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Escherichia coli Diarreigénicos en Pacientes Pediátricos Con Síndrome Diarreico Agudo. Enero 2012 – Agosto 2013. Paraguay. 1WEILER N, 1ORREGO M., 1ZARATE M., 1ALVAREZ M., 2PORTILLO R., 3LIRD G., 4ACOSTA l., 4CARNIBELLA ME., 1, 5ARCE F., 6MORALES E., 7KAWABATA A., 8MENACHO C., 9 FERNANDEZ P., 10, 1MELGAREJO N., 11, 1QUIÑONEZ B. 1Laboratorio Central de Salud Pública, 2Centro Medico La Costa, 3Sanatorio Italiano, 4Hospital Nacional de Itaugua, 5Hospital de Clínicas San Lorenzo, 6Hospital Regional Ciudad del Este, 7Centro de Emergencias Médicas, 8Laboratorio Díaz Gill, 9Hospital Filadelfia, 10Instituto de Previsión Social Nanawa,11Hospital General Pediátrico. Introducción: Con el nombre de Escherichia coli diarreigénico (DEC) se denomina a un grupo heterogéneo de cepas que poseen distintos factores de virulencia y diferente interacción con la mucosa intestinal del hospedador, causan diferentes síndromes diarreicos y tienen distinta epidemiología. Las cepas DEC son causa importante de morbi-mortalidad en los países envías de desarrollo. Hasta el presente se reconocen cinco categorías o patotipos: E. coli enteropatógeno (EPEC), E.coli enterotoxigénico (ETEC), E. coli enteroinvasivo (EIEC), E.coli enteroagregativo (EAEC) y E. coli productor de toxina Shiga (STEC). Ha sido propuesta una sexta categoría, llamada E. coli de adherencia difusa (DAEC), aunque la capacidad patogénica y la implicancia epidemiológica se encuentra aun en estudio. Objetivos: Determinar la prevalencia de Escherichia coli diarreigénicos en pacientes pediátricos cuyas muestras fueron remitidas al Laboratorio Central de Salud Pública en el periodo Enero 2012-Agosto 2013. Determinar la frecuencia de los patotipos y la franja etaria mas afectada. Materiales y métodos: Se procesaron un total de 600 muestras de heces de pacientes pediátricos en edades comprendidas entre 0-14 años remitidas por instituciones integrantes de la Red de Enteropatógenos al Laboratorio Central de Salud Pública entre Enero 2012 y Agosto 2013. Las muestras fueron sembradas en agar selectivo Mac Conkey y Mac Conkey sorbitol e incubadas a 37 º C por 24 horas. Para la detección e identificación de las Escherichia coli diarreigénicas se realizó la técnica de PCR múltiplex previamente estandarizada con cebadores diseñados específicamente para amplificar siete genes de virulencia diferentes. PCR múltiple IpaH / aggR / stx1 / stx2 “primers” iniciadores de: I) Sethabutr et al., amplifican un fragmento de 619 pb de la región del gen correspondiente a la secuencia IpaH de EIEC y de Shigella spp. II) Ratchtrachenchai et al., amplifican un fragmento 254 pb de la región del gen correspondiente al regulador de expresión AggR de EAEC III) Pollard et al., amplifican un fragmento de 130 pb de la región del gen correspondiente a la subunidad B para Stx1 y un fragmento de 346 pb de la región del gen correspondiente a la subunidad A para Stx2. PCR múltiple eae / lt / st: “primers” iniciadores de: I) Karch et al., amplifican fragmento de 864 pb de la región conservada del gen eae para EPEC y de EHEC; II) TamanaiShacoori et al., que amplifican fragmento de 322 pb de la región del gen correspondiente a la subunidad B para la toxina LT de ETEC; y III) Hornes et al., amplifican un fragmento de 147 pb correspondiente al gen de la toxina ST de ETEC Resultados. De un total de 600 muestras analizadas se detectaron factores de virulencia compatibles con algún patotipo Escherichia coli diarreogénicos en 83 muestras lo que corresponde a una prevalencia del 14 % (Fig.1). La frecuencia de aparición de los distintos patotipos fue la siguiente: 30 % ETEC, 28 % EIEC, 21 % EAEC,16% EPEC y 5 % de EPEC/ETEC. No se detectaron aislamientos con factores de virulencia asociados a STEC (Fig.2). La distribución etaria fue un 65% en pacientes de 0 a 4 años, 21% en pacientes de 5-9 años y 14% en pacientes de 10 a 14 años (Fig.3). Fig.3 Distribución según edad Fig.1 Fig.2 Frecuencia de Patotipos DEC 35% 30% 30% 28% 25% 21% 20% 16% 15% 10% 5% 5% 0% 0% ETEC EIEC EAEC EPEC EPEC/ETEC STEC Conclusiones. El porcentaje de Escherichia coli diarreigénicos detectado tiene similitud con lo reportado en otros países de la región con algunas diferencias en la frecuencia de los patotipos lo que nos indica que estos patógenos bacterianos cumplen un rol importante como parte de la etiología de la enfermedad diarreica aguda infecciosa en la población infantil estudiada. Se debe destacar que el diagnóstico de las diferentes categorías DEC no puede ser realizado por métodos fenotípicos convencionales, ya que presentan características bioquímicas indistinguibles de cepas de E. coli comensales. Por ello, es necesario disponer de un procedimiento diagnóstico específico dirigido a la detección de los factores de virulencia utilizando métodos moleculares o métodos de inmunodiagnóstico.
