Download El virus del Ebola - Instituto Nacional de Salud

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
IMPLEMENTACION DEL
DIAGNOSTICO DEL VIRUS EBOLA
Lic. TM. JESSIE PARI COLQUI
LRNMV-CNSP-INS
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
IMPLEMENTACION DEL
DIAGNOSTICO DEL VIRUS EBOLA
https://www.youtube.com/watch?v=_NBwNxIIxTs
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
VIRUS DEL ÉBOLA
•El virus del Ebola (EBOV) causa en
el ser humano la Enfermedad por el
virus del Ébola (EVD/EVE) con una
letalidad hasta 90 %.
•Descrito 1976 (David
Yambuku – Zaire (RDC)
Finkes)
•Nombre del río Ébola.
. Se han registrado al menos 5864 casos,
con 2811 fallecidos en más de 60 lugares
distintos, muchos de ellos de difícil
acceso. (OMS/OPS 22/09/14)
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SITUACION ACTUAL DEL ÉBOLA
País
Área Afectada
Guinea
Conakry, Coyah, Forecariah, Gueckedou,
Kouroussa, Macenta, Siguiri, Pita,
Nzerekore, Dubreka, Yomou, Kerouane
No longer active: Boffa, Dabola,
Dinguiraya, Kissidougou, Telimele
Kindia
Liberia
Lofa, Montserrado, Margibi, Bomi, Bong,
Grand Cape Mount, Nimba, Grand Bassa,
Grand Gedeh, RiverCess, River Gee,
Sinoe, Gbarpolu
Nigeria
Port Harcourt, Lagos
Sierra
Leone
Kailahun, Kenema, Kono, Kambia,
Bombali, Tonkolili, Port Loko, Pujehun,
Bo, Moyamba, Bonthe, Western area
Senegal
Dakar
http://www.cdc.gov/vhf/ebola/resources/distribution-map-guinea-outbreak.html
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SITUACION ACTUAL DEL ÉBOLA
Pais
Total
Casos
Total
fallecidos
Confirmado
Laboratorio
Guinea
1008
632
818
Liberia
3022
1578
863
Nigeria
20
8
19
Sierra Leona
1813
593
1640
Senegal
1
0
1
Total
5864
6263
2811
2917
3341 (57%)
3487
http://www.cdc.gov/vhf/ebola/outbreaks/guinea/index.html
WHO: EBOLA RESPONSE ROADMAP UPDATE 22 September 2014
Health-care workers (HCWs) 22/09/14:
348 han desarrollado EVD (67 Guinea, 174 Liberia, 11
Nigeria, y 96 Sierra Leone) 5.9%
186 fallecidos (35 Guinea, 85 Liberia, 5 Nigeria y 61Sierra
Leone) 6.6%
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CARACTERÍSTICAS DEL VIRUS ÉBOLA
EBOV:
• familia: filoviridae (filovirus)
Marburgvirus (1967) y
Cuevavirus
• género: ébolavirus
• virión: forma filamentosa.
• virus: RNA lineal sentido (-)
800 – 1000 nm (970)
• replicación: 8 horas.
• Longitud variable 14000 nm.
• Diametro: 80 nm
, VP30.
•
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CARACTERÍSTICAS DEL VIRUS ÉBOLA
• Replicación: 8 horas.
• Codifica para siete proteínas
estructurales que forman el
virión:
-3 proteínas que forman parte
de la membrana: VP24, VP40,
GP.
- 4 proteínas que forman la
nucleocápside: L, NP, VP35,
VP30.
Fotografía coloreada tomada por microscopio
electrónico Universidad de Washington en St. Louis.
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VIRUS DEL ÉBOLA
•Periodo de Incubación: 2 a 21 días.
•Se propaga en la población humana a
través de contacto con fluidos y/o
secreciones corporales de las personas
infectadas, directo o indirecto, de
persona a persona.
•No existe riesgo de transmisión
durante el período de incubación.
•El reservorio natural del Ebola es
desconocido (murciélagos (murciélagos
frugívoros de la familia Pteropodidae.
hospedadores naturales del virus.
• Hospedero: Humanos monos, gorilas,
chimpancés, babuinos puercoespines,
cerdos, roedores y musarañas.
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TIPOS DEL VIRUS DEL ÉBOLA
Ébola-Zaire (EBOV): 26/08/1976
05
Yambuku > tasa de mortalidad 90 %.
tipos
1995 315(254)
Ébola-Sudan (SUDV): 1976
Nzara trabajadores fábrica de algodón
285(151)
Ébola-Taï Forest (TAFV): 01/04/1994
Costa De Marfil, Chimpancés
Ébola-Bundibugyo (BDBV): 2007
Uganda. 127(35)
Ébola-Reston (RESTV): 11/1989
Virginia Philippines 100 macacos, letalidad
alta mas no en humanos
20 brotes 1600 fallecidos
25 al 90 %
Feldmann H, Geisbert TW. Ebola haemorrhagic fever. Lancet 2011;377:849-62.
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PROCESO DE IMPLEMENTACIÓN
Escenario actual:
Probabilidad de la introducción
en el país
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CONSIDERACIONES
Ébola está clasificado como
patógeno de riesgo grupo 4,
por lo tanto sólo debe ser
manipulado en un nivel de
bioseguridad (BSL4).
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BIOSEGURIDAD BSL3
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TOMA DE MUESTRA
- Bioseguridad EPP
- Tipo de muestra: Sangre total
S/A 8 ml (EDTA 4 ml , tal ves
citrato ,
- Material descartable .
- Personal entrenado y calificado.
-Bolsas de Bioseguridad.
- Alcohol de 70 °
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TOMA DE MUESTRA
Enfermedad por el virus del ebola implicaciones de la introducción en las
Américas OMS/OPS-2014
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DIAGNOSTICO POR LABORATORIO
Que detectar??
Como detectar??
Aislamiento Viral
ELISA
IF
MICROSCOPIA ELECTRONICA
INMUNOHISTOQUÍMICA
RT-PCR
Virus
Antígenos
Acidos Nucléicos
Anticuerpos
Periodo de Incub.
2-21 días
Promedio 8-10 días
NO
Contagioso
0
Periodo sintomático
9
1
2
3
Contagioso
4
5
6
7
8
9
10
Feldmann H, Geisbert TW. Ebola haem -orrhagic fever. Lancet 2011;377:849-62
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DIAGNOSTICO POR LABORATORIO
RT-PCR
ELISA IgG IgM
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DIAGNOSTICO POR LABORATORIO
•CDC: Virus es
generalmente
detectable por tiempo
real RT-PCR a partir de
3-10 días después de la
aparición de los
síntomas.
* Las muestras de
sangre por lo general
comienzan
en
dar
positivo RT – PCR Diagnóstico 1 día antes
que
aparezcan
los
síntomas.
Adaptado de: J Infect Dis. (1999) 179 (Supplement 1): S28-S35. doi: 10.1086/514318
The New England Journal of Medicine
J Infect Dis. (2007) 196 (Supplement 2): S142-S147. doi: 10.1086/520545
Agosto 2014
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RT-PCR EN TIEMPO REAL
Molecular diagnostics of viral hemorrhagic fevers
Christian Drosten, Beate M. Kümmerer, Herbert Schmitz, Stephan Günther∗ 2003
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RT-PCR EN TIEMPO REAL
MIX EBOV
- 2X RG MULTIPLEX RT-PCR (RG-PROBE RT-PCR)
- PRIMERS EBOGP-1Dfwd (Eurofilm, OPERON)
- PRIMERS EBOGP-1Drev (Eurofilm, OPERON)
- 20 ul MIX
-
05 ul RNA
CP RNA ZAIRE
2014
CICLAJE ROTOR GENE
- SONDAS EBOGP-1ZPrb (Eurofilm, OPERON)
50ºC
15 min
1 vez
- SONDAS EBOGP-1SPrb (Eurofilm, OPERON)
95ºC
5 min
1 vez
95ºC
15 seg.
45 veces
60 ºC
15 seg.
45 veces
- ENZIMA (RG-TAQ MIX)
- RNASE-FREE WATER
4ºC
∞
JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY 0095-1137/01/$04.000 DOI: 10.1128/JCM.39.11.4125–4130.2001
Nov. 2001, p. 4125–4130
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RT-PCR EN TIEMPO REAL
Quantitation Report
Run Name
EBOV TAQMAN 03.09.14
Run Start
9/3/2014 4:01:44 PM
Run Finish
9/3/2014 5:34:53 PM
Notes
EBOV TAQMAN
Run On Software Version Rotor-Gene 2.2.3.11
Run Signature
The Run Signature is valid.
Gain Green
5.33
No Colour Name
.
Type
Ct
1
DENV 1234
Negative
Control
2
CHIKV
Negative
Control
3
CN AGUA
NTC
4
EBOV RNA
Positive
Control
28.41
5
EBOV RNA 1:100
Positive
Control
35.71
6
EBOV RNA 1:1000
Positive
Control
40.27
Ct
Given Conc
Comment (Copies)
Calc Conc
(Copies)
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RT-PCR EN TIEMPO REAL
Quantitation data for Cycling A.Green
Quantitation Report
Experiment Information
Run Name
EBOV-TAQMANOK 2014-09-06 (1)
Run Start
9/6/2014 12:39:51 PM
Run Finish
9/6/2014 2:13:53 PM
Notes
EBOV TAQMAN
Run On Software Version Rotor-Gene 2.2.3.11
Run Signature
The Run Signature is valid.
Gain Green
5.33
Gain Yellow
10.
Gain Orange
10.
Gain Red
10.
No Colou Name
.
r
Type
Ct
1
CHIKV
Negative
Control
2
AGUA
NTC
3
EBOV
1:100
Positive
Control
34.03
4
EBOV
1:1000
Positive
Control
36.53
Ct
Given Conc
Comm (Copies)
ent
Calc Conc
(Copies)
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
RT-PCR EN TIEMPO REAL
Quantitation Report
Experiment Information
Run Name
EBOV-TAQMAN 2014-09-25 (1)
Run Start
9/25/2014 9:59:15 AM
Run Finish
9/25/2014 11:34:19 AM
Operator
Blga. Dana Figueroa
Notes
EBOV TAQMAN
Run On Software Version Rotor-Gene 2.2.3.11
Run Signature
The Run Signature is valid.
Gain Green
5.33
Gain Yellow
8.
Gain Orange
10.
Gain Red
10.
No Colo Name
. ur
Type
1
INS092559214
Unkno
wn
2
INS092559214
Unkno
wn
3
cN
Unkno
wn
4
cP EBO 1;100
Unkno
wn
5
cPMAYARO
Unkno
wn
6
dENGUE SOLO HEX Unkno
wn
7
cHICK SOLO HEX
Unkno
wn
8
cN SOLO HEX
Unkno
wn
9
cP EBO 1;100 SOLO
HEX
Unkno
wn
10
cPMAYARO SOLO
HEX
Unkno
wn
Quantitation data for Cycling A.Green
Ct
34.8
3
Ct
Given Conc
Comment (Copies)
Calc Conc
(Copies)
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
RT-PCR EN TIEMPO REAL
La cepa actualmente en África
Occidental 97% de homología
con Zaire ebolavirus
Baize S, Pannetier D,
Oestereich L, et al.
Emergence of Zaire Ebola
virus disease in Guinea —
preliminary report.
N Engl J Med. DOI:
10.1056/NEJMoa1404505
2010 Centers for Disease Control and Prevention y otros Laboratorios. (Adaptada
de Peters, 2010.)
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PRESENCIA DE VIRUS EN FLUIDOS
•Se
ha
detectado
durante varios meses en
ciertas secreciones. Ebola
hasta 101 días
• Diferenciales: Malaria,
Hepatitis fiebre tifoidea,
shigelosis,
cólera,
leptospirosis,
peste,
rickettsiosis,
fiebre
recurrente, meningitis,
etc.
Adaptado de: J Infect Dis. (1999) 179 (Supplement 1): S28-S35. doi: 10.1086/514318
J Infect Dis. (2007) 196 (Supplement 2): S142-S147. doi: 10.1086/520545
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PRESENCIA DE VIRUS EN FLUIDOS
Assessment of the Risk of Ebola Virus Transmission from Bodily Fluids and Fomites
Daniel G. Bausch, Jonathan S. Towner, Scott F. Dowell, Felix Kaducu, Matthew Lukwiya, Anthony Sanchez,
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
AEROPUERTO ó PUERTO
Casos con síntomas
n< 1
Sanidad Aérea - Marítima
Ambulancia
(SAMU)
HNDAC
Unidad de aislamiento
FLUJOGRAMA CON
SOSPECHA DE EVE
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Toma de muestra
Transporte
INSTITUTO NACIONAL DE
SALUD
Diagnóstico - Monitoreo
(LRNMV) BSL_3
Inactivación del suero
Monitoreo
Diagnóstico
Bioquímica, Hemograma, Perfil de
coagulación, orina,
Electrolitos/gases
RT-PCR en Tiempo real -
Eliminación de residuos
INS
Cloro, autoclave, incineración
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APORTES DEL INS
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
COLABORADORES
CDC - Atlanta
OPS - Washington
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REF. BIBLIOGRÁFICA
 Sylvain Baize, Ph.D., Delphine Pannetier, Ph.D., Lisa Oestereich, M.Sc., Toni Rieger, Ph.D., Lamine
Koivogui, Ph.D., N’Faly Magassouba, Ph.D. Emergence of Zaire Ebola Virus Disease in Guinea —
Preliminary Report. The New England Journal of Medicine August 17, 2014.
 Yi Huang, Hanging Wei, Yunpeng Wang, Zhengli Shi, Herve Raoul, Zhiming Yuan. Rapid: Detection
of filoviruses by real-time TaqMan polymerase chain reaction assays. Virologica Sinica October
2012, Volume 27.
 Marcus Panning, Thomas Laue, Stephan O, lschlager, Markus Eickmann, Stephan Becker. Diagnostic
Reverse-Transcription Polymerase Chain Reaction Kit for Filoviruses Based on the Strain
Collections of all European Biosafety Level 4 Laboratories. The Journal of Infectious Diseases 2007;
196:S199–204
 Masayuki Saijo, Masahiro Niikura, Tetsuro Ikegami, Ichiro Kurane, Takeshi Kurata, and Shigeru
Morikawa. Laboratory Diagnostic Systems for Ebola and Marburg Hemorrhagic Fevers Developed
with Recombinant Proteins. Clinical Andvaccine Immunology, Apr. 2006, p. 444–451.
 Christian Drosten, Beate M. Kümmerer, Herbert Schmitz, Stephan Günther. Molecular diagnostics of
viral hemorrhagic fevers. 2002 Elsevier Science.
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
REF. BIBLIOGRÁFICA
 Stephan Günther, Marcel Asper, Christina Röser, Luciano K. S. Luna, Christian Drosten, Christian
Drosten. Application of real-time PCR for testing antiviral compounds against Lassa virus, SARS
coronavirus and Ebola virus in vitro. 2004 Elsevier B.V.
 Christian Drosten, Stephan Göttig, Stefan Schilling, Marcel Asper, Marcus Panning, Herbert
Schmitz, Stephan Günther. Rapid Detection and Quantification of RNA of Ebola and Marburg
Viruses, Lassa Virus, Crimean-Congo Hemorrhagic Fever Virus, Rift Valley Fever Virus, Dengue
Virus, and Yellow Fever Virus by Real-Time Reverse Transcription-PCR. Journal of Clinical
Microbiology , July 2002, p. 2323–2330.
 Tammy R. Gibb, David A. Norwood, JR., Neal Woollen, and Erik A. Henchal. Development and
Evaluation of a Fluorogenic 5[1] Nuclease Assay To Detect and Differentiate between Ebola Virus
Subtypes Zaire and Sudan. Journal of Clinical Microbiology Nov. 2001, p. 4125–4130
 Anthony Sanchez, Thomas G. Ksiazek, Pierre E. Rollin. Detection and Molecular Characterization of
Ebola Viruses Causing Disease in Human and Nonhuman Primates. The Journal of Infectious
Diseases 1999; 179(Suppl 1):S164 – .
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