Download Colecta de pelo, costras y piel por J. Schumacher and H.D. Moll

In: A Manual of Equine Diagnostic Procedures, Schumacher J. and Moll H.D. (Eds.). Publisher:
Teton NewMedia, Jackson, WY, USA (www.tetonnm.com/). Internet Publisher: International
Veterinary Information Service, Ithaca NY (www.ivis.org), Last updated: 16-Jul-2010; A5406.0710.ES
Colecta de pelo, costras y piel
J. Schumacher 1 and H.D. Moll 2
1 College of Veterinary Medicine Auburn University Auburn, AL, USA and 2 Center for Veterinary Health Sciences,
Oklahoma State University, Stillwater, OK, USA.
Traducido por: M. Sanz, Gluck Equine Research Center, University of Kentucky, KY, USA. (10-Feb-2015).
Raspado cutáneo
Los raspados cutáneos en el caballo son primeramente importantes para el diagnóstico microscópico de ectoparásitos.
Ácaros de superficie o aradores así como algunas larvas de nematodos pueden ser identificadas utilizando técnicas de
raspado cutáneo. Debido a que los ectoparásitos son raros en el caballo, y generalmente son identificados mediante métodos
alternativos, los raspados cutáneos son comúnmente omitidos del examen dermatológico rutinario.
Indicaciones
Para la investigación de enfermedades pruríticas de la piel típicas de infecciones parasitarias. Las enfermedades
pruríticas de los miembros deben de ser investigadas utilizando raspados cutáneos ya que la sarna corióptica puede
ocasionalmente causar enfermedad de la piel de la porción distal de los miembros.
Muchos dermatólogos equinos consideran el raspado cutáneo como parte del examen dermatológico de rutina.
Materiales
Máquina para cortar el pelo (opcional)
Hoja de bisturí numero 10 o 12. Para disminuir la posibilidad de lacerar la piel, la hoja debería tener el filo romo antes
de su uso. Alternativamente se puede utilizar una cureta de hueso para el raspado (Fig. 4.1).
Portaobjetos de vidrio, cubreobjetos y una caja para transportar las laminillas.
Aceite mineral para inmovilizar los ácaros de la sarna, haciendo su identificación más fácil. Se puede agregar un
insecticida al aceite mineral para mejorar la inmovilización de los ácaros.
Figura 4.1. Una cureta para hueso puede ser utilizada para el raspado cutáneo. - Para ver esta imagen
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Procedimiento
Seleccionar un sitio en la periferia de una lesión que no esté excoriada.
El pelo que pueda interferir con el raspado puede ser cortado con la máquina de cortar pelo.
Aplicar aceite mineral en el área de la piel seleccionada para el raspado.
La hoja del bisturí se sostiene de forma perpendicular a la superficie de la piel y un área grande es raspada de forma
superficial. Luego, se raspa un área menor dentro del área previamente raspada, hasta que se observa sangrado capilar.
El apretar la piel antes y durante el raspado profundo mejora la colección de ácaros.
El tejido recolectado se coloca en el portaobjetos de vidrio y se cubre con un cubreobjetos o alternativamente, se
coloca en una caja portaobjetos para su transporte.
Las muestras deben de examinarse en el menor tiempo posible para evitar la distorsión o el escape de los parásitos
colectados. Un mínimo de 5 muestras deberían ser analizadas antes de confirmar un diagnostico negativo.
Para aumentar la eficacia del diagnóstico, el material colectado por raspado puede ser agregado a una solución
saturada de sal para flotación o centrifugación. Ácaros y huevos, que flotan en la solución, pueden ser localizados
mediante la examinación microscópica de varias gotas colectadas de la superficie de la solución.
Colecta de pelo y costras para cultivo de dermatofitos
El diagnostico de dermatofitosis debe de ser preferiblemente confirmado por cultivo micológico del pelo, descamaciones o
costras. La examinación microscópica directa del pelo, descamaciones o costras de áreas afectadas y áreas adyacentes a
estas pueden revelar microorganismos. Debido a que los dermatofitos que afectan comúnmente a los caballos no son
fluorescentes, la lámpara de Wood no es un método de diagnóstico confiable.
Indicaciones
Cualquier área focal o generalizada de alopecia en expansión debe de ser examinada para dermatofitos, en especial si las
lesiones se localizan en la cabeza, cuello, áreas de la montura, cincha o miembros de los caballos, especialmente en
caballos jóvenes. Las lesiones dermatofíticas a menudo contienen descamaciones o costras y pueden o no ser pruríticas.
Materiales
Pinzas hemostáticas limpias
Un sobre para la colecta de pelo y costras
Una solución de hidróxido de potasio al 10 o 20% (KOH) (Remel, Inc. 12076, Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215) u
otra solución clarificante. Estas soluciones digieren el pelo y otros residuos mejorando la visualización de elementos
fúngicos. Para la identificación de dermatofitos equinos, la utilización de un agente clarificante no es esencial.
Un microscopio con luz, porta y cubreobjetos.
Alcohol isopropílico al 70% otro un jabón no-antiséptico
Medio de cultivo para dermatofito (DTM) (Sab-Duets plates, Bacti-Labs, Mountain View, CA; Derma Tube, Remel,
Inc.12076 Sante Fe Drive, Lenexa, KS 66215; o Dermatophyte Test Medium, Blue Ridge Biologicals, Inc. Box 634
Hickory, NC 28603) (Fig. 4.2)
Figura 4.2. Medio de cultivo para dermatofito. - Para ver esta imagen en su tamaño completo, diríjase
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Examinación para dermatofitos
Procedimiento
La lesión puede ser limpiada con alcohol o lavada con un jabón no-antiséptico previo a la colecta del pelo para
disminuir el crecimiento de contaminantes. La lesión debe de estar seca en el momento de la colecta de la muestra
(para disminuir el crecimiento de contaminantes).
Utilizando una pinza hemostática limpia, los pelos rotos de la periferia de la lesión son jalados en la dirección del
crecimiento. Múltiples lesiones deben de ser muestreadas para aumentar la posibilidad de aislamiento del dermatofito.
Para la examinación microscópica directa, el pelo y las costras se suspenden en una solución clarificante, Si esta
solución no está disponible, las muestras pueden ser visualizadas utilizando aceite mineral o agua. Pelos y costras son
examinadas para la identificación de hifas y artroconidias utilizando los objetivos 10x y 40x del microscopio. Clínicos
con poca experiencia en el examen directo de pelo para la identificación de dermatofitos deben de enviar las muestras
a un laboratorio con personal experimentado.
Para inoculación del DTM, las conglomeraciones de pelo deben de separarse y solo algunos pelos afectados deben
de ser levemente presionados dentro del medio. Se debe evitar penetrar la superficie del medio con las muestras. La
inoculación del medio con una cantidad excesiva de pelo puede resultar en un sobrecrecimiento de contaminantes.
Cuando se utiliza DTM en un vial, la tapa no debe apretarse porque los hongos necesitan oxígeno para su crecimiento.
Las muestras inoculadas deben de ser incubadas a temperatura ambiente (para el crecimiento de Trichophyton
equinum, Microsporum canis o Microsporum gypseum) y a 37°C (para el crecimiento de Trichophyton verrucosum).
La identificación de colonias de dermatofitos es facilitada por la examinación microscópica (10X). Se puede realizar
un preparado microscópico tocando la colonia con una cinta celofán transparente y aplicándola luego a un
portaobjetos al cual se le agrega una gota de agua o azul de lactofenol.
Interpretación
Aun técnicos especializados generalmente fallan en la identificación de dermatofitos durante la examinación directa
de pelo infectado. Los pelos infectados con dermatofitos generalmente se encuentran fragmentados, pálidos o
hinchados. Las esporas del hongo son muy pequeñas, redondas a ovaladas y a menudo están agrupadas como cadenas
a lo largo de la vaina del pelo (Fig. 4.3).
La colonia de dermatofitos crece en aproximadamente 3-14 días. Tratamiento previo del caballo con anti-fúngicos
puede retrasar el crecimiento de los dermatofitos. Los cultivos de caballos tratados previamente deben de incubarse
por 21 días.
Las colonias de dermatofitos son de color blanco, beige o crema. Las colonias contaminadas son generalmente negras,
verdes, grises o marrones.
El crecimiento de dermatofitos causa un aumento en el pH y esto resulta en un cambio de color del medio de amarillo
a rojo alrededor del área de crecimiento de la colonia. Los cambios de color se producen en forma simultánea con el
crecimiento de la colonia (Fig. 4.4). Los contaminantes también pueden causar un cambio de color a rojizo en el
medio, pero el cambio está generalmente retrasado y no ocurre de forma simultánea con el crecimiento de la colonia
(Fig. 4.5). Para la interpretación correcta de los resultados, las muestras deben de examinarse de forma diaria.
La identificación del dermatofito requiere la examinación microscópica de las colonias que crecieron en DTM. La
mayoría de las especies de Microsporum pueden ser identificadas reconociéndolas esporas macroconidias
características. La identificación de especies de Trychophyton requiere evaluación adicional que incluye la
determinación de requisitos de crecimiento específicos. La mayoría de los textos de microbiología incluyen
información acerca de la identificación de dermatofitos.
Figura 4.3. Los dermatofitos son rara vez identificados utilizando examinación directa de pelo
infectado, aun por personal técnico experimentado. - Para ver esta imagen en su tamaño completo,
diríjase al sitio www.ivis.org . Figura 4.4. Los dermatofitos causan un cambio de color del medio de amarillo a rojo alrededor del área
del crecimiento de la colonia. El color cambia en forma simultánea con el crecimiento de la
colonia. - Para ver esta imagen en su tamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -
Figura 4.5. Los contaminantes también causan un cambio de color hacia el rojo en el medio pero el
cambio está generalmente retrasado y no sucede en forma simultánea con el crecimiento de la
colonia. - Para ver esta imagen en su tamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -
Biopsia de piel
Las biopsias de piel son más útiles en el diagnóstico de las enfermedades nodulares de la piel. Algunas enfermedades de
piel difusas no pueden ser diagnosticadas sin el examen histológico de la piel afectada. Una biopsia de piel tomada de
forma temprana en un área no traumatizada es mucho más valiosa que una biopsia tomada de una lesión crónica. Múltiples
biopsias de piel aumentan la posibilidad de un diagnóstico exacto.
Indicaciones
Lesiones neoplásicas sospechosas
Lesiones neoplásicas sospechosas
Cualquier dermatosis que no responda al tratamiento como es de esperar
Cualquier dermatosis de apariencia inusual
El diagnóstico definitivo de una enfermedad de la piel para la cual el tratamiento será costoso, peligroso o que durará
mucho tiempo.
Contraindicaciones
Ninguna, pero la localización de la lesión puede influenciar el tipo de biopsia tomada. Por ejemplo una biopsia por
escisión o por incisión (Fig. 1.1) en el dorso de un caballo de monta puede ser contraindicada a menos que los
resultados de una biopsia menos invasiva (por ejemplo aspiración por aguja fina) sean indicativos de que una biopsia
incisional es necesaria para el diagnóstico o que la escisión es necesaria para la resolución de la lesión.
Las biopsias incisionales de un sarcoide pueden iniciar el crecimiento agresivo del tumor.
Sitios sobre vasos sanguíneos, articulaciones y prominencias óseas deben de ser evitadas.
Materiales
Solución anestésica local, jeringa y una aguja de 20 a 25G de diámetro (o.9-0.5 mm)
Un punzón de biopsia de piel de 4 a 10 mm (por ejemplo AcuPunch Biopsy Punch, Acuderm Inc, Ft. Lauderdale, FL
33309) o
Una hoja de bisturí, pinzas y porta-agujas, material de sutura (o grapas) y un depresor de lengua o un pedazo de
cartón.
Un agente fijador (generalmente formalina al 10%)
Procedimiento
La piel debe de ser mínimamente preparada para que las lesiones no sean removidas durante la preparación. El pelo
puede ser cortado y el sitio enjuagado con alcohol pero la piel no debe de ser afeitada ni fregada. El uso de
preparaciones iodadas pueden interferir con la tinción.
La anestesia regional con un anestésico local es ideal cuando es posible (por ejemplo los miembros o área perineal), si
no, un anestésico local puede ser inyectado subcutáneamente directamente por debajo del sitio de biopsia o inyectado
alrededor de la lesión en forma de bloqueo en anillo.
Un pedazo circular de piel y tejido subcutáneo puede ser removido con movimientos continuos circulares (en una sola
dirección) del punzón (Fig. 4.6). La mayoría de los patólogos prefieren muestras de >6mm. Para lesiones profundas,
el punzón puede ser reinsertado en el sitio para remover más tejido. O
También puede usarse una hoja de bisturí, para remover un pedazo de piel elíptico que contenga piel normal y
anormal. Las biopsias de lesiones ulcerativas tienen que incluir siempre un borde normal de epitelio. Las lesiones
vesiculares y bullosas deben de ser biopsiadas completamente.
Luego de que la piel es cortada con el punzón o la hoja de bisturí, el tejido subcutáneo y la piel son tomados y
elevados en forma delicada con pinzas (de forma alternativa, la muestra biopsiada es tomada y levantada con una
aguja pequeña empujando a través del borde de la muestra) y liberada con la hoja de bisturí. Algunos patólogos
enfatizan que para evitar cambios histopatológicos de artefactos, que la muestra de biopsia no sea liberada con tijeras.
El exceso de sangre debe de ser removido de la muestra absorbiendo con una gaza antes de la fijación.
Muestras de impronta para evaluación citológica pueden ser realizadas en ese momento rotando y presionando
delicadamente la muestra en un portaobjetos.
Las biopsias elípticas deben de ser montadas para que no se plieguen durante la fijación. El lado de la muestra con
tejido subcutáneo se coloca en un depresor de lengua o un cartón y es presionado levemente para que se adhiera a la
superficie.
La formalina al 10% es el fijador utilizado generalmente para la piel. La solución de Bouin puede utilizarse también
pero solo para biopsias pequeñas o finas porque esta solución no penetra bien el tejido. La piel no debe de ser
almacenada en la solución de Bouin por más de 24h. El fijador de Michel puede utilizarse a veces para fijar piel para
estudios de inmunofluorescencia cuando se sospecha de una enfermedad inmuno-mediada de la piel, aunque la piel
fijada en formalina también puede utilizarse para el diagnóstico enfermedades inmuno-mediadas. Ante la duda en
cuanto al fijador, se debe de consultar al patólogo antes de tomar las biopsias.
Las biopsias elípticas se cierran con suturas o grapas. Las biopsias por punzón por lo general son cerradas con una
sola sutura o grapa o pueden dejarse para que cicatricen como una herida abierta.
Figura 4.6. Un pedazo circular de piel enferma rodeada de piel normal y tejido subcutáneo puede ser
removido mediante un movimiento circular continuo utilizando un punzón de biopsia AcuPunch.
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Interpretación
Un patólogo con conocimiento en enfermedades de la piel en equinos debe de ser quien interprete las muestras enviadas
para examinación histológica. Para ayudar en la interpretación, la historia, descripción de hallazgos al examen físico, y el
diagnóstico sospechado deben de ser incluidos siempre con la muestra.
Lecturas recomendadas
Evans AG, Stannard AA. Diagnostic approach to equine skin disease. Compendium on Continuing Education for the
Practicing Veterinarian. 8:652-660, 1986.
Pascoe RRR, Knottenbelt DC. Manual of Equine Dermatology. New York: WB Saunders Co; 1999:21-34.
Kowalski JJ. Bacterial and mycotic infections. In: Reed SM and Bayly WM, eds. Equine Internal Medicine. Philadelphia:
WB Saunders Co; 1998:61-93.
Scott DW, Miller WH. Jr. Equine Dermatology. St. Louis: Elsevier Science; 2003:59-162.
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