Download VIRUS EN MUSACEAS: Diagnóstico y manejo en ALC

Esther L. Peralta
Centro de Investigaciones Biotecnológicas del
Ecuador (CIBE-ESPOL)
Mayo, 2013
VIRUS EN MUSACEAS:
Diagnóstico y manejo en ALC
Resumen de la
presentación
• Breve introducción
• Enfermedades virales
presentes en ALC,
características principales,
síntomas, diagnóstico e
importancia
• Medidas generales de manejo
•
•
•
•
Agentes infecciosos ultramicroscópicos
Parásitos intracelulares estrictos
Poseen un solo tipo de ácido nucleico (ADN o RNA)
Se multiplican por copia de su material genético y se
transmiten por diversas vías
• Clasificación: Orden, Familia, Subfamilia, Género, Especie
Diagnóstico viral
• Microscopía
electrónica
• Sintomatología
En campo
• Detección inmunoquímica
o serológica
• Técnicas de detección de
ácidos nucleicos
En plantas
indicadoras
ELISA
PCR (diferentes
(diferentes
variantes)
variantes y
métodos
combinados)
Virus de Musáceas
Bromoviridae,
Cucumovirus
Nanoviridae,
Babuvirus
Potyviridae,
Potyvirus
Tymovirales,
Betaflexaviridae,
Caulimoviridae,
Badnavirus
Género no asignado
CMV
BSOLV
BSGFV
BSVNV
BSMYV y
otras
BBrMV
BanMMV
BVX
BBTV
AbaBTV
Virus de banano y plátano en ALC
• En América Latina y el Caribe los más
diseminados y conocidos son:
– Mosaico (CMV)
– Estriado (BSOLV, BSImV, BSMYV)
• Hallazgos recientes o reportes de:
-
Mosaico suave (BanMMV)
Virus X (BVX)
Mosaico de las brácteas (BBrMV)
‘Bunchy top’ (BBTV)
Algunas características de los virus de banano y
plátano…. ‘Mosaico’
• Bromoviridae, Cucumovirus
29 nm
50 nm
• ARN de simple cadena; genoma segmentado,
tripartito; ARN subgenómico
Algunas características…. ‘Mosaico’
• MUY amplia gama de hospederos.
• No produce pérdidas graves, aunque algunas cepas o
“strains” son capaces de producir síntomas más severos.
• Cepas con diferencias serológicas
• Transmisión por vectores (numerosas especies de áfidos) ,
material vegetativo y mecánicamente.
• Infecciones mixtas pueden ocasionar síntomas mas severos
www.aps.org
A.P. James
Algunas características….’Mosaico’
Algunas características….’Mosaico’ diagnóstico
• Plantas indicadoras
– Chenopodium amaranticolor
– C. quinoa
– Vigna unguiculata
• RT-PCR, Multiplex PCR
• ELISA-DAS
Tipo de muestra
T/P (%)
Rango valores (UDO
405 nm)
Donantes
Micropropagación
91/9 (9,8)
0,3-0,56
Producción
42/15 (35%)
0,43-1,604
• Alta incidencia y distribución mundial
• Gran cantidad de hospederos y vectores
• Algunas cepas pueden ocasionar síntomas
mas severos. Se ha registrado disminución de
peso de racimos de hasta 45%. (Lockhart et al)
Algunas características….. ‘Estriado’
• Caulimoviridae, Badanavirus
1
0
0
n
m
27±3 x 119 ±8 nm
• ADN bicatenario, circular
• 4 especies reconocidas, pero 12 identificadas
• Amplia distribución mundial
• Transmisión mediante vectores (Planococcus citri,
Saccharicoccus sacchari), material de propagación,
semilla botánica
Algunas características….’Estriado’
• Elevada variabilidad genómica y tres formas:
– Episomal encapsulada
– Episomal no encapsulada
– Integrada
Una de las interacciones
planta-virus más complejas
Integración
genómica
Influencia de diferentes
tipos de estrés
Variabilidad genómica y
sintomatológica
Variabilidad y coevolución … ‘Estriado’
Gayral, et al, 2010. J.Of Virology, 2010,
84(14): 7346-7359
Cladograma (Geering et al, 2005)
Algunas características….’Estriado’
JW. Daniells
JW. Daniells
En Williams
JW. Daniells
Vainas de las hojas
separadas del
pseudotallos
Musa AAA group cv.
Red Dacca
En Williams
Necrosis interna en Williams
Algunas características….’Estriado’
M.A. Dita
De la Cueva
C. Barreras
M.A. Dita
‘Estriado”… diagnóstico
Tipo de muestra
T/P (%)
Rango valores (UDO
405 nm)
Donantes
Micropropagación
47/12 (25)
0,35-0,57
Producción
20/5 (25%)
0,36-0,98
M CS 1 2
589
pb
3
4
5
6 7
M 7
8 9 10 11 12 13 14 15
M CN
BSOLVF2/R2
ISEM, Multiplex PCR; RCT….Se
continuan desarrollante
variantes optimizadas de
diagnóotico
-Tiene efectos muy variables y puede
ocasionar la muerte de la muerte de las
plantas
-Se registrado hasta el 50% pérdidas en el
brote de Rakai (Uganda) –Afecta la longitud y
calidad de frutos (5%).
-Pérdidas en rango 6-100% (Daniells, 2001).
-Complejidad para saneamiento y diagnostico
M.A. Dita
C. Barreras
M.A. Dita
Mosaico de las brácteas
Detección de BBrMV mediante IC-RT-PCR
Producto 324nt
Muestras 1-6: hojas liofilizadas
Muestras 2, C y D : IC
(inmunocaptura)
Primers:
BBrMV 604nt: Bateson 1995;
Rodoni 1997.
BBrMV 324nt: Dassanayake, 2001
BBrMV 260nt, BBrMV 280nt: IskraCaruana, 2008
Algunos resultados… ‘Mosaico de las brácteas’
NESTED
200
Modificación:
Uso de nested PCR (PCR anidada).
Combinación de primers para
incrementar la sensibilidad en la
detección.
1. Amplificación de un fragmento de
408bp con primers externos.
2. Re- amplificación de un fragmento
interno de 200bp.
(Ha,et al. Secuencia
completa del BBrMV en
Filipinas)
• Se ha registrado hasta 40% de pérdidas en
Filipinas (Magnaye, 1994) y afectaciones de
interés en India y SriLanka.
• Detección serológica en Colombia e identificación
en Ecuador – atención a su posible diseminación
• Posible dificultad para el diagnostico –evidencias
de variabilidad no estudiada
BBTV
• Enfermedad viral más importante del cultivo y
factor limitante en algunos países…
Necesidad de confirmación o de
actualización de esta información
BBTV
• Enfermedad viral devastadora, considerada
uno de los problemas mas serios en los paises
donde se ha establecido.
• Ha provocado hasta 100% pérdidas. Efectos
muy serios en Fiji, Australia, Pakistán.
• Necesidad de confirmar registro en Antillas
Holandesas / manejo de informacion / analisis
de riesgos
P.L.Kumar
B. Lokossou
B. Lokossou
S. Nelson
R. Ha
S. Nelson
Resumiendo…..
Mejoramiento
genético
Calidad del material
de siembra
Efecto sobre el
rendimiento
Calidad de la fruta
Resumiento….
Además de las pérdidas directas en
la producción
•Restricciones cuarentenarias más severas
•Mayores requerimientos de infraestructura y
capacidad tecnológica para garantizar la
calidad del material de siembra
•Necesidad de sistemas de cuarentena más
modernos
Unos datos de interés….
EFECTO EN VITROPLANTAS Y PROCESO DE
MICROPROPAGACIÓN
Tasa de multiplicación/explante
Control Sano
Infectado-BBTV
6.01 ± 0.13
2.38 ± 0.14
Haq et al, 2010
Para manejarlas adecuadamente es necesario
• Utilización de material
de siembra sano
• Inspección frecuente y
selección negativa
• Limitación de
movimiento de
material vegetal
• Manejo de vectores
• Control de hospedantes
alternativos
• Mejoramiento varietal
• Preparación para el
diagnóstico temprano y
preciso. Análisis de
riesgos
• Sensibilización, capacitación y actividad
conjunta de autoridades, productores,
técnicos e investigadores no solo en cada
país, sino en la región.
ELIMINACIÓN DE PLANTAS
INFECTADAS MEDIANTE INYECCIÓN
DE GLIFOSATO-NELSON
Anuncio de cuarentena en
Hawai