoción
se toman secciones de la médula espinal
de 1-2 cm de las diferentes regiones de la
columna vertebral.
7.15 Neumonía en ovinos y caprinos
(complejo respiratorio)
Especímenes que se requieren: para un diagnóstico preciso lo mejor es llevar un animal al laboratorio, que tenga
menos de 24 horas con la sintomatología respiratoria.
En caso contrario se puede sacrificar un animal para
colectar las muestras.
Pulmón
7.14.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
Ganglio linfático Opcional y sólo en caso de observar lesiobronquial y
nes. Se toman 2-3 segmentos de 1 cm de
mediastínico
tamaño, fijados en formalina
1. Por lo general se prefiere el envío del encéfalo, sólo
en caso de necesidad se puede aceptar la cabeza.
Corazón
2. Para evitar deterioro de los tejidos no se debe congelar la cabeza o el encéfalo.
3. Cuando se envíe el encéfalo se debe evitar que este
se destruya al empacarlo.
Arcanobacterium pyogenes (abceso), Listeria
monocytogenes, Haemophilus somnus
Virus - Prion
Rabia, Artritis Encefalitis Caprina, Scrapie
Si se observa endocarditis valvular, tomar
tanto miocardio como endocardio en fragmentos no mayores de 2-3 cm, fijados en
formalina, y un pedazo significativo de la
válvula, en refrigeración.
7.15.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
7.14.2 Agentes que se pueden identificar con el
diagnóstico rutinario
Bacterias
Una buena porción de pulmón afectado,
refrigerado colocado en una bolsa plástica
para su envío.
2-3 segmentos de la lesión neumónica y
uno a dos segmentos del límite con el tejido
sano fijados en formalina.
1. Los tejidos frescos se deben refrigerar antes y
durante el transporte. Por ningún motivo se deben
congelar.
2. Si se desea detectar agentes virales, se deben tomar
muestras en el comienzo de la enfermedad.
No infecciosos Poliencefalomalacia, deficiencia de tiamina;
deficiencia de cobre o ataxia enzoótica
7.15.2 Agentes infecciosos que se pueden detectar con
los exámenes de rutina
7.14.3 Agentes que requieren pruebas especiales
Para el diagnóstico confirmatorio del virus rábico se
necesita realizar la prueba de Inmunofluorescencia
directa, usando un conjugado específico. Para el aislamiento de Listeria se recomienda congelar y descongelar
el tejido. En ocasiones se puede estudiar el aprisco por
Bacterias
Pasteurela multocida, Mannheimia hemolítica
biotipo A o T, Staphylococcus spp, virus del
PI3, virus respiratorio Sincitial maedi, adenomatosis y Artritis Encefalitis Caprina.
Parásitos
Muellerius spp, Dictiocaulus spp.
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
30
7.15.3 Agentes que requieren de exámenes especiales
7.16.2 Agentes que se pueden identificar con el
examen rutinario
La serología puede ser una herramienta útil para determinar la situación del aprisco frente al virus del PI3
(parainfluenza 3) y usando la prueba de Inhibición de
la Hemaglutinación, o frente a la Artritis Encefalitis
Caprina usando la prueba de Inmunodifusión en gel.
7.16 Aborto en equinos
Muestras que se deben remitir: se requiere el examen del
feto y la placenta para intentar un diagnóstico preciso.
Se deben enviar fetos completos al laboratorio, en caso
contrario se deben tomar las muestras siguientes
Placenta
Varios segmentos de 2 cm fijados en formalina, dos a tres segmentos de placenta en
refrigeración, colocados en bolsa estéril.
Pulmón
Una buena porción (10 cm) de pulmón
refrigerado, en una bolsa, separado de
otros tejidos.
2-3 segmentos de pulmón de 1-2 cm,
fijados en formalina.
Hígado
Segmento o pedazo de unos 10 cm refrigerado.
2 pedazos de 1cm fijados en formalina
Bazo
Tomar un fragmento de unos 5 cm refrigerado y un segmento de 1 cm fijado en
formalina
Riñón y Adrenales
Tomar fragmentos significativos en refrigeración (5-10 cm aproximadamente) y 3-4
pedazos de 1cm fijados en formalina
Contenido
estomacal
5 ml en una jeringa o tubo estéril
Bacterias
Streptococcus zooepidemicus, Escherichia
coli, Actinobacillus equuli, Staphylococcus
aureus, Pseudomonas aeuruginosa, Actinomyces spp y Nocardia spp, Leptospira spp
Virus
Rinoneumonitis Equina (Herpesvirus)
Hongos
Aspergillus spp, Mucor spp, Candida spp.
7.16.3 Agentes que requieren exámenes especiales
Las bacterias se pueden demostrar en los tejidos por
medio de la coloración de Gram y la coloración de plata
(Warthin-Starry). Los hongos, mediante la coloración de
PAS o la coloración de Grocott.
7.16.4 Comentarios
La placentitis de tipo bacteriano es la causa más común
de aborto en la yegua. El examen microscópico del
feto es de crucial importancia, porque los cambios
que se detectan en él indican en muchos casos el tipo
del organismo responsable de la infección. En caso de
Rinoneumonitis Equina se puede intentar el aislamiento
viral de los tejidos fetales, pero las lesiones histológicas
son muy características.
7.17 Causa de diarrea en equinos
Las muestras que se deben colectar son las siguientes:
se recomienda tener presente que se deben tomar
muestras de animales que están presentando signos
de diarrea y en las primeras 24 horas de iniciado el
proceso, si no se puede sacrificar un animal para
necropsia, se pueden tomar muestras de uno que
haya muerto
7.16.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
1. Siempre se debe enviar la placenta, si esto no se hace
disminuye la posibilidad del diagnóstico.
Ganglios linfá- Dos segmentos de 1-2 cm fijados en formaticos mesenté- lina; 2 ganglios linfáticos en refrigeración.
ricos
2. En ocasiones puede ser útil el envío de sueros de
las yeguas
Bazo
3. Por ningún motivo congele los tejidos que se van a
remitir al laboratorio
Dos pedazos de 1-2 cm fijados en formalina; un fragmento de 5-10 cm en
refrigeración
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
31
Hígado
Un fragmento moderado de unos 10 cm en
refrigeración y 2-3 pedazos de 1cm fijados
en formalina
Yeyuno
2-3 pedazos de 1cm fijados en formalina
Ileon
Un fragmento de 10 cm en refrigeración; dos a tres pedazos de 1cm fijados
en formalina.
Colon y ciego
10-15 cm en refrigeración y 2-3 pedazos
de 1cm fijados en formalina.
a especie y con la edad. Los equinos muestran por lo
general una colitis aguda fatal.
7.18 Síndrome nervioso en equinos
Muestras que se deben remitir:
Encéfalo
(incluyendo la
base del tallo
encefálico)
Medio cerebro (un hemisferio) dividido longitudinalmente en refrigeración, colocado
en una bolsa plástica.
Medio cerebro fijado en formalina. Para
facilitar la fijación hacer dos cortes sagitales
en el encéfalo.
Médula espinal
En caso de desórdenes locomotores enviar
2-4 segmentos de médula espinal de 1-2
cm, fijados en formalina.
7.17.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
1. El intestino delgado o grueso se descompone
rápidamente y esto dificulta el diagnóstico
2. No se deben congelar los tejidos
7.18.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
7.17.2 Agentes que se pueden identificar con el
diagnóstico rutinario
Bacterias
Salmonella typhimurium, Clostridium difficile
(colitis seudomembranosa)
Corynebacterium equi, Clostridium perfringens, E coli, Shiguella spp
Virus
Linfosarcoma intestinal
Parásitos
Strongylus vulgaris (cólico tromboembólico)
1. No congelar el encéfalo para su envío
2. Cuando se está empacando el cerebro fresco en una
bolsa plástica se debe tener cuidado de no alterar el
tejido.
3. Se puede incluir suero sanguíneo de los animales
afectados para casos sospechosos de encefalitis
equinas o encefalitis del Nilo.
7.18.2 Agentes que se pueden identificar en el examen
rutinario
7.17.3 Agentes que requieren de un examen especial
En el caso de Corynebacterium equi, la lesión intestinal
es de tipo granulomatoso y los macrófagos pueden
contener organismos que se pueden demostrar por una
coloración de Gram.
7.17.4 Comentarios
Virus
Encefalitis equina venezolana, del Este y del
Oeste, encefalitis del Nilo, virus rábico
Parásitos
Encefalomielitis equina por protozoos
Tóxicos
Leucoencefalomalacia por maíz mohoso
7.18.3 Agentes que requieren técnicas de diagnóstico
especial
La alteración de la flora competitiva en el colon puede
originar la proliferación de organismos patógenos que
residen en el colon de los equinos. En caso de una colitis se debe examinar en forma selectiva para tratar de
precisar un diagnóstico. La salmonelosis varía de especie
Para el caso de la rabia se necesita confirmar el diagnóstico con Inmunofluorescencia directa del tejido cerebral
(detección del antígeno viral), con un conjugado especí-
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
32
fico. Para la encefalitis equina es conveniente el examen
de sueros de la población afectada por la prueba de Elisa
y/o la inhibición de la hemoaglutinación y de tejidos para
el aislamiento e identificación viral.
7.19.2 Agentes que se pueden identificar en el examen
rutinario
7.18.4 Comentarios
La evaluación histológica del cerebro y/o la médula
oblonga permite establecer un diagnóstico diferencial
del problema en cuestión. No obstante, el examen
virológico del suero y los tejidos es fundamental para
confirmar la encefalitis equina venezolana y/o establecer
su diagnóstico diferencial con otras encefalitis.
Ganglios linfáticos bronquiales
Dos ganglios completos en refrigeración.
Uno a dos fragmentos de 1-2 cm fijados
en formalina.
Hisopos
nasales
Tomados en la fase aguda de la enfermedad
(secreción serosa)
Sueros
En ocasiones se requiere el envío de 3-4 ml
de suero de los animales afectados
Virus
Influenza equina, Rinoneumonitis equina
Parásitos
Dictiocaulus spp
Para confirmar el virus de la Influenza equina tipo A
se necesita intentar su aislamiento en huevos embrionados y/o efectuar un análisis serológico de sueros de
la población afectada, por la prueba de inhibición de la
Hemaglutinación
Especímenes que se requieren: se prefiere la colección
de tejidos de un animal que muestre los signos clínicos
y que no lleve más de 24 horas con la sintomatología
respiratoria. En caso de sacrificar un animal se pueden
tomar los siguientes tejidos:
Pedazo de unos 20 cm de pulmón de la
zona afectada en refrigeración. Dos a tres
segmentos de 1 a 2 cm en el límite del tejido
lesionado y la región sana.
Streptococcus zooepidemicus, Streptococcus
equisimilis, Streptococcus equi, Rodococcus
equi, Pasteurella multocida.
7.19.3 Agentes que requieren examen especial
7.19 Neumonía en equinos
Pulmón
Bacterias
7.19.4 Comentarios
Sin lugar a dudas las infecciones virales del tracto respiratorio (especialmente la influenza equina y la rinoneumonitis viral equina) son comunes e importantes en los
equinos. Estas infecciones causan moderados signos
clínicos que son difíciles de distinguir por el simple
examen de los animales. Por esta razón se requiere
apoyo del laboratorio.
7.20 Síndrome nervioso en
caninos y felinos
Especímenes que se requieren: se prefiere el envío
del animal al laboratorio o como alternativa se puede
sacrificar el animal y llevar al laboratorio la cabeza
y/o el encéfalo. Se deben colectar los siguientes
tejidos:
7.19.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
1. No congelar los tejidos para su envío.
2. Los hisopos nasales deben permanecer húmedos en
el medio de transporte durante el envío
Encéfalo (inclu- Se requiere tomar medio cerebro (un
yendo tallo
hemisferio) (dividiéndolo longitudinalencefálico)
mente), para enviarlo en refrigeración en
una bolsa plástica en lo posible estéril; el
otro medio cerebro se fija en formalina.
3. Se necesita tomar las muestras en los primeros
estadios de la enfermedad, para tener posibilidades
de diagnóstico.
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
33
7.20.2 Agentes que requieren procedimientos
especiales
Médula espinal Cuando se describan problemas locomotores se deben tomar diferentes segmentos
de la médula espinal de 1-2 cm y fijarlos en
formalina.
Para confirmar el diagnóstico de rabia, el tejido cerebral
(cerebelo, hipocampo y corteza cerebral) se examina por
medio de Inmunofluorescencia directa, usando un conjugado específico para detectar el antígeno viral.
Otros tejidos
Se toman fragmentos de 1 cm para ser
(bazo, ganglio fijados en formalina
linfático,
vejiga y pulmón
7.20.3 Comentarios
7.20.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
El virus rábico es uno de los más neurotrópicos de
todos los virus que afectan a los animales, no existen
lesiones macroscópicas en el sistema nervioso central y
por esta razón se requiere apoyo de métodos histológicos
o de virología para confirmar el diagnóstico.
1. En caso necesario se recibe la cabeza del animal en
el laboratorio, no obstante, por ningún motivo se
debe congelar pues se deteriora el sistema nervioso
central para su estudio histopatológico.
2. Si se envía la mitad del cerebro refrigerado, éste se
debe colocar en una bolsa plástica tratando de que
no se destruya durante el transporte.
El virus del moquillo tiene una particular afinidad
por el tejido epitelial (piel, tracto urinario, tracto
digestivo), el tejido linfoide (bazo, ganglio linfático)
y el sistema nervioso, lo cual implica en general una
infección sistémica.
3. La otra mitad (un hemisferio) se debe enviar en
un frasco plástico de boca ancha, con formalina.
Para facilitar la fijación del tejido cuidadosamente
se deben hacer 2-3 cortes sagitales (transversales)
en la masa encefálica.
7.21 Neumonía en caninos y felinos
Las muestras que se requieren: se prefiere el envío del
animal afectado al laboratorio para colectar las muestras
apropiadas. Se deben tomar los siguientes tejidos:
Los otros tejidos como el bazo, ganglios linfáticos,
estómago, vejiga y pulmón, etc se colectan de acuerdo
con la historia clínica del caso, donde se observa un
problema de tipo sistémico (generalizado) pero que va
acompañado de sintomatología nerviosa.
Tráquea
Dos segmentos de 1 cm, fijados en formalina
Pulmón
Dos-tres segmentos de 1 cm del área
afectada, fijados en formalina. Segmento
de unos 10-20 cm fresco, en una bolsa
plástica en refrigeración.
7.20.2 Agentes que se detectan en el
examen rutinario
Ganglio linfá- Tomar 2-3 fragmentos de 1 cm de ganglios
tico
linfáticos regionales, fijados en formalina.
Virus
Rabia, moquillo canino, encefalitis de los
perros viejos, peritonitis infecciosa felina
Hongos
Cryptococcosis
7.21.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
Parásitos
Toxoplasma gondii
1. No congelar los tejidos para estudios histológicos
2. Si se desea realizar estudios bacteriológicos del
pulmón afectado, se debe tomar una generosa
No infecciosas Meningoencefalitis granulomatosa (Reticulosis canina)
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
34
porción del tejido para enviarla en una bolsa plástica
en refrigeración.
3. Las neumonías en estas especies tienden a ser difusas,
es decir, afectan la mayoría del pulmón, por tanto se
pueden tomar fragmentos del tejido al azar.
7.21.2 Agentes que se pueden detectar en el examen
rutinario
Virus
Traqueobronquitis infecciosa, Adenovirus
canino tipo 2, PI3, Moquillo canino.
Bacterias
Bordetella bronchiseptica, Pasteurella multocida
Hongos
Criptococcosis, Histoplasmosis
Parásitos
Aelurostrongylus abstrusus (gatos)
Bazo
Un fragmento de 1 cm fijado en formalina
Ganglio linfático
Dos-tres fragmentos de 1 cm fijados en
formalina
Hígado
Dos fragmentos de 1 cm fijados en formalina. Un fragmento de 5-10 cm fresco,
refrigerado.
Colon
Un segmento de 10 cm refrigerado. Un
segmento de 1 cm fijado en formalina.
Intestino delgado (yeyuno
e Ileon)
Tres a cuatro fragmentos de 1 cm fijados en
formalina. Dos segmentos de 10 cm, en una
bolsa plástica (estéril) refrigerados
Estómago
Un fragmento de 1 cm fijado en formalina
7.22.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
1. No congele el cadáver o los tejidos para estudios
histológicos.
2. El intestino delgado se descompone rápidamente.
Esto en ocasiones impide precisar el diagnóstico. Las
muestras se deben tomar lo más pronto después de
la muerte.
3. No amarrar los extremos de un segmento de
intestino. Es importante que al sumergir los
segmentos de intestino en la formalina ésta penetre
fácilmente a su interior.
7.21.3 Agentes que requieren procedimientos
especiales
Las neumonías granulomatosas de origen micótico son
muy comunes en animales de compañía. Para demostrar la presencia de hongos profundos en los tejidos
se requiere de coloraciones diferenciales como PAS,
Grocott o mucicarmina.
7.22.2 Agentes que se detectan en el examen rutinario
7.21.4 Comentarios
En general, las enfermedades respiratorias de los animales de compañía son un problema menos importante si
se compara con los animales domésticos de producción.
En las dos especies los efectos inmunosupresivos de
los agentes virales son importantes en la detección de
agentes secundarios de tipo bacteriano.
Virus
Parvovirus canino, Panleucopenia felina,
Hepatitis canina.
Bacterias
Salmonella spp, Colitis granulomatosa
Parásitos
Ancylostoma spp, Trichuris spp, Ascaris spp
No infeccioso
Enteritis canina linfocítica plasmocitica.
7.22.3 Agentes que requieren procedimientos
especiales
7.22 Enteritis (diarrea) en caninos y felinos
Muestras que se requieren: como el sistema digestivo
se descompone rápidamente, se prefiere se envíen los
tejidos al laboratorio. En caso contrario, se recibe el
cadáver pero no se debe congelar. Los tejidos son los
siguientes:
En casos particulares se requiere el uso de coloraciones
diferenciales como la coloración de Gram, PAS, para
mostrar la presencia de microorganismos en el citoplasma de macrófagos.
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
35
7.23.1 Agentes que se pueden identificar con el
examen rutinario
7.23 Síndrome nervioso en aves
Muestras que se requieren: es necesario el envío de
5-10 aves con la sintomatología nerviosa. Se prefiere
que se seleccionen los animales en la fase inicial del
problema y se envíen lo más pronto al laboratorio.
En caso de sacrificar animales y hacer la necropsia
en el campo, se recomienda la toma de los siguientes
tejidos:
Encéfalo *
Tomar 3-5 encéfalos para fijarlos en formalina. Otros 3-5 encéfalos se envían
refrigerados en una bolsa plástica
Tráquea
Colectar 3-5 tráqueas en bolsa plástica,
refrigeradas. Tomar 3-5 fragmentos de
1-2 cm fijados en formalina
Pulmón
Dos a tres segmentos de 1 cm fijados en
formalina. Dos a tres pulmones, refrigerados en una bolsa plástica.
Nervio ciático
Tomar 3-5 fragmentos de nervio de 1-2 cm
de diferentes aves.
Otros tejidos
Fragmentos de 1 cm fijados en formalina
*
Virus
Encefalomielitis viral, Enfermedad de
Marek, Enfermedad de Newcastle
Hongos
Aspergillus fumigatus, Dactylaria gallopava
No infecciosos
Encefalomalacia (deficiencia de Vitamina E)
7.23.2 Agentes que requieren procedimientos
especiales
Para la demostración de hongos en los tejidos se
necesita el uso de coloraciones diferenciales como el PAS
o el Grocott, para confirmar la presencia de las hifas.
En el caso de la enfermedad de Newcastle, se
realiza el aislamiento viral en huevos embrionados y/
o la detección de un fragmento del genoma viral por
reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La evaluación
serológica del grupo de aves afectadas por medio de la
prueba de inhibición de la hemaglutinación también es
útil para el monitoreo de la población.
Las muestras de encéfalo, tráquea y pulmón con destino
a aislamiento viral se pueden colocar en una sola bolsa
plástica.
7.24 Complejo respiratorio aviar
Muestras que se requieren: por ser un problema frecuente en las poblaciones avícolas de tipo intensivo, se
necesita la evaluación de un grupo significativo de aves
afectadas. Se sugiere que entre 5-10 aves que presenten
los signos respiratorios se envíen para los respectivos
estudios de laboratorio. Si esto no es posible, se debe
colectar de animales vivos, sacrificados en el campo, las
muestras siguientes:
7.23.1 Técnicas y recomendaciones
de muestreo
1. Los tejidos para estudios histológicos no se deben
congelar.
2. Los encéfalos de las aves se extraen de la cavidad
craneana completos, se les debe realiz ar corte sagital
superficial (sin seccionarlos totalmente) para facilitar
la fijación con formalina. No olvidar el envío del
cerebelo.
3. Durante la colección del encéfalo se debe tener
cuidado para no macerar o destruir el tejido, por la
distorsión que puede sufrir.
4. Se debe evitar el contacto con el formol de los tejidos
colectados para virología.
Hisopos senos
nasales y/o
tráquea
Tomar un número adecuado de hisopos y
enviarlos en refrigeración.
Tráquea
Segmentos de 2 cm de tamaño fijados en
formalina. Tomar 3-5 tráqueas completas
en refrigeración.
Pulmón
Colectar 3-4 pulmones enteros en refrigeración y 2-3 fragmentos de 1 cm fijados
en formalina.
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
36
Laringe y parte
superior de la
tráquea
Tomar un segmento de 1 cm fijado en
formalina
polimerasa (PCR), también ayuda a la confirmación
del diagnóstico.
Oviducto
2-3 segmentos del tejido de 1 cm fijado
en formalina.
7.24.4 Comentarios
Sueros
Colectar entre 5-30 sueros de la población
afectada, enviarlos en refrigeración.
En general, los problemas de tipo respiratorio en las
aves son de origen multifactorial. El diagnóstico integral
para conocer los agentes infecciosos participantes es de
crucial importancia para establecer los planes de control.
La caracterización genética por métodos moleculares
permite conocer las diferencias entre las cepas circulantes
en el campo y las cepas de tipo vacunal.
7.24.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
1. Los tejidos para estudios de histología no se deben
congelar
2. Para tener una mejor opción en el diagnóstico
se sugiere siempre enviar animales vivos al
laboratorio.
7.25 Enfermedades de tipo
generalizado-sistémico
3. Es conveniente no abrir las tráqueas que se envíen
para aislamiento viral, PCR o histopatología.
Muestras que se requieren: una característica de estas
enfermedades es la dificultad para identificarlas con base
solamente en hallazgos de la necropsia o los estudios
histológicos. Se requiere el apoyo del laboratorio para
identificar el agente causal. En estos casos se necesita
evaluar un número generoso de aves afectadas (entre 36) ojalá vivas o que estén recién muertas y que no hayan
sido tratadas. Las muestras que se necesitan son:
7.24.2 Agentes que se pueden detectar con
el examen rutinario
Virus
Enfermedad de Newcastle, Bronquitis
infecciosa, Influenza aviar, Viruela aviar y
neumovirus
Bacterias
Escherichia coli, Haemophilus gallinarum,
Pasteurella multocida, Mycoplasma gallisepticum
Hongos
Aspergillus fumigatus
No infecciosos
Deficiencia de vitamina A
7.24.3 Agentes que requieren procedimientos
especiales
La confirmación de la presencia de las enfermedades virales depende del aislamiento viral en huevos
embrionados. El monitoreo serológico de la parvada
afectada contribuye a dilucidar el diagnóstico en caso
de una problemática de campo. La detección de fragmentos del genoma de los virus y/o Mycoplasma en
los tejidos por medio de la reacción en cadena de la
Hígado
Dos a cuatro hígados completos (incluyendo vesícula biliar), con lesiones, en
refrigeración, colocados en una bolsa
plástica. 2-3 fragmentos de 1 cm fijados
en formalina.
Bazo
Dos a tres bazos completos en refrigeración
enviados en una bolsa plástica. 2-3 fragmentos de 1cm fijados en formalina.
Riñón
Uno a dos segmentos de 1 cm fijados en
formalina
Corazón
Tomar 2-3 órganos completos en refrigeración colocándolos en una bolsa plástica.
Intestino
Un segmento de 1 cm fijados en formalina.
Uno a dos segmentos de 1 cm fijados en
formalina
Saco vitelino
(pollitos)
Enviar 2-3 sacos en una bolsa plástica en
refrigeración
Ovario
(gallinas)
Enviar 2-3 ovarios en una bolsa plástica en
refrigeración
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
37
Sueros (pollos
o gallinas)
de enriquecimiento y luego su subcultivo en medio
diferenciales. La confirmación final de una especie de
Salmonella depende de su clasificación serológica con
antisueros específicos. Otra alternativa es la detección de
fragmentos de genoma de la bacteria en tejidos afectados,
por medio de PCR.
Cuando se sospecha Salmonellosis se
requiere el envío de un número generoso
de sueros (20-30 muestras).
Cabezas (senos Enviar 3-4 cabezas sin abrir en bolsa plástica
nasales, bary refrigeradas.
billas)
7.25.4 Comentarios
7.25.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
Estas enfermedades producen bacteremia y diseminación sistémica. Las lesiones en ocasiones sugieren un
diagnóstico presuntivo, pero el aislamiento e identificación del organismo es fundamental para confirmar
el diagnóstico.
1. Las muestras que se colectan generalmente para
estudios bacteriológicos no se deben congelar, se
prefiere la refrigeración. Estas muestras siempre
deben ir en bolsas separadas para cada tejido.
2. Se debe preferir animales que estén recién muertos
y que no hayan sido tratados.
7.26 Enfermedades aviares que afectan el
sistema linfoide y producen signos de
inmunodepresión
3. Es conveniente tomar las muestras de aquellos
órganos que presentan lesiones como por ejemplo
esplenomegalia y hepatomegalia, con focos de
necrosis (aumento de tamaño del bazo e hígado
con puntos blancos en la superficie), etc.
Muestras que se requieren: se prefiere el envío al laboratorio de 10-15 aves, particularmente menores de siete
semanas de edad, que presenten alguna evidencia clínica
de Inmunodepresión. En caso contrario se pueden sacrificar algunos animales y practicar la necropsia para enviar
las siguientes muestras:
4. Para estudios bacteriológicos las muestras de hígado
siempre deben llevar la vesícula biliar, sin que esta
se haya roto.
5. Es importante recordar que los procesos septicémicos
bacterianos en aves con mucha frecuencia son el
resultado de infecciones virales primarias.
7.25.2 Agentes que se pueden identificar con el
examen rutinario
Bacterias
Timo
Colectar fragmentos de varios timos 0.5-1
cm fijados en formalina
Bazo
Tomar 3-5 fragmentos de bazo de 0.5-1 cm
fijados en formalina
Bolsa de fabri- Tomar 6 o más fragmentos de 0.5-1 cm
cio
de diferentes bolsas de Fabricio fijados
en formalina. Remitir varias (3-6) bolsas
en refrigeración, colocadas en una bolsa
plástica estéril.
Salmonella gallinarum, Salmonella pullorum,
Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis. Escheridia coli, Pasteurella multocida,
Staphylococcus aureus, Haemophilus paragallinarum, Pseudomona aeruginosa,
Médula ósea
Abrir el hueso y extraer la médula ósea,
enviar varias de ellas. Fijarlas en formalina.
Sueros
Se toman por lo menos 30 sueros del lote
afectado. Se envían en refrigeración.
7.25.3 Agentes que requieren procedimientos
especiales
7.26.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
El aislamiento primario de la Salmonella spp de tejidos
afectados en ocasiones necesita su cultivo en medios
1. Los tejidos se deben colectar de acuerdo con la
historia clínica del caso. Para facilitar una buena
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
38
fijación el tamaño de los fragmentos no debe ser
mayor de 0.5-1 cm.
7.27 Enfermedades aviares asociadas con
neoplasias (linfoproliferativas)
2. Para la toma de médulas óseas se puede abrir el
hueso y extraer la médula ósea o enviar el hueso
abierto para que el formol penetre y se fije bien
el tejido.
Muestras que se requieren: para efectos de un diagnóstico se necesita en lo posible el examen de 5-6 animales
vivos o que hayan muerto recientemente. Si se practica
la necropsia en el campo se deben tomar las siguientes
muestras:
3. Si se quiere evaluar el grado de depleción de la
bolsa de Fabricio, en casos especiales se pueden
remitir 2-3 bolsas por grupos de edad (7 días,
14,21 y 35 días). Se puede fijar la bolsa completa
o se puede tomar un fragmento de 0.5-1 cm.
Enfermedad de Gumboro, Marek, Anemia
Infecciosa aviar, Cryptosporidium
No infecciosas
Micotoxinas (incluyendo examen de
hígado)
Dos-tres segmentos de 0.5-1 cm fijados
en formalina
Hígado, riñón
Dos-tres segmentos de 0.5-1 cm fijados
en formalina.
Proventrículo,
Dos-tres segmentos de 0.5-1 cm fijados
Intestino delgado en formalina
7.26.2 Agentes que se pueden detectar con
el examen rutinario
Virus
Protozoarios
Bazo, bolsa
de fabricio*
Ovarios
Dos segmentos de 0.5-1 cm delas masas
tumorales
Nervio ciático y Tres a seis segmentos de 0.5-1 cm de
encéfalo
nervio y encéfalo fijados en formalina.
Corazón
*
7.26.3 Agentes que requieren procedimientos
especiales
Dos-tres segmentos de 0.5-1 cm fijados
en formalina.
La observación macroscópica de masas tumorales determina
en realidad los tejidos a seleccionar para el examen
histopatológico.
7.27.1 Técnicas y recomendaciones de muestreo
1. Se sugiere tomar las muestras en lo posible de
aves vivas, porque los cambios autólicos alteran la
morfología de las células linfoides.
Con las bolsas de fabricio en refrigeración se intenta el
aislamiento viral en huevos embrionados. El antígeno
viral también se puede detectar en los tejidos fijados en
formalina por medio de la técnica de Inmunoperoxidasa.
Los sueros se utilizan para pruebas serológicas (Elisa),
para investigar la presencia de estas enfermedades. En
casos clínicos evidentes de anemia infecciosa la evaluación del hematocrito (sangre con EDTA) puede ser útil
para el diagnóstico.
2. En general, las muestras se deben tomar de todos
los órganos que presenten lesiones macroscópicas
de tipo tumoral (nodular). Segmentos de 0.5-1 cm
son suficientes para facilitar una buena fijación.
3. Los nervios ciáticos se deben tomar así no presenten
cambios macroscópicos.
4. Los tejidos para estudios histológicos no se deben
congelar
7.26.4 Comentarios
La investigación de un caso que clínicamente se asocie
con imunodepresión debe ser complementada con la
historia del lote, la edad y las lesiones macroscópicas
observadas. Esto ayuda a determinar la naturaleza,
severidad y duración del problema.
7.27.2 Agentes que se identifican con el examen
rutinario
Virus
Enfermedad de Marek, Leucosis linfoide
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
39
7.27.3 Agentes que requieren procedimientos
especiales
Como recomendaciones se deben tener en cuenta
los siguientes criterios para el uso de la serología en el
diagnóstico de problemas de aborto:
En casos sospechosos por estudios histológicos de
Leucosis mielocitomatosis, la evaluación serológica de
la parvada por una prueba de ELISA, detección de antígeno o detección de anticuerpos puede ser un valioso
complemento para el diagnóstico.
1. La toma de muestras de sueros pareados (una
muestra a tiempo del aborto y la otra 2 a 3
semanas más tarde) puede proporcionar una
información más útil que una sola muestra (se
pueden encontrar diferencias hasta de 4 veces
en el incremento en el título). Si por ejemplo
algunos animales son negativos en la primera
muestra, pero tienen un incremento significativo
en el nivel de anticuerpos en la segunda muestra,
se puede deducir que hay una infección activa
en la población afectada.
7.27.4 Comentarios
Las características epidemiológicas del problema son
de utilidad para el diagnóstico. El bajo grado de mortalidades en pollos, ponedoras y reproductoras pero
en presencia de malas respuestas de anticuerpos a las
vacunaciones y a los tratamientos sugiere presencia de
una enfermedad de esta naturaleza.
2. Como una alternativa a las muestras pareadas, se
pueden realizar comparaciones del promedio de
títulos serológicos y el porcentaje de animales
positivos entre grupos de animales afectados
y grupos de animales no afectados. Se sugiere
tomar sueros de 20 animales que hayan abortado
y por lo menos un número igual de animales
no afectados pero que tengan en lo posible las
mismas características de edad y estados de gestación.
8. USO DE LA SEROLOGÍA PARA EL
DIAGNÓSTICO DE CASOS DE ABORTO
8.1 Comentarios generales
La reacción serológica positiva de una sola muestra
de suero a un agente infeccioso por lo menos, es
una evidencia indirecta que el animal había estado
expuesto (en el pasado) al agente en cuestión. No
obstante, cuando el clínico intenta asociar este resultado con una situación de campo (ej: brote de aborto),
se debe tener mucha precaución, porque puede dar
lugar a confusión.
3. Es necesario entender que algunas enfermedades
son endémicas en muchos hatos y/o piaras y por lo
tanto la mayoría de los animales están infectados y
tienen títulos serológicos. En este sentido se puede
mencionar parvovirosis en cerdos, toxoplasmosis en
ovejas y diarrea viral bovina en bovinos. En estos
casos la presencia de anticuerpos contra estos agentes en animales que aborten no es una evidencia
concluyente de la causa del problema. No obstante,
los altos títulos serológicos pueden indicar infección
reciente.
En general se considera que la serología fetal no
tiene mucho valor en el diagnóstico de aborto. Se sabe
que los fetos no son inmunocompetentes hasta el tercer
trimestre de gestación (no producen anticuerpos). Por
ejemplo: el aborto por toxoplasma en ovejas se puede
diagnosticar por medio de la detección de anticuerpos
en los fluidos fetales.
4. Es claro también que si el hato o la piara están
vacunados se complica aún más la interpretación
de los títulos, porque no es fácil la diferenciación de
anticuerpos de infección y anticuerpos originados
por la vacunación.
De otro lado, el análisis serológico de los
sueros de las madres puede ser de utilidad en el
diagnóstico de casos de aborto pero tiene también
sus limitaciones.
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
40
control positivo), no son títulos de anticuerpos . En este
caso se considera positivo una lectura de Elisa S/P de
0.40 o mayor con casos positivos con infecciones severas
que pueden llegar a lecturas entre 1.5-4.0. Las infecciones
recientes pueden mostrar valores S/P hasta de 2.5. Hasta
el presente no existen pruebas diferenciales para distinguir infecciones de campo de la respuesta vacunal.
8.2 Comentarios sobre ciertas enfermedades
en particular
8.2.1 Parvovirosis porcina
Prácticamente todas las piaras están infectadas con parvovirosis. Por lo general, la infección natural estimula la
producción de altos títulos de anticuerpos (Inhibidores
de la Hemaglutinación) mayores de 1:256 (en ocasiones
hasta mayores de 1:10.000) que persisten por mucho
tiempo. En contraste, los títulos vacunales raras veces
exceden 1:256 y luego empiezan a descender a los dos
meses. Se considera que un título de 1:512 o mayor
sugiere exposición a la infección natural de campo.
8.2.5 Diarrea Viral Bovina (DVB)
Se debe reconocer que la DVB es una enfermedad
endémica en el país y que muchos hatos pueden estar
infectados. El virus puede circular dentro de una finca sin
que se observen problemas relevantes. En tales granjas,
se puede encontrar que muchos animales tengan títulos
serológicos neutralizantes (prueba de Seroneutralización)
de 1:2 hasta más de 1:4096. Los títulos de la respuesta
vacunal varían mucho de acuerdo con el tipo de la
vacuna que se haya usado: Viva o inactivada (muerta).
El examen de muestras de suero en forma individual no
tiene mucho valor para análisis de la situación de campo.
Definitivamente sólo los sueros pareados de una parte
del hato pueden revelar una buena información sobre
la circulación del virus en una población bovina. Los
títulos de anticuerpos en terneros que no hayan tomado
calostro (anticuerpos precalostrales), o en terneros que
no se hayan vacunado y que tengan más de 6 meses
tienen un significado muy útil cuando se examina una
situación de campo en particular.
8.2.2 Toxoplasmosis
No todos los apriscos están infectados con Toxoplasma
gondii. Pero en los rebaños infectados los títulos serológicos permanecen por años después de la infección, por
esta razón la presencia de anticuerpos no es suficiente
evidencia para el diagnóstico de infecciones recientes.
Entonces un título serológico positivo indicaría que el
animal se infectó hace ya un tiempo (exposición pasada),
o recientemente.
8.2.3 Enfermedad de Aujeszky
Esta enfermedad es exótica en Colombia pero por
ejemplo es endémica en Venezuela. En piaras que están
infectadas en forma endémica los títulos de anticuerpos seroneutralizantes (demostrados por la técnica de
Seroneutralización) varían entre 0 a 1:256. Los animales
recientemente infectados presentan títulos alrededor de
1:32 o mayores. En países donde se vacuna la respuesta
vacunal alcanza títulos de hasta 1:16. Existen pruebas
comerciales de Elisa que permiten diferenciar entre
animales vacunados de infectados.
Por medio de la técnica de ELISA, valores m/p <0.2
se consideran negativos. Valores de m/p >0.2 y < 0.3 se
consideran dudosos. Valores de m/p a 0.3 se consideran
positivos. La presencia de anticuerpos indica contacto
con el virus ya sea de tipo vacunal o de tipo infeccioso,
una seroconversión de negativo a positivo indica
infección. En hatos serológicamente positivos, a los
animales seronegativos se les debe hacer un seguimiento
porque podrían ser persistentemente infectados según
el cuadro clínico que presenten.
8.2.4 Síndrome Respiratorio y Reproductivo Porcino
(SRRP)
8.2.6 Rinotraqueítis Viral Bovina (IBR)
La prueba de ELISA comercial presenta los resultados
como lecturas de densidad óptica S/P (muestra/suero
Se sabe que los títulos serológicos neutralizantes como
respuesta de la vacunación varían entre 1:2-1:32 y oca-
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
41
sionalmente puede alcanzar hasta 1:32 – 1:128 después
de los refuerzos. En casos de infecciones recientes se
pueden observar títulos de anticuerpos entre 1:64 – 1:
256 (prueba de seroneutralización).
de anticuerpos de 1:400 podría sugerir una infección
reciente frente a este serovar.
8.2.8 Brucelosis
Por medio de la técnica de Elisa valores s/p > a
0.5 se consideran positivos a anticuerpos para IBR, lo
cual indica contacto con el virus ya sea de tipo vacunal
o infeccioso dependiendo si hay o no historia de
vacunación. Una seroconversión de negativo a positivo
o aumento en los niveles de anticuerpos indica infección
activa. Valores de s/p de 0.25 a 0.5 se consideran
sospechosos y valores de 0.25 se consideran negativos.
A los animales sospechosos se les debería tomar nueva
muestra a las 4 semanas para observar la dinámica de
títulos de anticuerpos.
En la mayoría de zonas del país el número de abortos
relacionados con Brucelosis es relativamente significativo, pero quizás esta tendencia cambie a medida que
se amplíe el programa de hatos libres. En las zonas del
país con mediano y alto grado de infección se emplean
como pruebas serológicas tamiz la Rosa de Bengala y
Elisa indirecta y en zonas de bajo nivel de infección
o libre, la prueba confirmativa Elisa competitiva. En
Colombia, el objetivo de las pruebas serológicas no es
solamente identificar los animales que han estado en
contacto con el agente si no que también se requiere
diferenciar los animales que han sido vacunados o no,
y están infectados. Esto debido a que la vacunación
con cepa lisa (Cepa 19) no protege el ciento por ciento
de los animales pero sí produce evidencia serológica.
En general, en un 15% de los abortos relacionados
con Brucella sp se pueden obtener resultados falsos
positivos. Cuando los resultados serológicos y el
cultivo presenten resultados negativos, se sugiere
reexaminar las vacas afectadas 15 días después,
aproximadamente.
Como se mencionó para el estudio de la DVB,
el examen de sueros pareados en un buen grupo de
animales puede ser de mayor utilidad que el estudio de
una sola muestra para establecer si existe o no circulación
viral en un hato. Como la mayoría de los fetos abortados
se autolisan en el útero, la serología fetal no tiene un
uso práctico.
8.2.7 Leptospirosis
La infección con serovariedades diferentes a L. hardjo en
bovinos por lo general producen una respuesta de títulos
de anticuerpos de 1:800 o mayor mediante la técnica de
Microaglutinación que pueden permanecer por algunos
pocos meses. Las vacas que abortan por Leptospirosis no
presentan signos clínicos obvios, especialmente cuando
se infectan con L. hardjo. La vacunación de los bovinos
produce una respuesta vacunal que puede alcanzar niveles de 1:800 por un periodo muy corto de tiempo, aunque
en ocasiones se pueden observar lecturas serológicas
mayores en animales con una exposición reciente a los
antígenos vacunales.
9. BACTERIOLOGÍA GENERAL
Como se ha mencionado, el propósito es ofrecer
un servicio que proporcione resultados precisos y a
tiempo. No obstante, algunas pruebas de diagnóstico
no están disponibles todos los días o existen períodos
de tiempo durante la semana para su montaje y procesamiento de muestras. Por esta razón si el caso que
usted está enviando incluye animales para exportación,
pruebas para el ingreso a ferias y exposiciones, animales para movilizaciones o el procesamiento de un
gran número de muestras , debe tratar de comunicarse
previamente con el laboratorio con el propósito de
dar una oportunidad para que el personal se prepare
para recibir las muestras y mirar la disponibilidad de
los reactivos.
La infección con L. hardjo en realidad no produce
una fuerte estimulación Inmunológica y los niveles de
anticuerpos pueden ser bajos, por esto la serología
no es muy confiable cuando se trata de establecer un
diagnóstico con este serovar de Leptospira. Una lectura
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
42
9.1 Recomendaciones generales para el envío
de muestras
3. Lo mejor es el envío de tejidos y exudados (en tubos
o bolsas de anaerobiosis diseñadas para tal fin).
Los criterios generales para el envío de muestras se describieron en la sección de patología. Si usted está pensando
enviar muestras para análisis bacteriológico recuerde que
estas deben estar refrigeradas y que se deben enviar lo
más pronto posible. Los siguientes son algunos aspectos
importantes sobre el envío de las muestras:
4. Los hisopos no son apropiados al menos que tengan
un sistema de transporte con un medio que tenga
baja tensión de oxígeno.
1. Los tejidos se deben colectar muy frescos y tomarlos
con la mayor asepsia posible.
1. En caso de sospecha de mastitis, las muestras de
leche deben ser recolectadas previo lavado de los
pezones con agua corriente limpia. Después de eliminar el exceso de humedad con toallas de papel, los
pezones se deben desinfectar con alcohol antiséptico
y volver a secar con toallas de papel nuevas.
9.2.1 Muestras de Leche
2. Por favor tome las muestras antes de un tratamiento
con antibióticos.
3. Envíe en lo posible una porción significativa del
tejido (10-15 cm) o varios mililitros de exudado o
pus o materia fecal.
Se recomienda tomar muestras por separado de cada
cuarto y mantenerlas refrigeradas desde el mismo
momento de la toma hasta el envío al laboratorio.
4. Trate en lo posible de no enviar hisopos (escobillones), de lo contrario enviarlos en un medio de
mantenimiento.
2. Estas muestras se deben tomar en tubos estériles
con tapa. Nunca le diga al encargado o al operario
que tome las muestras sin un entrenamiento previo
de como hacerlo. Esto evita pérdida de tiempo y
costos por deficiente calidad de la muestra.
5. Envíe siempre las muestras en bolsas plásticas estériles (si es posible), cada tejido por separado con una
clara y correcta identificación.
3. Las muestras de leche de bovinos para la prueba de
anillo o Elisa indirecta en leche para la detección de
anticuerpos contra brucelosis en animales individuales
se deben tomar asépticamente, los primeros tres a
cuatro chorros se deben descartar. La leche se recibe
en tubos estériles, se puede emplear un tubo para
cada cuarto o colectarse una mezcla de los 4 cuartos
tratando de tomar el mismo volumen por cuarto.
6. Es conveniente mantener las muestras a una temperatura de refrigeración (4°C) y enviarlas en una
nevera de icopor con hielo refrigerante (gel). No se
recomienda congelar las muestras.
9.2 Muestras para cultivos de bacterias
anaerobias
Si se quiere examinar la leche de tanques de recolección (cantinas), es conveniente tomar la muestra
con la capa de grasa homogenizada, evitando en lo
posible contaminar los contenidos entre los tanques.
El volumen extraído se debe modificar en función
del tamaño de las cantinas: 15 ml por tanque de 40
litros o 250 ml por tanque de 400 litros . Para la
colección se sugiere emplear preferiblemente tubos
o frascos plásticos con tapa de rosca con cierre hermético.
1. Por favor tenga mucho cuidado en la colección. Trate
de no contaminar las muestras con superficies que
tengan flora anaerobia. La exposición de la muestra
al aire por más de 20 minutos prácticamente afecta
la posibilidad de éxito en el examen.
2. Los animales que llevan más de 4 horas de muertos no sirven para colectar muestras (descomposición del cadáver).
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
43
Si se usan tubos de recolección de 15 ml, es útil emplear
como preservante 0.5 ml de solución de formalina al
0.2% preparada mezclando 7.5 ml de formalina al 37%
(concentración de la solución comercial) en un litro
de agua destilada. Para 250 ml de leche adicionar 8.3
ml de formalina al 0.2%. Todas las muestras se deben
mantener en refrigeración hasta su arribo al laboratorio,
tiempo que no debe superar las 24 horas.
9.3 Susceptibilidad a los antibióticos,
antibiograma
Las pruebas de susceptibilidad a los antibióticos o Antibiogramas se ofrecen al público para bacterias patógenas que se aíslen de especies animales que se lleven al
laboratorio, o de cepas bacteriales enviadas para serotipificación y/o antibiograma. El método disponible es la
prueba de Kirby Bauer (difusión en agar). Se debe tener
en cuenta que el resultado sólo refleja una prueba In vitro
de susceptibilidad a los antibióticos y no representa por
ningún motivo una recomendación terapéutica.
9.2.2 Sangre
Normalmente es difícil aislar agentes patógenos de la
sangre porque la bacteremia no es constante. Pero en
casos especiales se puede realizar el intento. En estos
casos se puede llamar al laboratorio para algunas sugerencias de importancia para el caso en particular.
Los discos de antibióticos que se recomiendan para
las diferentes especies animales o para ciertos problemas
en particular son los siguientes:
Porcinos/Bovinos/Ovinos
9.2.3 Orina
Ampicilina
Apramicina
Ceftiofur
Clortetraciclina
Clindamicina
Enrofloxacina
Eritromicina
Florfernicol
Gentamicina
Neomicina
Se prefiere una muestra de orina tomada de la segunda
mitad del chorro, 3 ml es suficiente.
9.2.4 Muestras de piel
Ø
Para la colección de muestras de pústulas o vesículas se recomienda desinfectar la piel con alcohol y
dejarlo secar y luego tomar con una jeringa estéril
el material necesario.
Ø
Si se sospecha de una micosis superficial (hongos) se
deben tomar pelos y raspar la perisferia de la lesión.
Se envían pelos, raspado de la periferia, costras o
uñas en un recipiente adecuado.
Espectinomicina
Sulfadimetoxina
Sulfatiazole
Tiamulina
Trimetropin/sulfametoxazole
Tartrato de tilosina
Tilmicosina
Oxitetraciclina
Penicilina
Caninos, Felinos y Equinos
Amikacina
Amoxicilina
Ampicilina
Cefazolin
Celtiofur
Cloranfenicol
Clindamicina
Enrofloxacina
Eritromicina
9.2.5 Muestras de semen
Las muestras de semen se toman mediante masaje electroeyaculador o vagina artificial, pudiendo emplearse
un preservativo para evitar contaminación. En caso de
porcinos se debe enviar semen fresco y semen diluido
para efectos de comparar los hallazgos en ambos tipos
de muestras. En el caso de los bovinos 2-3 pajillas son
suficientes para este tipo de examen. Las muestras de
semen se deben enviar en refrigeración.
Espectinomicina
Sulfadimetoxina
Tetraciclina
Trimetropin/sulfametoxazole
Gentamicina
Orbifloxacina
Oxacilina
Penicilina
Mastitis bovinos
Ampicilina
Celtiofur
Cefalozin
Eritromicina
Oxacilina
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
44
Penicilina
Penicilina/novobiocina
Tetraciclina
Sulfadimetoxina
9.4 Información por teléfono de los
resultados de bacteriología
Aves
Amoxicilina
Celtiofur
Clindamicina
Enrofloxacina
Eritromicina
Gentamicina
Neomicina
Novobiocina
Oxitetraciclina
Penicilina
Spectinomicina
Estreptomicina
Tetraciclina
Trimetropin/sulfamethoxazole
Tylosina
Tilmicosina
Los resultados de bacteriología como una ayuda
rápida para el clínico y/o el productor se pueden
informar por teléfono o vía fax, siempre y cuando
el costo del proceso se haya dejado pago al traer
la muestra.
9.5 Enfermedades que se pueden diagnosticar con ayuda en el estudio bacteriológico
Condición
Aborto bacteriano
Microorganismo(s)
Tejido o muestras que se deben enviar
Especies de Brucella
Todo el feto fresco
Especies de Campylobacter
Serovares de Leptospira
Listeria monocytogenes
Placenta con cotiledones, pulmón, hígado y contenido estomacal fetal para examen por campo oscuro
Descarga uterina
Aborto micótico
Especies de Aspergillus
Placenta con cotiledones contenido del estómago del feto.
Actinomicosis bovina
Actinomyces bovis
Material de los abcesos o exudado en un hisopo o una jeringa
estéril.
Infección con anaerobios Especies de Bacterioides
Especies de Fusobacterium
Especies de Eubacterium
Una porción de tejido o exudado colectado en una jeringa
estéril.
El transporte en medio anaeróbico ayuda a mantener la viabilidad de los microoganismos.
Ántrax
(Carbón Bacteridiano)
Bacillus anthracis
Muestra de sangre tomada de las venas superficiales tal como
la yugular colectada en una jeringa estéril con tapa en la aguja.
Bazo (esplenomegalia) si se hizo necropsia. Todo caso sospechoso se debe informar rápidamente. Se debe tener cuidado
en la colección de muestras
Rinitis Atrofica porcina:
Forma progresiva
Bordetella bronchiceptica
Pasteurella multocida
Limpiar la superficie externa de la nariz con alcohol. Introduzca un
hisopo bien profundo en la nariz. El hisopo se debe transportar
en un medio para mantenerlo húmedo (hisopos culturette medio
stuart). Se puede enviar todo el animal afectado al laboratorio
Artritis
Steptococcus suis
La articulación completa de los pequeños animales o un
Arcanobacterium
hisopo en medio de transporte o fluido de la articulación en
pyogenes, Haemophilus spp, Erysipelo- una jeringa.
thrix rhusiopathiae, Mycoplasma spp
Carbón sintomático
(Gangrena gaseosa)
Clostridium chauvoei, C. novyi, C.
septicum
Fragmento fresco del músculo con lesión. Si está disponible la
técnica de Inmunofluorescencia directa se requiere una impresión del tejido afectado.
Botulismo
Clostridium botulinum
Porción de intestino ligado en los extremos y porción grande del
hígado y suero. La técnica no se hace de rutina en el ICA.
Complejo Respiratorio
Bovino
Pasteurella multocida, Mannheimia
Hisopo nasal en medio de transporte. Lavado traqueal. Buena
hemolytica, Especies de Mycoplasma porción del pulmón afectado.
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
45
Condición
Microorganismo(s)
Tejido o muestras que se deben enviar
Complejo Respiratorio
Porcino
Pasteurella multocida
Streptococcus suis
Porción del pulmón afectado.
Brucelosis
Brucella abortus
Contenido del estómago fetal, placenta, ganglios linfáticos
mamarios y muestras de leche.
Campylobacteriosis
genital
Campylobacter fetus
Feto completo fresco, moco cervical, lavado prepucial o semen.
Las muestras se deben hacer llegar entre 5 a 6 horas después de
la colección. Se puede preguntar por un medio de transporte
al laboratorio.
Campylobacteriosis
Campylobacter jejuni
Heces frescas o hisopo rectal
Colibacilosis en terneros
y lechones
Escherichia coli
Animal vivo enfermo, intestino delgado y materia fecal.
Colisepticemia en aves
Escherichia coli
Hisopos de los senos nasales, tráqueas, sacos vitelinos, hígados.
Neumonía de los potros Rhodococcus (Corynebacterium) equi Hisopo con descarga nasal. Pulmón fresco y ganglio linfático
por Corynebacterium
Coriza infecciosa Aviar
Haemophilus paragallinarum
Hisopos de los senos paranasales, cabeza de ave afectada.
Cistitis
Escherichia coli, especies de Proteus, Orina fresca en un tubo estéril.
Staphylococcus aureus
Dermatomicosis
Especies de Microsporum y de
trichophyton
Tomar pelos y raspado de piel y enviar seco en un sobre de
carta: biopsia de piel fresca y en formalina
Enfermedad de los
edemas
Escherichia coli
Lechón vivo o recién muerto(intestino delgado).
Enterotoxemia
Clostridium perfringens
Contenido fresco del intestino delgado en una bolsa estéril
en refrigeración. El diagnóstico se intenta en nuestro medio
ocasionalmente
Erisipela
Erysipelothrix rusiopathiae
En la forma aguda tomar sangre del corazón, riñón, bazo e
hígado. En la forma de artritis y/o cardiaca hisopos de articulaciones y/o corazón en medio de transporte.
Dermatitis exudativa
Staphylococcus hyicus, Streptococcus Raspar la piel y enviar al laboratorio en un tubo estéril
spp
Enfermedad de Glasser
Haemophilus parasuis
Lechón vivo, enfermo. Tomar cerebro, corazón, pulmón y
líquido articular
Paraturberculosis
Mycobacterium paratuberculosis
El aislamiento toma 3-4 meses y no se hace en forma rutinaria.
Válvula ileocecal, ganglios linfáticos, raspado de la mucosa rectal
y materia fecal.
Aspergilosis pulmonar
en aves
Aspergillus fumigatus
Pulmón, sacos aéreos, pollitos afectados
Queratoconjuntivitis en
ovinos y bovinos
Branhamella ovis
Moraxella bovis,
Hisopos conjuntivales en medio de transporte
Leptospirosis
Serovares de Leptospira
Orina y líquido torácico para examen con microscopio de
campo oscuro.
Riñón completo para aislamiento e Inmunofluorescencia directa.
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
46
Condición
Microorganismo(s)
Tejido o muestras que se deben enviar
Listeriosis
Listeria monocytogenes
De la forma nerviosa: base del cerebro fresco y fijada en
formalina.
De la forma visceral: hígado fresco y fijado en formalina.
En caso de aborto: feto, placenta y contenido del estómago.
Mastitis
Especies de Staphylococcus
Especies de Streptococcus Mycoplasma spp
Las muestras en lo preferible deben ser colectados por un
Médico Veterinario. Evitar contaminación de las muestras.
Tomar uno o dos chorros de cada cuarto en un tubo estéril.
Refrigere a 4°C hasta su procesamiento.
Meningitis en cerdos,
terneros
Especies de Streptococcus
Streptococcus suis
Escherichia coli
Líquido cefalorraquídeo y cerebro.
Infecciones por Mycoplasma
Especies de Mycoplasma
Exudado de traquea, tejido pulmonar, con bronquios. Refrigerar
y enviar pronto. No se intenta aislamiento en forma rutinaria.
Nocardiosis
Nocardia asteroides
Exudado de la lesión.
Enteritis proliferativa
porcina
Lawsonia intracellularis
Ileón y materia fecal
Pielonefritis bovina y
porcina
Corynebacterium renale y C. suis
Orina, porción del riñón, vejiga y uretra con lesiones evidentes.
Salmonelosis aviar
Especies de Salmonella
Bazo, hígado, saco vitelino, ciegos, ovarios, hisopos cloacales
Salmonelosis en bovinos
y porcinos
Especies de Salmonella
Bazo, ganglios linfáticos, hígado, materia fecal.
Disentería porcina y coli- Brachyspira hyodysenteriae
tis por Espiroquetas
Especies de Brachyspira
Cerdo vivo con signos de la enfermedad, colon en espiral,
raspado del colon, hisopos rectales.
Tricomoniasis
Tricomona fetus
Lavado prepucial, muestra de semen, moco vaginal.
Pasteurelosis aviar
Pasteurella multocida
Hígado, bazo, pulmón, corazón, cabezas con lesiones
Muestras de agua para
determinar calidad
Coliformes
Mínimo 100 ml de agua en un recipiente estéril
9.6 Exámenes especiales en bacteriología (referencia)
Microorganismo
Prueba
Actinobacillus pleuroneumoniae
Serotipificación
Escherichia coli (cerdos, terneros)
Serotipificación Fimbrias F4(K88), F5(K99), F6(987P), F18 y F41
Pasteurella multocida
Tipificación
Pasteurella multocida toxigenica Tipo A o D
Detección de toxina
Salmonella
Serotipificación y detección por PCR
Streptococcus suis
Serotipificación
Mycoplasma gallisepticum
Detección por PCR y RFLP.
Mycoplasma hyopneumoniae
Detección por PCR
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
47
plano inclinado a temperatura ambiente o a 36-37 OC
durante 30 minutos, hasta que se forme el coagulo.
Si es posible, se debe extraer el suero en la forma
más aséptica después de centrifugación.
10. SEROLOGÍA
10.1 Oferta del servicio
El ICA tiene el propósito de brindar resultados en el
tiempo más corto y preciso para facilitar la solución de
los problemas de campo. Sin embargo, se debe tener
claro que muchas pruebas de diagnóstico serológico
no se realizan diariamente y que la oferta del servicio
puede cambiar con la disponibilidad de los reactivos
o con la congestión de muestras en los laboratorios.
Si usted tiene un caso relacionado con animales para
importación o exportación (cuarentenas), ingreso a ferias
y exposiciones, chequeo de animales que se van a vender
o muestreos de animales para movilización, por favor
se debe contactar al Centro de Recepción de Muestras
del Laboratorio Nacional de Diagnóstico Veterinario
(3686826) o a los Centros de Diagnóstico Veterinario
del país (lista y direcciones adjunta), antes de enviar las
muestras para verificar la disponibilidad y el tiempo de
respuesta de la prueba. Una llamada previa sin lugar a
dudas puede ayudar al Laboratorio a prepararse para
recibir el caso en particular y a reducir el tiempo de
respuesta.
2. Si los sueros se envían en el término de ocho horas
se pueden refrigerar (4 OC), si esto se va a demorar se
pueden conservar en congelación entre –20 O y – 30
O
C hasta que se decida su envío al laboratorio.
3. Se prefiere el envío de muestras de suero en viales
o tubos de plástico. Esto evita posibles roturas
o pérdidas de volumen durante su transporte. La
tapa de los viales y/o tubos se debe asegurar muy
bien y en caso necesario colocar cinta alrededor
de la tapa, esto evita que se destape y se pierda la
muestra.
4. Todos los viales y/o tubos se deben identificar en
orden consecutivo del 1 hasta X. En el formulario
de remisión o un documento adjunto se describe
junto al número del tubo, la identificación que
corresponde para cada animal. Se debe usar un
marcador de tinta permanente en la identificación
de los tubos o en su defecto escritura con lápiz
sobre cinta de enmascarar.
El Servicio Nacional de Diagnóstico ofrece pruebas
de serología para las principales enfermedades de bovinos, aves, cerdos y equinos.
5. Es importante que la identificación del lote o de
especímenes individuales (nombre, o número de
la chapeta o placa, ubicación, galpón, piara, etc) en
los recipientes con los sueros y en los documentos
de remisión sea clara y que no presente ambigüedades, en letra ilegible o en la lectura, porque esto
lleva a dificultades en el procesamiento y reclamos
injustificados por parte de los usuarios.
10.2 Requisitos generales para el envío de
muestras para exámenes serológicos
Debido a que la contaminación de los sueros (o de las
leches) interfiere con la detección de los anticuerpos,
las muestras para pruebas serológicas se deben tomar
siguiendo las recomendaciones específicas según su clase
y la prueba que en particular se vaya a solicitar. Si se
envían las muestras adecuadas esto asegura la rapidez
del diagnóstico:
6. Los viales o tubos con los sueros se pueden enviar
en recipientes (cajas) de cartón propias para tal fin,
donde se organizan en forma consecutiva o en su
defecto en bolsas plásticas bien organizados por
cada cliente (o caso) en separado.
1. Envíe como mínimo 2 ml de suero por cada prueba
deseada. Para la obtención de suero el volumen de
sangre a tomar no debe ser inferior a 10 ml, esta
sangre se colecta en tubos al vacío sin anticoagulante. Las muestras de sangre se pueden dejar en un
7. Cada Centro de Diagnóstico y el Centro de Recepción de Muestras debe guardar en sus archivos copia
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
48
de la remisión para poder hacer un seguimiento de
la muestra en el proceso a través de los diferentes
laboratorios.
tudes con los productores y/o profesionales, se debe
contactar por lo menos con una semana de anticipación
al Centro de Diagnóstico y/o al Laboratorio Nacional
de Diagnóstico Veterinario. Esto con el objetivo de
avisar cuántos sueros se van a enviar, el número de
pruebas que se requieren y la fecha para la cual se
necesitan los resultados.
8. Para optimizar la intermediación de las pruebas
serológicas se debe insistir en la colección de
muestras en la fase aguda y la fase convaleciente.
Estos sueros se deben traer juntos al laboratorio. Como alternativa también se puede sugerir
el envío de sueros de animales enfermos y no
enfermos de la misma finca o granja para efectos
de comparación.
1. En el documento que acompaña las respectivas
muestras (formulario único de recepción de muestras, forma ICA No. 3-877), se debe identificar claramente que el muestreo corresponde a cuarentena
y para el caso de importaciones se debe indicar el
país de origen.
9. Las muestras serológicas para programas especiales de erradicación y/o control como Fiebre
Aftosa, Estomatitis Vesicular, Brucelosis,
Encefalitis Equinas, enfermedad de Newcastle
y Peste Porcina clásica deben ser remitidas con
formularios y formatos especiales que para tal
fin existen.
2. En el documento de remisión, por favor especifique las pruebas serológicas que se requieren e
incluya si es posible una copia de los requisitos
sanitarios que se le pidieron al país exportador para
evitar confusiones.
10. Dado el volumen de muestras que se reciben
mensualmente o anualmente en los laboratorios
de diagnóstico veterinario del ICA, las muestras de suero no se pueden almacenar más allá
de 3 semanas y luego se descartan la mayoría
de ellas. Sólo en enfermedades de control oficial, tipo Brucelosis se dispone de un banco
de sueros. Todas las muestras se deben enviar
en el menor tiempo posible. En el caso de ser
transportadas vía aérea, se recomienda usar los
servicios especializados de entrega rápida. Es
importante conservar los sueros en refrigeración (4 O C-8 O C congelación –20 O C - 30 O C).
Las neveras de icopor con cierre seguro, con
bolsas de hielo refrigerante son aconsejables
para garantizar una preservación adecuada de
las muestras.Serologías para casos de importación y/o exportación.
3. Como la importación de animales incluye siempre
un seguro y este tiene una vigencia prudencial, se
necesita que las muestras se tomen rápidamente
para obtener los resultados de acuerdo con las
necesidades de los usuarios.
Para verificar que su solicitud es correcta y que se
van a lograr los resultados de las pruebas dentro
del tiempo previsto, es conveniente mantener
un contacto telefónico con el laboratorio respectivo.
10.4 Informe de los resultados de
las pruebas serológicas
Se prefiere la entrega de los resultados en forma
personal al respectivo usuario o en casos especiales
vía fax o vía telefónica siempre y cuando se haya
cancelado previamente el servicio.
10.3 Serologias para casos de importación y/o
exportación
El envío de resultados vía correo electrónico está
en vía de implementación.
Para minimizar las posibles demoras en el procesamiento de las muestras y por consiguiente las inquie-
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
49
10.5
Interpretación de los resultados de algunas pruebas serológicas para bovinos
Prueba
Fiebre Aftosa
Ø Seroneutralización
Ø
Estomatitis vesicular
Comentarios
Títulos de anticuerpos iguales o mayores de 2 logaritmos (10) son protectivos.
Títulos de anticuerpos iguales o mayores de 4.0 logaritmos (10) podrían ser considerados protectivos
Fiebre Aftosa
Ø ELISA /EITB
Se considera un reactor positivo como infectado con el virus
Fiebre Aftosa
Ø Prueba VIAA
El animal positivo se considera que estuvo en contacto con el virus
Virus Respiratorio Sincitial Bovino
Ø Seroneutralizacion
Los títulos de anticuerpos vacunales siempre son menores o igualde de <1:32. Para
ayudarse en la interpretación siempre compare títulos de animales sanos con enfermos
o de animales convalecientes con sintomáticos (fase aguda)
Diarrea Viral bovina (DVB)
Ø Prueba de seroneutralización
La respuesta de anticuerpos al virus de DVB es muy variable, en parte por la
variación antigénica de las cepas. Las cepas de campo por lo general producen
títulos serológicos mayores o iguales de > 1:2048. Los títulos de las vacunas
inactivadas (muertas) siempre están por debajo de 1:256 y contra las vacunas
de virus vivo modificado son menores o iguales a 1:2048. La exposición al virus
vacunal o al virus de campo no se puede diferenciar claramente con base en la
respuesta serológica.
Diarrea Viral Bovina (DVB)
Ø Prueba de ELISA
Valores M/P < 0.2 se consideran negativos, valores de M/P de 0.2 a 0.3 se
consideran dudosos; valores de M/P > a 0.3 se consideran positivos. La presencia de anticuerpos indica contacto con el virus ya sea de tipo vacunal o
infeccioso, una seroconversión (sin vacunación reciente) de negativo a positivo
indica infección. Un resultado positivo en ausencia de vacunación podría indicar
infección. En hatos serológicamente positivos, a los animales seronegativos se
les debe hacer seguimiento porque podrían ser inmunotolerantes por infección
temprana en útero.
Rinotraqueítis Viral Bovina
Ø Seroneutralización
Los títulos serológicos de las vacunas muertas son menores < 1:16 y los de la vacuna
de virus vivo modificado es de <1:64.
En general la serología tiene un uso limitado en hatos bien vacunados especialmente
cuando se investigan problemas de aborto.
Rinotraqueitis Viral Bovina
Ø Prueba de ELISA
Por medio de las técnicas de ELISA kit de IDEXX, valores de M/P > a 0.5 se consideran positivos a anticuerpos para IBR, lo cual indica contacto con el virus, ya sea de
tipo vacunal o infeccioso dependiendo si hay o no historial de vacunación. Una seroconversión (sin vacunación reciente) de negativo a positivo o aumento en los niveles
de anticuerpos indica infección activa; valores de M/P de 0,25 a 0,5 se consideran
sospechosos y valores menores de 0,25 se consideran negativos.
Leptospira interrogans
Ø Prueba de Microaglutinación
Los títulos (niveles de anticuerpos) que tienen significado serológico son por lo general
mayores de 1:800.
Los títulos se desarrollan al tiempo del aborto, así que la comparación de animales
sanos con animales enfermos ayuda en la interpretación. La interpretación requiere
siempre la historia de la vacunación. Los títulos serológicos de la vacunación pueden
variar entre 1:400 – 1800.
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
50
Prueba
Comentarios
Virus de la Parainfluenza 3 (PI3)
Es un virus ubicuo en la población. Los títulos serológicos (niveles de anticuerpos)
Ø Inhibición de la Hemoaglutinación indican exposición previa. Se debe comparar animales afectados con animales sanos
o sueros de la fase aguda con la fase convaleciente.
Títulos de 1:10 a 1:40 indican previa exposición al virus de PI3 pero no indica enfermedad reciente; títulos de 1:80 son sospechosos y títulos >1:160 podrían indicar
infección activa; con un intervalo de dos semanas y un aumento en el título en cuatro
diluciones o más es confirmatorio de infección reciente
Brucelosis
Ø Rosa de Bengala
Una aglutinación es un resultado positivo a esta prueba
Brucelosis
Ø ELISA Indirecta
Muestras > al punto de corte (30%) se consideran positivas y se les corre la ELISA
competitiva para determinar si esos anticuerpos son vacunales.
Leucosis Bovina
Ø Pruebas ELISA
Por medio de la técnica de ELISA Screening valores de S/P > 0.5 se consideran
positivos a anticuerpos contra Leucosis bovina indicando que el animal posiblemente
está infectado
La prueba de ELISA Verificación confirma el resultado positivo
10.6
Interpretación de algunas pruebas serológicas en porcinos
Prueba
Comentarios
Parvovirosis Porcina
Los títulos (niveles) de anticuerpos vacunales por lo general son menores de 1:256.
Ø Inhibición de la Hemoaglutinación La inmunidad materna puede persistir por meses (hasta 7 meses). Se considera un
virus ubicuo en las explotaciones porcinas. Los problemas reproductivos ocurren en
hembras de reemplazo que no hayan sido vacunadas o expuestas al virus de campo
antes del servicio.
Títulos > 1:256 son sospechosos de infección.
Síndrome Reproductivo y respiratorio
porcino (SEP)
Ø Prueba de ELISA
Los valores de la prueba de ELISA S/P mayores de >0.4 se consideran positivos y
los < 0.4 son negativos. La ELISA comercial detecta anticuerpos contra las cepas
americanas y cepas europeas del virus del SEP. Los antisueros se detectan ente 9 a 15
días después de haber ocurrido la infección.
La prueba de ELISA puede dar falsos positivos en poblaciones con alto número de
cerdas de reemplazo o en reproductores nuevos. Se sugiere reexaminar estos animales
o estudiar los casos dudosos por Inmunofluorescencia indirecta.
Síndrome Reproductivo y Respiratorio
Porcino (SEP) (SRRP)
Ø Prueba de Inmunofluorescencia
Esta prueba se realiza sobre cultivos celulares de la línea Marc 145 con el virus de
referencia ATC 2832.
El resultado de la prueba se da como positivo o negativo.
Enfermedad de Aujeszky
Ø Prueba de Seroneutralización
Esta es la prueba de referencia para esta enfermedad. Se utiliza cultivos celulares de
la línea PK-15 y el virus de referencia. Los sueros positivos se consideran así a partir
de 1:4.
indirecta (IFI)
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
51
Prueba
Comentarios
Enfermedad de Aujeszky
Ø Prueba de ELISA GpI
La prueba de ELISA GpI diferencia la infección de campo de la respuesta vacunal por
vacunas vivas con detección de la proteína GpI.
Las muestras de suero con lecturas M/N (muestra/control negativo) < 0.60 a 0.70
son sospechosos y las muestras con M/N < 0.70 son negativas.
Influenza porcina
Ø Prueba de Inhibición de la
La interpretación de los resultados para las variantes H1N1 ó H3N2 del virus es igual.
Los títulos de anticuerpos mayores de 1:40 son positivos, aunque clínicamente los
títulos más relevantes son de > 1:80. Los títulos alcanzan > 1:320 a los 14 días de
infección y persisten por 4 semanas y luego comienzan a declinar. Los anticuerpos
maternos pueden durar hasta las 8 semanas de edad.
Gastroenteritis transmisible
Ø Prueba de Seroneutralización.
Los anticuerpos neutralizantes se consideran positivos por encima de títulos >1:4,
aunque las infecciones recientes alcanzan títulos de >1:32.
Encefalomiocarditis viral
Ø Prueba de Seroneutralización
Los anticuerpos seroneutralizantes se consideran positivos por encima de títulos >
1:16
Encefalomiocarditis viral
Ø Prueba de Inhibición de la
Se consideran positivos los sueros con títulos >1:8
Peste Porcina Clásica
Ø Prueba de ELISA
Se considera positivo los sueros con un porcentaje de Inhibición entre 51-100%.
Peste Porcina Clásica
Ø Prueba de NPLA
Se consideran positivos los sueros con un título >1:25
Corona virus respiratorio
Ø Prueba de ELISA diferencial
Los anticuerpos contra gastroenteritis transmisible pueden diferenciarse de los anticuerpos de Coronavirus respiratorio por la prueba de ELISA diferencial.
Brucelosis
Ø Rosa de Bengala
Un suero se considera positivo si se presenta aglutinación al entrar en contacto con
el antígeno de Brucella abortus.
Brucelosis
Ø ELISA Indirecta
Positivo > 30%
Negativo < 30%
Erisipela
Ø ELISA
Se considera esta prueba como de la piara (población).
Los sueros positivos se consideran por encima de lecturas IRPC > 40
Mycoplasma hyopneumoniae
Ø ELISA indirecta
La interpretación de la prueba depende del kit de ELISA utilizado. Con el kit de ELISA
de laboratorios IDEXX las muestras con lecturas M/P menores de 0.3 se consideran
negativas; entre 0,3-0.4 se clasifican como sospechosas y mayores de 0.4 son positivas.
Con el kit de ELISA de laboratorios Bommeli los sueros positivos tienen lecturas por
encima de > 30%, dudoso 20-30% y negativo: <20%.
Actinobacillus pleuropneumoniae (APP)
Ø Prueba de ELISA
La prueba de ELISA (Lab Hipra) divide a los serotipos de APP en dos grupos. Grupo
1: incluye los serotipos 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12 y el Grupo 2 incluye los serotipos 1, 5,
9, 10, 11.
Se toma como positivas las lecturas IRPC para el Grupo 1 > 20 a < = 60% y para
el Grupo 2 >. 60%. Se tomarán como negativas, las lecturas IRPC < = 20%.
Leptospira Interrogans
Ø Prueba de Microaglutinación.
La interpretación de los títulos requiere de la historia de vacunación. Las lecturas de
la vacuna puede alcanzar títulos de 1:400-1800. Los títulos que tienen un significado
frente a un problema reproductivo siempre están por encima de >1:800.
Hemaglutinación
Hemoaglutinación
GET/Corona Virus
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
52
10.7
Interpretación de las pruebas serológicas para aves
Pruebas
Comentarios
Enfermedad infecciosa de la Bolsa
(Gumboro) ELISA
Títulos protectivos (vacunales) hasta 4000
Bronquitis Infecciosa aviar
Anticuerpos maternales: hasta 9000. Pollo de engorde: títulos protectivos
(vacunales) hasta 3500
Bronquitis Infecciosa aviar
Ø ELISA
Ponedoras Comerciales: títulos protectivos hasta 4500,
Reproductoras: títulos protectivos hasta 6000
Enfermedad de Newcastle
Ø Inhibición de la Hemoaglutinación
Anticuerpos maternales hasta 1:512
Pollo de engorde: negativo: menores o iguales a 1:8
Sospechosos 1:128
Positivos: mayor o igual a 1:256
Ponedoras comerciales: hasta 1:1024
Positivos: mayor o igual a 1:2048
Reproductoras: Protectivos hasta 1:1024
Positivos: mayor o igual a 1:2048
Enfermedad de Newcastle
Ø ELISA
Pollo de engorde: títulos hasta 3500
Ponedoras comerciales: títulos hasta 9000
Reproductoras: títulos hasta 9000
Anemia Infecciosa Aviar
Ø ELISA competitiva
Los títulos son expresados como positivos o negativo
Laringotraqueítis infecciosa aviar
Ø ELISA
Los títulos son expresados como positivo o negativo.
Influenza Infecciosa Aviar
Ø Inmunodifusión
Se informa positivo o negativo
Los anteriores valores dependen de la edad, plan vacunal, ruta, cepa y tiempo posterior a la última vacunación.
Los resultados deben evaluarse conjuntamente con los promedios geométricos coeficientes de variación, títulos máximo y mínimo.
Los anticuerpos maternales dependen de los esquemas de inmunización de las progenitoras y pueden ser altos al día de edad.
Se debe considerar el porcentaje de aves con títulos bajos que indiquen susceptibilidad.
La interpretación de los resultados serológicos debe correlacionarse con la situación clínica o productiva del lote.
10.8
Interpretación de algunas pruebas serológicas en la especie equina
Prueba
Comentarios
Encefalitis Equina del Este (EEE)
Ø ELISA de captura IgM
Cuando se demuestran anticuerpos IgM (valores de densidad óptica mayores de
0.2) en equinos sospechosos de la enfermedad se considera positivos a la infección.
En el país no se vacuna contra EEE.
Encefalitis Equina Venezolana (EEV)
Ø ELISA de captura IgM
Se considera un animal positivo por serología a EEV cuando se demuestran anticuerpos IgM con valores de densidad óptica mayores de 0.2 en equinos no vacunados
o con vacunación no reciente (mayor de 90 días). En humanos la detección de
anticuerpos IgM indica infección viral reciente con cepas epizoóticas o enzoóticas
del virus.
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
53
Prueba
Comentarios
Encefalitis Equina Venezolana (EEV)
Ø ELISA directa para IgG
La detección de anticuerpos IgG no es concluyente de infección reciente y sólo indica
exposición en el pasado. Esta gamaglobulina aparece 6 días después de la infección.
Por esta razón es útil el examen de sueros pareados para estudiar la fase aguda y la
fase convaleciente.
Anemia Infecciosa Equina
Ø Inmunodifusión en gel
Detecta la infección. Se considera positivo cuando hay una línea de precipitación
(infección clínica o subclínica). Es negativo si no hay línea de precipitación.
Para detectar infección activa (brote): seroconversión de negativo a positivo.
Influenza Equina
Para detectar infección activa (brote) o infección pasada.
Ø Inhibición de la Hemaglutinación (IH) Positivo: incremento de 4 veces en el título serológico entre un suero agudo y uno
convaleciente.
Leptospirosis
Ø Microaglutinación
Para determinar niveles de anticuerpos contra las serovariedades de Leptospira.
Positivo títulos mayores a 1:800; títulos menores sugieren infección pasada.
significativa de virus detectable por la pruebas de
laboratorio disponibles para tal fin. Las muestras que
se toman en las fases tardías del curso de la infección
por lo general requieren mayor trabajo en el laboratorio
y con mucha frecuencia conducen a resultados negativos.
También se debe reconocer que cierto tipo de infecciones
virales predisponen a que el huésped sufra infecciones
bacterianas o virales secundarias, lo cual puede llevar a
dificultades o confusión en el diagnóstico.
11. VIROLOGÍA Y DIAGNÓSTICO POR
MÉTODOS MOLECULARES
11.1 Guía para recolección y envío de
muestras
El éxito para el aislamiento y/o la detección de agentes
virales en muestras de casos de campo depende sin lugar
a dudas de la colección adecuada y el manejo que se
le de a las muestras. El posible deterioro de la calidad
de las muestras y la pérdida de información valiosa,
empieza desde el momento de la selección del animal y
el proceso de tomar la muestra. Se debe entender que
bajo condiciones no ideales de pH, temperatura, medio
y esterilidad, los virus pierden su actividad y los anticuerpos (defensas) se degradan. Entonces el esfuerzo
es tratar de minimizar el deterioro de las muestras antes
de llegar al laboratorio y dentro del laboratorio mismo.
Se debe tener entonces especial cuidado para proteger
a los agentes virales presentes en las muestras del efecto
del medio ambiente y para mantener la infectabilidad se
debe usar el medio de transporte apropiado.
Las muestras apropiadas para la detección de
virus incluyen secreciones y fluidos corporales (por
ejemplo, secreción nasal, conjuntival, hisopos del tracto
genital, orina, leche, semen, saliva, fluido de vesículas
o aftas), materia fecal, muestras de sangre y biopsias
de piel de animales vivos infectados (antemortem) o
tejidos afectados en casos de animales a los cuales se
les practicó la necropsia (postmortem). La colección
de muestras antemortem (animales vivos) se debe
efectuar en animales enfermos, teniendo como base las
manifestaciones clínicas de la enfermedad que se desea
estudiar. En este sentido en animales con problemas
de tipo respiratorio se deben tomar hisopos nasales o
hisopos de la materia fecal en animales con problemas
intestinales y líquido espinal en animales con problemas
neurológicos
En general se recomienda que las muestras que se
colecten para intentar el aislamiento de agentes virales
deben tomarse lo más pronto posible en el inicio de
la enfermedad, por ejemplo, en los primeros siete días
de haber aparecido los signos de la enfermedad. Es
predecible que las muestras que se colecten en la fase
aguda de la infección viral contengan una cantidad
Como regla general, en la práctica todo animal
que se sospeche que tenga una enfermedad viral se
le debe tomar una muestra de sangre completa (con
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
54
anticoagulante citrato y no EDTA porque éste puede
inactivar los virus) y sueros lo mismo que todos los
tejidos del sistema linfoide porque estos son muy buenas
muestras para el diagnóstico de enfermedades virales
(bazo, ganglios linfáticos y amígdalas).
prevenir derrame de líquidos. Se debe evitar el uso de
hielo común y corriente porque se derrite y produce
humedad y goteo que puede causar problemas durante
el transporte.
Todas las muestras deben enviarse correctamente
identificadas y acompañadas por el formulario único
de remisión de muestras (Forma ICA No. 3-877). El
formulario se debe completar en la mayoría de los casos
pues la historia clínica y los datos epidemiológicos son
fundamentales para el diagnóstico final.
Para lograr buenos resultados y tener éxito todos
los especímenes de casos clínicos se deben tomar
asépticamente, mantenerlos frescos y transportarlos o
remitirlos rápidamente al laboratorio. Si hay demoras
inevitables las muestras se deben almacenar a 4OC pero
no por más de dos días.
Si el período de almacenamiento va a ser prolongado,
se necesita congelar las muestras a -70 OC pero nunca
por favor a -20OC. Los congeladores de las neveras
normales no son adecuadas para el almacenamiento.
Lo ideal es que las muestras se transporten congeladas
con hielo seco pero en la mayoría de los casos esto es
muy difícil en el país, por esto se recomienda usar una
nevera de icopor y hielo refrigerante (gel en paquetescomercial).
11.2 Métodos convencionales para detección
de virus
Aislamiento viral
El intento de aislamiento viral se realiza en dos pasos:
recuperación del virus y la identificación del aislamiento.
El procedimiento para el aislamiento de agentes virales
sólo se realiza en el Laboratorio Nacional de Referencia
diagnóstica. Para esto se realiza el intento de aislamiento
en líneas de cultivos celulares. La identificación del
aislamiento se puede hacer por Inmunofluorescencia
directa, fijación de complemento, microscopia electrónica o técnicas moleculares. Para obtener el diagnóstico
definitivo el virus siempre se debe identificar. Como
se puede observar es un proceso muy laborioso y que
toma tiempo. Por esta razón los resultados toman 1
a 2 semanas después que las muestras han llegado al
laboratorio.
Si se van a utilizar hisopos para la colección de
muestras, se recomienda usar aquellos de dacrón
(hisopos nasales y de materia fecal) porque los hisopos
normales de algodón tienen residuos de hipoclorito de
sodio que pueden inactivar los virus.
Se debe evitar también la deshidratación de los
hisopos, por esta razón se requiere un medio de
transporte adecuado para aislamiento de agentes virales.
Lo ideal es que estos hisopos se coloquen en un medio
que contenga PBS suplementado con 0.5% de gelatina,
suero o albumina bovina más antibióticos, todo esto para
ayudar a la viabilidad de los virus.
Microscopía Electrónica
La microscopía electrónica es muy útil para el diagnóstico
porque permite la visualización directa de algunos virus.
Para el caso de confirmar un diagnóstico con un virus
en particular, este debe tener una morfología típica que
facilite su identificación (por ejemplo, los rotavirus que
producen diarrea en terneros y lechones o los poxvirus
responsable de la viruela aviar o el ectima contagioso
en ovinos). Esta metodología es particularmente buena
cuando las muestras tienen problemas de citotoxidad
para los cultivos celulares, como el caso de la materia
fecal o la orina.
Comercialmente existen sistemas de transporte
para hisopos como el sistema viral Culturette de Becton
DicKinson (USA).
Cuando se vaya a transportar (remitir) los
especímenes como se mencionó, se debe utilizar
neveras de icopor y se debe asegurar que las bolsas de
plástico y tubos que contienen las muestras estén bien
embalados y rodeados de un material absorbente para
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
55
Normalmente la microscopía electrónica no se usa
como rutina en el ICA, pero en caso de enfermedades
exóticas o de una emergencia de campo se recurre
también a esta valiosa herramienta.
11.5 Pruebas moleculares para estudios
de los virus
En general, las muestras que se utilizan para la detección
convencional (aislamiento viral) de virus se consideran
también adecuadas para las pruebas moleculares. Estas
muestras incluyen, las excreciones y secreciones, sangre,
suero y biopsias de animales infectados vivos o muestras
tomadas de animales que se les practicó la necropsia.
11.3 Inmunofluorescencia directa en
secciones congeladas de tejidos
La inmunofluorescencia directa es un método rápido que
permite la detección del antígeno viral en tejidos. Esta
prueba utiliza anticuerpos específicos dirigidos contra
el virus en cuestión, los cuales han sido marcados con
fluoresceína. Cuando se observa una muestra positiva en
el microscopio de luz U.V. se aprecia en los tejidos áreas
de fluorescencia de color verde, las cuales corresponden
a la unión del anticuerpo al antígeno viral presente en
la muestra. Para tener buenos resultados con este
procedimiento es fundamental que las muestras
sean frescas.
Para tener resultados satisfactorios es recomendable
que las muestras se colecten de cada animal individual.
Se debe evitar al máximo la contaminación. El pool
(mezclas) de tejidos para alguna prueba en particular se
puede hacer en el laboratorio.
Existen varias pruebas de diagnóstico de tipo
molecular que se pueden utilizar simplemente como
diagnóstico o para diferenciación de aislados de un
agente viral en particular. Estas son reacciones en cadena
de la polimerasa, huella genómica (perfiles de restricción)
y secuenciación.
La congelación o descongelación pueden afectar
el resultado esperado. Esta es la prueba que se usa de
rutina para la detección del antígeno viral de la Peste
Porcina Clásica, DVB e IBR en secciones de amígdala,
bazo, etc.
11.6 Reacción en cadena de
la polimerasa (pcr)
PCR es un proceso mediante el cual se amplifica una
pequeña porción del genoma viral (ácido nucléico,
ADN o ARN) y luego se aumenta (replica) millones de
veces. La detección de este pequeño segmento del virus
(amplificado) indica que la muestra es positiva para el
virus que se está buscando.
11.4 Prueba de elisa para captura
de antígeno
Esta prueba es rápida y sensible y permite la detección
de agentes virales en muestras tales como suero, tejido,
secreciones y excreciones. Esta prueba es una variación
de la prueba de Elisa en la cual se pega un anticuerpo
específico contra el virus que se requiere buscar en el
fondo de los pozos de una placa de poliestireno. Por
consiguiente el virus o antígeno que esta presente en
la muestra es capturado por el anticuerpo. La presencia de la unión del antígeno-anticuerpo se detecta por
medio de una reacción de color. El desarrollo del color
es proporcional a la presencia de la cantidad de virus.
Esta es una prueba que no se ofrece de manera rutinaria
en el ICA y está disponible en ocasiones para la Peste
Porcina Clásica y Diarrea Viral Bovina pero su costo es
un limitante.
La amplificación adecuada de dicho segmento
depende de la especificidad de 2 oligonucleótidos
sintéticos (Primers o cebadores). Estos oligonucleótidos
se pegan a las correspondientes secuencias de nucleótidos
del genoma viral y así se inicia el proceso de detección.
Se acepta que el PCR es en teoría capaz de detectar
una copia del virus (genoma). El PCR es el más costoso
de los métodos de diagnóstico pero tiene la ventaja que
puede detectar virus vivos o virus muertos que estén
presentes en muestras de campo aún autolisadas. Hay
varios tipos de PCR.
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
56
RT-PCR
Peste Porcina
Clásica
Este tipo de PCR se utiliza para detectar ARN en muestras
de campo. En este caso se requiere una trascripción reversa
(TR) del ARN para producir un ADN complementario
para que sirva luego para la amplificación. Esta es la prueba
clásica que se utiliza hoy en día para detectar virus ARN.
PCR – anidado
Este tipo de PCR se hace en dos etapas. Un PCR de primero
y sobre el segmento ADN producido por éste, una nueva
reacción de PCR (reacción anidada). La primera reacción
utiliza un grupo de 2 primers (cebadores) para generar
un producto (amplificado) que sirva de templete para la
segunda reacción (anidada). Esta reacción anidada usa un
par de primers específicos para una región interna del producto amplificado en la primera reacción. Esta prueba es
sensible y específica para la detección de los virus ARN.
RT-PCR
Estudios
filogenéticos
Aislados virales
Enfermedad de RT-PCR
Newcastle
Tráquea, pulmón,
cerebro o aislados
virales.
Enfermedad de RT-PCR
Gumboro
Bolsa de fabricio
Mycoplasma
hyopneumoniae
PCR-anidado
Hisopo nasal, lavado
traqueobronquial
Mycoplasma
gallisepticum
PCR y RFLP
Hisopo traqueal
Brucela abortus
PCR
Leche, tejido linfoide,
cultivos
Salmonella spp PCR
Hígado, bazo, materia fecal, cultivos.
11.9 Oferta del servicio
11.7 Análisis de las secuencias de nucleótidos
El ICA tiene el propósito de proporcionar resultados precisos y oportunos. Sin embargo, muchas de las pruebas
para demostrar agentes virales no se realizan diariamente.
Si usted tiene un caso que está relacionado con importaciones, exportaciones, ingreso de animales a ferias y exposiciones, por favor verifique con anticipación (Servicio de
Recepción de Muestras, Tel.: 3686826) la disponibilidad
de las pruebas. Una llamada previa, con seguridad contribuirá a la prestación de un mejor servicio. Se debe tener
en cuenta que bajo cualquier circunstancia los resultados
siempre estarán listos con el siguiente tiempo:
El análisis de las secuencias de nucleótidos que conforman pequeños segmentos (fragmentos) del genoma
permite conocer los agentes virales en detalle. La comparación de esta información genética permite una
diferenciación entre los aislados de diferentes regiones
geográficas y facilita los estudios epidemiológicos de las
enfermedades virales.
11.8 Pruebas moleculares disponibles en el
laboratorio nacionalde diagnóstico
Prueba
Tiempo de respuesta
Aislamiento viral
1-3 semanas
Suero, tonsila,
pulmón, tejido
linfoide.
Inmunofluorescencia directa
24-48 horas
Virus del SRRP RTPCR y
secuenciación
Aislado viral
PCR
48-72 horas
Virus de la
Rabia bovina
RT-PCR y s
ecuenciación
Encéfalo o aislado
viral
Secuenciación
10-20 días
Peste Porcina
Clásica
RT-PCR y secuen- Tonsila, bazo, ganglio
ciación
linfático
Agente infeccioso
Prueba
Virus del SRRP RT-PCR
Muestras que se
requieren
ELISA de captura para detectar antígeno 24-48 horas
Análisis con anticuerpos monoclonales 2 semanas
(Peste Porcina Clásica)
Microscopia electrónica
1 semana
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
57
11.10. Guía especial para envío de muestras
para las enfermedades virales de control
oficial
la cabeza en refrigeración (no congelación), siempre y
cuando que no transcurran más de 48 horas para su
envío al laboratorio.
11.10.1 Remisión de muestras para Rabia
Diagnóstico e interpretación de resultados
En casos sospechosos de rabia las muestras siempre
se deben enviar acompañadas del formato único de
recepción de muestras (Forma ICA 3-788). Si la especie afectada es de importancia pecuaria se diligenciará
la Forma ICA 3-106.
1. La prueba de Inmunofluorescencia directa se realiza
diariamente tanto en los Centros de Diagnóstico que
pertenecen a la red de rabia como en el Laboratorio Nacional de Diagnóstico. Esta técnica detecta
la presencia del virus rábico. La prueba produce
resultados en dos horas.
Como se trata de una enfermedad zoonótica, las
muestras se deben extraer con mucho cuidado, tomando
las precauciones de bioseguridad necesarias en cuanto a
equipo y material de protección se refiere..
2. Un resultado positivo se considera un resultado
final del caso e indica que el animal estaba infectado
con el virus rábico. Por lo tanto, las personas expuestas deben acudir e informar de forma inmediata al
servicio de salud pública.
Las muestras que se requieren para el diagnóstico
de la rabia en los rumiantes (bovinos, ovinos y caprinos),
equinos, caninos son: la corteza cerebral, hipocampo
(cuerno de Amón) y cerebelo. En cualquier caso se deben
tomar porciones de 1 cm cúbico de ambos hemisferios
cerebrales puesto que el virus se puede encontrar
irregularmente distribuido. Se colectan muestras frescas
para virología y muestras para fijación en formalina
bufferada 10%. Como se requiere hacer diagnóstico
diferencial del síndrome nervioso bovino se debe, además,
incluir tallo encefálico (base del encéfalo, cerebro medio,
tálamo y médula oblonga). Estas muestras se envían en
formalina bufferada al 10% para estudio histológico de la
Encefalopatía espongiforme bovina (EEB).
3. Un resultado negativo se considera un resultado
preliminar, el cual debe ser reconfirmado por un
segundo examen prueba biológica (inoculación
intracerebral en ratones). El resultado final se
considera negativo si al cabo de 30 días los ratones
sobreviven. En contraste un caso positivo (síntomas neurológicos o muerte de los ratones por rabia)
ocurre a los 7-10 días después de la inoculación a
los ratones.
4. La evaluación histopatológica se puede realizar en
24-72 horas y aun cuando se trata de un examen
específico, un resultado negativo no descarta la
posibilidad de la infección por el virus rábico.
Si el caso corresponde a un animal pequeño
(hámster, roedores) se recomienda enviar al laboratorio
el animal completo (por su tamaño). Cuando se trata de
quirópteros, se prefiere también el ejemplar completo.
11.10.2 Remisión de muestras para el diagnóstico de la
encefalitis equina Venezolana (EEV) y del Este
(EEE).
Los tejidos con destino al laboratorio de zoonosis
(rabia) se deben colocar en bolsas plásticas (dobles) o en
frascos plásticos con cierre hermético. Estas muestras se
identifican correctamente y se depositan en una nevera de
icopor para su envío en refrigeración (dependiendo si el
transporte hacia el laboratorio es menor de 24 horas).
La historia clínica del caso sospechoso de Encefalitis
Equina debe ir siempre acompañada de las formas ICA
3-106 y 3-937 ó 3-936 (la primera si se envían muestras
para análisis serológicos y la segunda si las muestras
son para aislamiento e identificación viral). En caso
de muestras de origen humano se adjuntan también la
historia clínica médica.
Cuando se dificulta la extracción del cerebro de la
cavidad craneana en casos especiales se puede enviar
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
58
Por tratarse de una enfermedad de alto riesgo
epidemiológico y de control oficial, se requiere que
las muestras sean enviadas lo más pronto posible
al laboratorio. El embalaje de las muestras se hará
preferiblemente en frascos plásticos de boca ancha
con cierre hermético, donde se depositan las bolsas
plásticas que contienen los viales con los sueros y las que
contienen los tejidos. La viabilidad del virus dependerá
de la conservación en frío que se le de a las muestras
desde el mismo instante de la toma hasta su llegada al
laboratorio.
72 horas de la aparición de los signos clínicos, cuando se
considera la presentación de la fase virémica.
Las muestras se tomarán utilizando una aguja por
individuo y en volumen suficiente para asegurar el envío
al laboratorio de un mínimo de 1 ml de la muestra.
La sangre se tomará en tubos vacutainer con o sin
anticoagulante (para obtener sangre completa o suero
según el caso). De los tejidos se requieren porciones
no mayores de 2 cm. Es de anotar que el ICA no toma
muestras a humanos, éstas deben venir remitidas por el
Servicio Nacional de Salud Pública.
Se prefiere que estas muestras vengan en una nevera
de icopor rodeadas con hielo seco (en congelación),
si esto se dificulta se pueden utilizar bolsas de gel
refrigerante (refrigeradas). Es importante tener en
cuenta que el tiempo entre la colección de las muestras
y la llegada al laboratorio no debe ser mayor de 24 horas
para tener posibilidad de aislamiento del agente viral.
El remitente debe elegir el sistema de transporte más
rápido (aeropuerto-aeropuerto o courier de mensajería
aérea). Es importante que el remitente informe al Centro
de Recepción de Muestras en el Laboratorio Nacional
de Diagnóstico (Tel.: 3686826) los datos pertinentes a
la remisión.
B.
Muestras para examen serológico
Los équidos que se deben muestrear son aquellos que
tengan síntomas, no vacunados contra la EEV o que
tengan más de 90 días de haber sido vacunados. La razón
es que en los primeros 90 días pos-vacunación es difícil
diferenciar la respuesta vacunal (anticuerpos IgM para
EEV) de la respuesta de infección de campo.
Una alternativa importante para el diagnóstico es
la toma de sueros pareados para observar la dinámica
de seroconversión. Los sueros se colectan de equinos
con signos clínicos o aparentemente sanos (contactos).
Posteriormente a los 5-10 días siguientes se tomará la
segunda muestra (así se tienen muestras tanto de la fase
aguda como de la fase convaleciente cercana a la muerte).
A. Muestras para aislamiento viral
Estas deben ser colectadas en la etapa inicial de la
enfermedad (primeros 5 días cuando haya viremia). Se
requiere tomar muestras de sangre (sueros) tanto de
equinos asintomáticos (que hayan estado en contacto
con enfermos), como de equinos con signos clínicos de
tipo neurológico. De animales que hayan muerto en la
fase sobreaguda o al comienzo de la presentación de los
signos neurológicos se recomienda colectar el: cerebro,
hígado y bazo.
C.
Muestras para examen histopatológico
Se recomienda la colección de segmentos de cerebro
(corteza cerebral), hipocampo, cerebro medio (tálamo
y base del cerebro) o, cerebelo y médula oblonga. Los
segmentos no deben ser mayores de 2 cm de tamaño y
se deben fijar en formalina bufferada al 10%.
Es posible que la viremia desaparezca rápidamente
y se dificulte el aislamiento del virus, por esta razón se
sugiere sacrificar un animal que haya estado en contacto
y que tenga reacción febril.
D. Interpretación de Resultados
El diagnóstico específico de la infección viral de las encefalitis equinas se basa en el aislamiento e identificación
del agente viral, o en la demostración de anticuerpos tipo
Si se trata de pacientes humanos se necesita sangre,
sueros o hisopos nasofaríngeos tomados en las primeras
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
59
IgM en individuos que hayan tenido signos compatibles
con la enfermedad o en sus contactos, quienes además
para el caso del diagnóstico para la EEV no deben tener
historia de vacunación en los 3 meses anteriores.
Las muestras de epitelio podal se consideran de mala
calidad ya que normalmente vienen contaminadas en
alto grado. Cuando los epitelios obtenidos vienen de
lesiones cicatrizadas se consideran de mala calidad
debido a que tienen escasa cantidad de virus.
11.10.3 Remisión de muestras para enfermedades
vesiculares
2. Para enviar los epitelios obtenidos de las lesiones
vesiculares se debe utilizar en lo posible glicerina
fosfatada (pH 7,2-7,4), la cual se prepara en el laboratorio de Enfermedades Vesiculares y se suministra
según las necesidades de las diferentes oficinas o
Centros de Diagnóstico del ICA. Esta glicerina contiene un indicador de pH (Rojo Fenol), el cual indica
la acidez o alcalinidad de la misma dependiendo
del color: violeta cuando está alcalino y amarillo
cuando está ácido. El virus de la Fiebre Aftosa es
muy sensible a las variaciones de pH y la acidez la
inactiva rápidamente.
Las muestras que se requieren para el diagnóstico de las
enfermedades vesiculares incluyen epitelio, líquido esofagofaríngeo y suero. Las muestras deben remitirse al Laboratorio Nacional de Diagnóstico Veterinario, laboratorio
de Enfermedades Vesiculares ICA-CEISA. Se recomienda
comunicar previamente la fecha, hora y forma de envío
indicando el número de la guía y la empresa que transporte
la nuestra (teléfono 3686821, telefax 3686824).
Todas las muestras deben remitirse acompañadas
de la Forma ICA 3-106 y la forma MTA-EV-F01
(Información inicial de ocurrencia de enfermedad en
un predio). Estas formas se deben diligenciar totalmente
y el formato único de recepción de muestras (Forma
ICA No. 3-877).
3. Las muestras de suero sanguíneo deben ser obtenidas en forma aséptica, preferiblemente utilizando
tubos sellados, estériles y al vacío. Una vez se toma
la muestra de sangre se debe dejar retraer el coágulo, retirarlo y centrifugar si es posible. El suero
se debe enviar refrigerado (lo ideal es congelado).
Es importante no enviar sangre completa debido
a que ésta se puede hemolizar en el transporte.
Estos sueros deben ir siempre acompañados del
formato único MP-EV-FOL (envío de sueros al
laboratorio) y formulario único de recepción de
muestras, completamente diligenciados (Forma
ICA No. 3-877).
1. La muestra por excelencia para realizar un diagnóstico es el epitelio y preferiblemente lingual. Si
los animales enfermos no tienen lesiones linguales
se puede tomar epitelio gingival, podal o mamario.
Es recomendable enviar mínimo dos gramos de
epitelio, debido a que se puede necesitar otro tipo
de pruebas complementarias o repeticiones de la
prueba que no se pueden hacer si la cantidad remitida es muy escasa.
Es importante tener en cuenta que se necesitan
muestras de buena calidad. Una muestra es de buena
calidad cuando por su aspecto físico y conservación proporciona un antígeno viral en suficiente
concentración. En general se consideran de buena
calidad los epitelios colectados de lesiones linguales
frescos. Los epitelios gingivales, nasales y mamarios
poseen sustancias anticomplementarias como lípidos, saponinas, etc. que dificultan la realización de
las pruebas y por esto estas últimas se consideran
de regular calidad.
12. RECOLECCIÓN Y ENVÍÓ DE MUESTRAS
AL LABORATORIO DE PATOLOGÍA
CLÍNICA Y PARASITOLOGÍA
12.1
Ácaros de la Sarna
Para la detección de ácaros en las diferentes especies
domésticas se recomienda hacer un raspado rápido y
profundo sobre la piel afectada, hasta que produzca
sangrado capilar hacia la parte del tejido sano y el
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
60
lesionado. Éste debe ser enviado en alguno de los
siguientes medios:
-
La cantidad de muestra de materia fecal mínima
para estas pruebas es de 10 gramos, con un muestreo del
10 al 15% del total de animales del predio es suficiente
para tener una buena idea de la situación. No obstante,
en el caso de las aves se recomienda tomar un pool de
muestras de varios galpones.
Glicerina al 50%
Soda o potasio cáustico al 5 ó 10%
Si no hubiese ninguno de los anteriores se podría
enviar en aceite de cocina o aceite mineral.
La muestra debe ser enviada en un recipiente plástico, bien tapado e identificado. Se debe acompañar además con el formato único de Recepción de
Muestras.
En caso de no enviarlas el mismo día se sugiere
refrigerar a 4 grados centígrados, pero no congelar.
Para preservar la(s) muestra(s) es conveniente añadir
o adicionar 1cc de formaldehído por cada 10 gramos de
materia fecal, para mantener la estructura de los huevos
para su recuento.
12.2 Clasificación de ectoparásitos y
parásitos adultos de: bovinos, pequeños
rumiantes, porcinos, aves, caninos,
felinos, dípteros (abejas) entre otros y
animales silvestres.
12.4 Muestra(s) de orina para observar huevos
de nematodos (ejemplo: Stephanurus
dentatus en cerdos)
Cuando se requiere la identificación y clasificación precisa de ectoparásitos y parásitos adultos (endoparásitos),
las muestras se deben enviar en alguna de las siguientes
soluciones:
-
Al igual que las otras muestras debe enviarse la orina
fresca en un frasco plástico, inmediatamente al laboratorio, en caso de demorarse en llegar a este se conservara de la siguiente manera: 2cc de formol al 40% o de
Timol por 100 cc de orina (esta se podrá refrigerar más
no congelar).
Alcohol al 70%
Formaldehído: Solución para 1000 parásitos
10cc Formol
100cc Cloroformo
100cc Agua destilada
12.5 Muestra de sangre para hemoparásitos y
hemograma
La calidad de un resultado hematológico, depende
en gran parte de la técnica que se emplea para obtener
la muestra. Algunas sugerencias que pueden ayudar al
profesional o al productor son las siguientes:
Las muestras deberán ser enviadas en frascos
plásticos muy bien sellados e identificados.
12.3 Muestras de materia fecal para recuento
de huevos de parásitos gastrointestinales,
coccidias y Fasciola sp. y presencia de
larvas de parásitos pulmonares
Se prefiere que la muestra se tome directamente del recto
o por enemas con solución salina o agua destilada. La
muestra se debe enviar en recipientes plásticos de boca
ancha para facilitar la recolección o bolsas plásticas
estériles con cierre. En lo posible se debe tomar una
cantidad generosa de materia fecal.
Ø
Exceptuando la presencia del anticoagulante, el tubo
usado para recolectar la sangre debe estar completamente seco, para evitar la hemólisis (destrucción de
los glóbulos rojos). Lo mismo se dice en cuanto a la
jeringa, la aguja o cualquier otro equipo que quede
en contacto con la muestra de sangre.
Ø
La punción de la vena debe ser lo más exacta posible,
para evitar el traumatismo de los tejidos perivasculares. Siempre con el traumatismo de los tejidos hay
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
61
contaminación de la sangre por los fluidos tisulares
que contienen factores coagulantes. Muchas veces
después de traumatizar el tejido en busca de la vena,
la sangre se coagula dentro de la jeringa y así no se
puede usar para este tipo de examen.
Ø
Ø
Ø
Ø
Durante la toma de la sangre no debe aplicar
demasiada fuerza de succión con la jeringa, para
prevenir la hemólisis de los glóbulos rojos. Después
de obtener la muestra de sangre, es importante
quitar la aguja de la jeringa, antes de depositar la
sangre en el tubo. Esta recomendación es muy
importante, porque al forzar la sangre a través de
la aguja se puede causar la ruptura de los glóbulos
rojos. Luego se considera necesario invertir el tubo
por lo menos tres o cuatro veces, para mezclar bien
el anticoagulante.
La muestra de sangre para prueba de Woo o
microhematocrito (detección de tripanosoma)
deberá enviarse al laboratorio el mismo día,
inmediatamente después de su toma a temperatura ambiente para poder visualizar el movimiento
de los tripanosomas. Para los otros hemoparásitos, como Anaplasmas y Babesias entre otros, la
sangre podrá mantenerse en refrigeración, puesto
que son más resistentes.
12.6 Muestra para uroanálisis
La colección de la muestra de orina se hace hacia la
mitad de la micción. Esto evita la necesidad de sonda,
ya que la experiencia ha demostrado que la mayoría de
muestras que son cuidadosamente recogidas no están
contaminadas por bacterias. Sin embargo, no es posible
demorar la colección hasta que el animal desee orinar, o
si el animal no coopera en la recogida de la muestra de
orina durante la micción, probablemente tocará colectarla mediante la sonda. La cantidad de la muestra no
debe ser menor a 15 ml de orina.
Es importante evitar la hemólisis, porque cuando
esta ocurre, hay un cambio en el numero de glóbulos rojos, lo cual afecta el hematocrito. En relación
con la cantidad de sangre, se toman 5 ml por cada 2
gotas de solución de EDTA. al 10 %. Estas muestras
se deben enviar al laboratorio lo antes posible, el
mismo día de su toma para evitar alteraciones en los
resultados. Existen en el mercado tubos vacutainer
de tapa lila que contienen anticoagulante, en caso
de no tenerlos se debe tener en cuenta las recomendaciones anteriores.
El tiempo de la recogida de la muestra y el análisis
de la misma debe ser lo más breve posible y si esto no
sucede la muestra debe ser refrigerada no congelada.
Si la demora es de más de 24 horas se sugiere añadir un
conservador como ácido bórico que preserva la orina
de bacterias durante 4 días, conserva las células y los
cilindros. Se añade en una proporción de 0.5 gr/28
ml de orina
Para extensiones sanguíneas (frotis) estos se pueden
hacer de sangre tomada directamente de la vena
y específicamente para el caso de hemoparásitos
se pueden hacer directamente de sangre periférica,
especialmente del borde de la oreja o punta de la
cola, es decir sin adición de anticoagulante o de
sangre que lleva anticoagulante (especialmente
E.D.T.A). Generalmente se extiende una gota de
sangre en película uniforme sobre un portaobjetos
y mediante un extensor (con una inclinación de 45
grados) que puede ser otro portaobjetos teniendo
en cuenta que el extremo de este sea libre de astilladuras o rayas. Estas extensiones deberán ser enviadas previamente fijadas con metanol y cubiertas
con papel absorbente y papel de aluminio o en
cajas de láminas.
13. LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA
13.1 Guía general para la toma y envío de
muestras para diagnóstico toxicológico
Ø
Consideraciones Generales
Un diagnóstico preciso es el factor individual más importante en las intoxicaciones de los animales, ya que de él
depende que pueda establecerse en forma oportuna y
adecuada el tratamiento específico y el plan preventivo
que impida la presentación de nuevos casos.
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
62
Ø
Criterio Diagnóstico
e) Tratamientos o procedimientos previos al cuadro
clínico o la muerte.
Existen cinco criterios fundamentales para el diagnóstico
toxicológico:
f) Descripción detallada de los signos observados por
el propietario.
1. Historia
Además de lo anterior, se debe indagar sobre la presencia de venenos, rodenticidas, insecticidas, fármacos,
pinturas, fertilizantes, derivados del petróleo u otros químicos almacenados y bajo qué condiciones; establecer si
se han utilizado últimamente y si existe la posibilidad de
que los animales hubieran tenido contacto con dichas
sustancias. Es importante hacer un examen cuidadoso
del alimento y del agua, por si hay plantas tóxicas, áreas
enmohecidas o presencia de olores impropios, etc.
2. Síntomas clínicos
3. Hallazgos postmorten
4. Análisis químico
5. Pruebas biológicas
13.2 Toma y remisión de la muestra para
análisis de laboratorio
Otros cambios que orientan el diagnóstico son:
cambios bruscos de alimentación ,fuente del agua de
bebida, tipo de pasto establecido en el potrero, pastos o
forrajes de corte, programas de inmunizaciones e historia
de enfermedades anteriores.
Cuando se sospecha que la causa de la enfermedad que
afecta a un animal o a un grupo de ellos, es debida a
la presencia de un agente tóxico, la toma y remisión
correcta de la(s) muestra(s) al Laboratorio de Toxicología
es un recurso analítico, valioso y de suma importancia
para el toxicólogo para tomar las medidas de control e
instaurar los tratamientos adecuados en el menor tiempo
posible. Las muestras remitidas deberán ir acompañadas de una historia clínica (epidemiológica) lo más
completa posible, la cual servirá de ayuda para orientar
el trabajo y diagnóstico final acertado; en ella debe consignarse lo siguiente (Forma ICA 3-877):
13.2.1 Recipientes
Estos deben ser de plástico con cierre hermético y perfectamente limpios, de preferencia de tapa plástica o en
su defecto aislar la tapa metálica del recipiente mediante
el empleo de polipropileno (plástico), de densidad resistente al cierre y que a la vez evite el posible derrame de
la muestra durante su transporte.
a) Información básica: nombre y dirección del propietario, especie, raza, sexo, edad y peso del animal.
Si hay afectadas poblaciones, número de animales
afectados y/o muertos, curso en horas o días.
13.2.2 Rotulado y etiquetado
Todo recipiente que contenga muestras para análisis
toxicológico deberá rotularse y etiquetarse con los datos
correspondientes como: nombre del propietario, nombre
o número del animal, tejido o tipo de muestra, fecha de
toma, número de la historia clínica correspondiente y
análisis deseado.
b) Tipo de alimentación que reciben los animales,
tiempo que llevan consumiendo un alimento en
particular, o si se han presentado cambios en la
dieta.
c) Régimen de explotación (intensivo, extensivo,
semi-intensivo). Determinar si es una explotación
tecnificada, tradicional, etc.
13.2.3 Conservación de la Muestra
d) Estado de los animales, actividad y cambios de
comportamiento.
Para el análisis toxicológico las muestras no deben ser
lavadas para evitar arrastrar residuos del agente químico y
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
63
para impedir la contaminación con el agua. Nunca agregar preservativos como formalina o alcohol pues estas
sustancias pueden alterar el resultado de las reacciones
químicas; el envío debe hacerse refrigerado y por la vía
más rápida posible.
13.3 Observaciones importantes:
13.2.4 Principales muestras a enviar para análisis
toxicológico
Las muestras deben ser enviadas de acuerdo con la
sustancia que se sospecha causó la intoxicación, sin
embargo, existen algunas muestras generales en las
que se puede investigar una gran mayoría de agentes
tóxicos así:
Muestras de animal vivo
Suero separado del coágulo
50 ml
Sangre completa
10 ml
Orina
50 ml
Pienso u otros alimentos
200 g
Vómito y otras descargas
200 g
Leche
50 ml
10 ml
Orina
50 ml
Hígado/riñón/grasa corporal
100 g
Encéfalo. Congelado
Medio
Contenido gástrico ruminal
500 g
Agua
Agua (sospechosa de insecticida)
Ø
El suero y la sangre se envían refrigerados
Ø
Los órganos diferentes se envían separadamente
en envases de plástico de boca ancha con cierre
hermético.
Ø
La sangre, el suero y la orina serán enviados en viales
estériles, manteniendo las técnicas indicadas para la
toma y envío de muestras al laboratorio. El suero
sanguíneo se envía refrigerado una vez separado
del coágulo y se transporta en viales que facilitan
su transporte en refrigeración.
Tóxico
o análisis
solicitado
Hígado o
riñón
Orina
50 g
50 ml
Organoclorados
Encéfalo
Contenido
rumen
Hígado,
riñón, Sangre
Medio
100 g
50 g
10 ml
Cianuro
Sangre
entera
Hígado
Forraje-ensilaje
Estricnina
Hígado
Riñon
Orina
Fluoracetato
Contenido
gástrico
100 ml
3,7 litros
100 g
Drogas o cualquier otro material
100 g
Pastos y plantas
100 g
Instituto Colombiano Agropecuario, ICA
64
Cantidad
Antinomioarsénico
500 g
Sal
Muestra
Monóxido de Sangre
carbono
entera
Muestras de alimento y agua
Piensos o materia prima
Los tejidos se deben congelar para su envío al laboratorio en frascos de plástico y se depositan en bolsas
estériles con cierre.
13.4 muestras precisas para
análisis específico
Muestras de animal muerto
Suero o sangre completa (si es posible)
Ø
Observaciones
No contaminar la
muestra
150 ml
10 ml
50 g
100 g
Congelar
la muestra
rápidamente
50 g
uno entero
50 ml
.....
Todo el
disponible
13.4.1 Plantas Tóxicas
700 g de la misma, en estado lo más fresco posible,
en bolsa plástica debidamente sellada y rotulada con
el nombre vulgar que esta recibe en la región.
Las propiedades venenosas de las plantas toxicas varían
con los diferentes estados de crecimiento; con el tipo de
suelo donde crecen; con el clima y con la altitud. Algunas
son tóxicas en ciertas estaciones del año y las otras se
manifiestan nocivas en ciertas regiones. La clase y cantidad de principios tóxicos obtenidos en las partes de la
planta (hojas, tallos, raíces, flores y frutos), cuando son
consumidos por los animales determinan alteraciones
neuromusculares, comunican malos sabores y olores a
la leche y en otras ocasionan abortos, hipotiroidismo,
fotosensibilidad, deformaciones congénitas e inclusive
la muerte en un lapso muy corto.
13.5 Interpretación de resultados del
laboratorio
El objetivo final del estudio toxicológico es correlacionar los resultados con todos los datos obtenidos. Los
resultados positivos no siempre evidencian intoxicación
ni los negativos que no la hubo. Es decir, como ejemplo
se pueden citar casos como la detección de hidrocarburos clorados en tejido graso sólo indica que el animal
estuvo expuesto, pero no necesariamente intoxicado.
La no detección de insecticidas organofosforados en
tejidos corporales, no garantiza que no ha habido
intoxicación por dicho compuesto, ya que el animal
puede metabolizar rápidamente el organofosforado y
no ser detectable en el análisis químico.
13.4.2 Envío de plantas tóxicas
Se debe cumplir con los siguientes requisitos:
Ø
Colectar un ejemplar completo, es decir, que contenga: tallo, hojas, flores y frutos
Ø
Colocar el ejemplar completo en una hoja de papel
periódico, previamente doblada en dos partes iguales
y rociada con formol al 10%, cuidando que todas
sus estructuras queden perfectamente extendidas.
Ø
Ø
Ø
13.6 Pruebas cualitativas disponibles en el
laboratorio
Consignar en el borde superior externo de la hoja
de periódico plegada la siguiente información: procedencia de la planta (departamento, municipio,
vereda, hacienda), nombre vulgar, ciclo biológico
y época del año en que es consumida
La anterior preparación debe ser colocada entre dos
láminas de cartón para evitar el deterioro por ruptura
o pliegue en el material empacado.
Ø
Técnica para Nitritos y Nitratos en material vegetal
Ø
Técnica para cianuro en material vegetal fresco y
contenido ruminal
Ø
Técnica para selenio, en zonas donde se sabe que
este elemento es problema en suelos y por tanto las
plantas que lo acumulan van a intoxicar al animal
que la consume.
Los anteriores técnicas están a su vez para
implementarse cuantitativamente, al igual que algunos metales pasados como plomo, arsénico, cadmio
y mercurio.
Si se desea analizar los constituyentes químicos de la
planta o ensayos biológicos es necesario enviar 500 a
Instrucciones generales para el usuario de los servicios oficiales de diagnóstico veterinario en Colombia
65
Terminó de imprimirse en
enero de 2004 en
Tel: 2885338
Bogotá, DC, Colombia