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Esther L. Peralta Centro de Investigaciones Biotecnológicas del Ecuador (CIBE-ESPOL) Mayo, 2013 VIRUS EN MUSACEAS: Diagnóstico y manejo en ALC Resumen de la presentación • Breve introducción • Enfermedades virales presentes en ALC, características principales, síntomas, diagnóstico e importancia • Medidas generales de manejo • • • • Agentes infecciosos ultramicroscópicos Parásitos intracelulares estrictos Poseen un solo tipo de ácido nucleico (ADN o RNA) Se multiplican por copia de su material genético y se transmiten por diversas vías • Clasificación: Orden, Familia, Subfamilia, Género, Especie Diagnóstico viral • Microscopía electrónica • Sintomatología En campo • Detección inmunoquímica o serológica • Técnicas de detección de ácidos nucleicos En plantas indicadoras ELISA PCR (diferentes (diferentes variantes) variantes y métodos combinados) Virus de Musáceas Bromoviridae, Cucumovirus Nanoviridae, Babuvirus Potyviridae, Potyvirus Tymovirales, Betaflexaviridae, Caulimoviridae, Badnavirus Género no asignado CMV BSOLV BSGFV BSVNV BSMYV y otras BBrMV BanMMV BVX BBTV AbaBTV Virus de banano y plátano en ALC • En América Latina y el Caribe los más diseminados y conocidos son: – Mosaico (CMV) – Estriado (BSOLV, BSImV, BSMYV) • Hallazgos recientes o reportes de: - Mosaico suave (BanMMV) Virus X (BVX) Mosaico de las brácteas (BBrMV) ‘Bunchy top’ (BBTV) Algunas características de los virus de banano y plátano…. ‘Mosaico’ • Bromoviridae, Cucumovirus 29 nm 50 nm • ARN de simple cadena; genoma segmentado, tripartito; ARN subgenómico Algunas características…. ‘Mosaico’ • MUY amplia gama de hospederos. • No produce pérdidas graves, aunque algunas cepas o “strains” son capaces de producir síntomas más severos. • Cepas con diferencias serológicas • Transmisión por vectores (numerosas especies de áfidos) , material vegetativo y mecánicamente. • Infecciones mixtas pueden ocasionar síntomas mas severos www.aps.org A.P. James Algunas características….’Mosaico’ Algunas características….’Mosaico’ diagnóstico • Plantas indicadoras – Chenopodium amaranticolor – C. quinoa – Vigna unguiculata • RT-PCR, Multiplex PCR • ELISA-DAS Tipo de muestra T/P (%) Rango valores (UDO 405 nm) Donantes Micropropagación 91/9 (9,8) 0,3-0,56 Producción 42/15 (35%) 0,43-1,604 • Alta incidencia y distribución mundial • Gran cantidad de hospederos y vectores • Algunas cepas pueden ocasionar síntomas mas severos. Se ha registrado disminución de peso de racimos de hasta 45%. (Lockhart et al) Algunas características….. ‘Estriado’ • Caulimoviridae, Badanavirus 1 0 0 n m 27±3 x 119 ±8 nm • ADN bicatenario, circular • 4 especies reconocidas, pero 12 identificadas • Amplia distribución mundial • Transmisión mediante vectores (Planococcus citri, Saccharicoccus sacchari), material de propagación, semilla botánica Algunas características….’Estriado’ • Elevada variabilidad genómica y tres formas: – Episomal encapsulada – Episomal no encapsulada – Integrada Una de las interacciones planta-virus más complejas Integración genómica Influencia de diferentes tipos de estrés Variabilidad genómica y sintomatológica Variabilidad y coevolución … ‘Estriado’ Gayral, et al, 2010. J.Of Virology, 2010, 84(14): 7346-7359 Cladograma (Geering et al, 2005) Algunas características….’Estriado’ JW. Daniells JW. Daniells En Williams JW. Daniells Vainas de las hojas separadas del pseudotallos Musa AAA group cv. Red Dacca En Williams Necrosis interna en Williams Algunas características….’Estriado’ M.A. Dita De la Cueva C. Barreras M.A. Dita ‘Estriado”… diagnóstico Tipo de muestra T/P (%) Rango valores (UDO 405 nm) Donantes Micropropagación 47/12 (25) 0,35-0,57 Producción 20/5 (25%) 0,36-0,98 M CS 1 2 589 pb 3 4 5 6 7 M 7 8 9 10 11 12 13 14 15 M CN BSOLVF2/R2 ISEM, Multiplex PCR; RCT….Se continuan desarrollante variantes optimizadas de diagnóotico -Tiene efectos muy variables y puede ocasionar la muerte de la muerte de las plantas -Se registrado hasta el 50% pérdidas en el brote de Rakai (Uganda) –Afecta la longitud y calidad de frutos (5%). -Pérdidas en rango 6-100% (Daniells, 2001). -Complejidad para saneamiento y diagnostico M.A. Dita C. Barreras M.A. Dita Mosaico de las brácteas Detección de BBrMV mediante IC-RT-PCR Producto 324nt Muestras 1-6: hojas liofilizadas Muestras 2, C y D : IC (inmunocaptura) Primers: BBrMV 604nt: Bateson 1995; Rodoni 1997. BBrMV 324nt: Dassanayake, 2001 BBrMV 260nt, BBrMV 280nt: IskraCaruana, 2008 Algunos resultados… ‘Mosaico de las brácteas’ NESTED 200 Modificación: Uso de nested PCR (PCR anidada). Combinación de primers para incrementar la sensibilidad en la detección. 1. Amplificación de un fragmento de 408bp con primers externos. 2. Re- amplificación de un fragmento interno de 200bp. (Ha,et al. Secuencia completa del BBrMV en Filipinas) • Se ha registrado hasta 40% de pérdidas en Filipinas (Magnaye, 1994) y afectaciones de interés en India y SriLanka. • Detección serológica en Colombia e identificación en Ecuador – atención a su posible diseminación • Posible dificultad para el diagnostico –evidencias de variabilidad no estudiada BBTV • Enfermedad viral más importante del cultivo y factor limitante en algunos países… Necesidad de confirmación o de actualización de esta información BBTV • Enfermedad viral devastadora, considerada uno de los problemas mas serios en los paises donde se ha establecido. • Ha provocado hasta 100% pérdidas. Efectos muy serios en Fiji, Australia, Pakistán. • Necesidad de confirmar registro en Antillas Holandesas / manejo de informacion / analisis de riesgos P.L.Kumar B. Lokossou B. Lokossou S. Nelson R. Ha S. Nelson Resumiendo….. Mejoramiento genético Calidad del material de siembra Efecto sobre el rendimiento Calidad de la fruta Resumiento…. Además de las pérdidas directas en la producción •Restricciones cuarentenarias más severas •Mayores requerimientos de infraestructura y capacidad tecnológica para garantizar la calidad del material de siembra •Necesidad de sistemas de cuarentena más modernos Unos datos de interés…. EFECTO EN VITROPLANTAS Y PROCESO DE MICROPROPAGACIÓN Tasa de multiplicación/explante Control Sano Infectado-BBTV 6.01 ± 0.13 2.38 ± 0.14 Haq et al, 2010 Para manejarlas adecuadamente es necesario • Utilización de material de siembra sano • Inspección frecuente y selección negativa • Limitación de movimiento de material vegetal • Manejo de vectores • Control de hospedantes alternativos • Mejoramiento varietal • Preparación para el diagnóstico temprano y preciso. Análisis de riesgos • Sensibilización, capacitación y actividad conjunta de autoridades, productores, técnicos e investigadores no solo en cada país, sino en la región. ELIMINACIÓN DE PLANTAS INFECTADAS MEDIANTE INYECCIÓN DE GLIFOSATO-NELSON Anuncio de cuarentena en Hawai