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El genoma humano
Pedro García Barreno
Arbor CLXXI, 673 (Enero), 145-179 pp.
El redescubrimiento de las leyes de Mendel sobre la herencia en las semanas que abrieron el siglo XX incitó una búsqueda científica para comprender la naturaleza y el contenido de la información genética que ha
impulsado la biología durante los últimos cien años. El progreso científico conseguido se ha fraguado en cuatro fases que se corresponden, aproximadamente, con los cuatro cuartos del siglo XX. El primero estableció
las bases celulares de la herencia: los cromosomas. El segundo definió las
bases moleculares de la herencia: la doble hélice de ADN. El tercero descifró las bases informativas de la herencia con el descubrimiento de los
mecanismos biológicos mediante los que la célula lee la información codificada en los genes; luego, con la invención de la tecnología del ADN recombinante de clonajey de secuenciación, los científicos pudieron hacer lo
mismo. El último cuarto del siglo estuvo marcado por un lento pero constante esfuerzo para descifrar genes primero y, por fin, genomas enteros
que han propiciado el desarrollo de la genómica. El día 26 de junio de
2000 se hacía público un «borrador de trabajo» de la secuencia del genoma humano. Las revistas Nature (vol 409, n. "" 6822) y Science (vol 291, n. ""
5507) dedicaban números especiales a la publicación de la secuencia en el
mes de febrero de 2001 (el día 15 Nature y, al día siguiente, Science). «La
humanidad ha recibido un gran regalo. La conclusión de la secuencia del
genoma humano ofrece una herramienta poderosa para descifrar los secretos de nuestra herencia genética y para precisar nuestro lugar entre
otros participantes en la aventura de la vida».
Las bases celulares de la herencia
Pocas dudas pueden albergarse respecto a que los primeros humanos
ponderasen las semejanzas entre padres e hijos, y que tales observado-
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nés debieron aplicarlas, en su beneficio, a los organismos que iban domesticando. Sin embargo, la genética moderna, basada en la «teoría
genética de la herencia» comenzó con el trabajo de Gregor Johann Mendel. Mendel (Figura 1) no fue el primero en realizar experimentos de hibridación; pero si, quién interpretó
los resultados en términos de rasgos
individuales. Su trabajo seminal
-«Experimentos con Plantas Híbridas»-, llevado a cabo en el reducido
espacio del jardín de un monasterio
y dado a conocer a la Sociedad de
Historia Natural de Brünn en 1865,
fue el resultado del diseño -de
acuerdo con el método científico- de
numerosos experimentos, de la comparación de los resultados con modelos matemáticos y de la formulación
de una hipótesis para explicar las diferencias observadas. Aunque Mendel concibió un patrón matemático
preciso para la trasmisión de los rasFIGURA 1. Johann Gregor Mendel
gos hereditarios, desconoció el meca(1822-1884)
nismo biológico subyacente. Si bien
cualquier estudiante de nuestros días conoce la figura de Gregor Mendel,
su trabajo pasó desapercibido a la comunidad científica de antaño durante 35 años. En 1900, la monografía de Mendel, publicada en 1866, fue
«descubierta» por tres botánicos: Hugo de Vries, en Holanda; Cari Correns, en Alemania, y Eric von Tschermak-Seysenegg, en Austria.
«Experimentos con Plantas Híbridas», donde se describe cómo se
transmiten los rasgos hereditarios, representa, hoy, una de las referencias más influyentes e imperecederas de la historia de la ciencia. Los experimentos demostraron que los rasgos hereditarios se transmiten mediante pares de factores discretos; los miembros (aleles) de cada par (gen)
proceden uno del padre y otro de la madre. Los conceptos más importantes inferidos de los experimentos de Mendel son el principio de segregación -proceso por el que los aleles se separan para producir gametos haploïdes-, y el principio de combinación independiente de los diferentes
pares de aleles. Desde entonces, varios han sido los mojones que han jalonado el camino de la genómica; camino que, en su mayor parte, es el del
desarrollo de la biología o genética molecular.
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En 1877, Walter Flemming
(1843-1905) describió los cromosomas; estructuras que Wilhelm
Roux postuló, en 1883, como
transportadoras de los factores
hereditarios. En 1902, Theodore
Boveri y Walter S Sutton confirmaron que un gen es parte de un
cromosoma. La palabra gen -última sílaba del término «pangen»
utilizado por DarWin- fue utilizada por Wilhelm Johannsen (18571927) para referirse a los factores
mendelianos, aunque el concepto
de «gen» estaba implícito en la visualización de Mendel de un elemento físico o factor (Anlage) que
actúa como fundamento para el
desarrollo de un rasgo. La teoría
del gen como una unidad discreta
de un cromosoma fue desarrollada por Thomas H Morgan (Figura
FIGURA 2. Thomas Hunt Morgan (18662). Por su parte, William Bateson 1945). Premio Nobel de Fisiología o Medicina (PNFoM), en 1933, «por sus descubri(1861-1926) denominó genética
mientos sobre el papel jugado por los
(de la palabra griega «generar») a
cromosomas en la herencia».
la incipiente ciencia de la herencia; el Primer Congreso Internacional de Genética (Londres, 1899), se
anunció como «Conferencia Internacional sobre Hibridación».
Por su parte, cuando el trabajo de Mendel era «descubierto» en
1900, Archibald E Garrod (Figura 3) estudiaba enfermedades metabólicas congénitas humanas; una de ellas, la alcaptonuria, está causada
por el bloqueo del catabolismo del aminoácido fenilalanina. Garrod
propuso que la alcaptonuria está causada por un gen defectuoso que
produce una enzima anormal causante del bloqueo metabólico. El concepto de Garrod de «un gen mutado un bloqueo metabólico», fue ignorado -como había pasado con el trabajo de Mendel- durante 30 años.
En 1941, George W Beadle y Edward L Tatum (Figura 4) redescubrieron tal concepto; establecieron, utilizando un hongo como material de
experimentación, que cada mutación del organismo estudiado se acompañaba de la alteración una determinada vía metabólica. Dado que se
conocía que las vías metabólicas estaban gobernadas por enzimas, la
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conclusión de tales experimentos fue que cada
gen determinaba la estructura
de una enzima:
hipótesis
«un
gen -^ una enzima», luego replanteada ct)-mo
un «un gen -^ un
polipéptido». En
1944, en colaboración con Colin
M MacLeod y
Maclyn McCarFIGURA 3. Archibald Garrod (1857-1936). Regius Professor of
thy, Oswald T
Medicine en Oxford
Avery (Figura 5)
descubrió que el principio transformante, el gen, es ácido desoxirribonucleico (ADN).
La doble hélice de ADN
La estructura del ADN se definió en 1953; año en que dos jóvenes y
desconocidos científicos pusieron en marcha una revolución en las ciencias de la vida cuyas consecuencias persisten. James Watson y Francis
Crick determinaron la estructura del ADN: «Deseamos sugerir una estructura para el ADN. Esa estructura tiene hechos originales que son de
considerable interés biológico». Su observación ha tenido extraordinarias
consecuencias y representa uno de los logros capitales de la ciencia del siglo XX. La biotecnología, la medicina molecular, la terapia génica o el
Proyecto genoma humano, son fi:'uto de aquel trabajo (Figura 6).
Una molécula de ADN es una larguísima hebra de cuatro sübunidades diferentes denominadas bases: adenina, citosina, guanina y timina
(A, C, G y T). Esas bases están unidas entre sí a modo de las cuentas de
un collar; ello, mediante un mecanismo de engarce formado por moléculas de azúcar (desoxirribosa) y fosfato. El ADN en el núcleo celular se dispone en dos hebras o bandas paralelas enrolladas entre sí y que forman
una superestructura llamada doble hélice y a modo de una escalera de
caracol. Las bases de cada una de las bandas interaccionan entre sí formando pares de bases que semejan los escalones de la escalera; por su
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parte, las moléculas de azúcar
y los grupos fosfato de cada
banda forman los largueros de
esa escalera (Figura 6a).
Además, si una determinada
posición en una de las bandas
está ocupada por la base A, el
otro miembro del par, correspondiente a la otra banda, será
T, y viceversa. De manera similar, a C corresponderá G, y FIGURA 4. George Wells Beadle (1903-1989) y
Edward Lawrie Tatum (1909-1975)
viceversa. En otras palabras, A
compartieron
el PNFoM, en 1958, «por sus
es complementaria de T, y C de
descubrimiento de que los genes actúan
G. Esta complementariedad se
regulando acontecimientos químicos
denomina «regla de Chargaff»
definidos»
(Edwin Chargaff, nl905).
Consecuencia de esta complementariedad estricta entre bases en la
doble hélice de ADN es que, si se conoce la secuencia de bases de una de
las bandas, puede deducirse automáticamente la secuencia de bases de
la banda opuesta. En otras palabras, cada banda de ADN contiene toda
la información necesaria para recrear la otra banda. En la célebre publicación sobre la estructura del ADN, Watson y Crick escribieron: «No se
nos escapa que el apareamiento específico de bases propuesto sugiere,
inmediatamente, un posible mecanismo de copia para el material genético». Ello garantiza un mecanismo de copia fiable cuando la célula se divide; y para formar un organismo complejo, que contiene miles y miles de
millones de células formadas a partir de una célula fecundada, se requieren numerosos ciclos de división celular.
En términos generales, el mecanismo de replicación del ADN es sencillo; primero, las dos bandas complementarias de ADN se desenrollan y se
separan la una de la otra. Luego, se copian dos nuevas hebras a partir de
cada una de las dos bandas por separado y usando la regla A:T/C:G. Dado
que cada banda independiente de ADN dirige la síntesis de su complementaria, el resultado de la replicación es la síntesis de dos moléculas de doble
banda de ADN idénticas. La pieza principal de la máquina copiadora, responsable de la replicación del ADN, es una molécula denominada ADN polimerasa.
¿Cómo accede la célula a la información génica almacenada en su
ADN?. El programa genético completo de un organismo se denomina genoma. El genoma puede imaginarse como una secuencia de pares de bases (pb = A:T, C:G, G:C o T:A); de 100 millones a 3000 millones de pares
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según el organismo. Si una base
se representa por una letra impresa en páginas similares a las
que acogen el presente artículo, el
genoma humano corresponde a
una enciclopedia de un millón de
páginas. El ADN en el núcleo de
una célula en reposo (interfase)
forma, enrollado sobre un eje de
proteínas (histonas), una larga
hebra continua de cromatina.
Cuando se inicia la división celular -mitosis-, la cromatina se
condensa y dispone en estructuras discretas o cromosomas. El
número de cromosomas varía entre las diferentes especies, desde
un par en una lombriz {Ascaris
lumhricoides) hasta más de cien
en algunas mariposas y crustáceos; la especie humana tiene 23
pares
de cromosomas.
FIGURA5. Oswald
Hay varias clases de ADN en
Theodore Avery (1877-1955)
el genoma humano. En general,
las secuencias codificantes representan menos del 5% del genoma; son
secuencias representadas una sola vez por genoma haploide y ubicadas
en una cromatina laxamente empaquetada denominada eucromatina.
Por su parte, secuencias iterativas -denominadas ADN basura- representan el 60% del genoma y se localizan en una cromatina densamente
condensada denominada heterocromatina.
Un gen típico puede subdividirse en dos componentes independientes
pero funcionalmente interrelacionados; uno de ellos, región codificante,
contiene la información necesaria para sintetizar una proteína que ejecutará la función génica correspondiente. Sin embargo, la mayoría de los genes contienen, en su región codificante, cortas secuencias que se expresan
(exones que codifican, aproximadamente, 50 codones) interrumpidas por
otras largas secuencias (10 kb) silentes (intrones, «basura»): genes discontinuos. Ello significa que los genes transcriben exones e intrones en un
pre-ARN mensajero (pre-mARN), que será procesado -en términos generales excluyendo los intrones- en un ARN mensajero (mARN) que traducirá, en la maquinaria ribosómica cito-plasmática, la correspondiente pro-
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teína. Richard J Roberts y Phillip
A Sharp (Figura 7) recibieron el
PNFoM de 1993 «por su descubrimiento de genes discontinuos».
Tanto la transcripción como el
procesamiento del transcripto
(pre-mARN) son tareas flexibles
que permiten lecturas y procesamientos alternativos.
La otra parte del gen, denominada región reguladora o de control -que no es codiñcante- es un
interruptor de «encendido-apagado» que determina si la región codificante ha de expresarse o no.
Junto a genes codificantes de proteínas, existen otros muchos geFIGURA 6. James Dewy Watson (nl928) y
nes que transcriben ARNs no coFrancis Harry Compton Crick (nl916)
dificantes (ncARNs) como pro- compartieron con Maurice Hugh Frederick
ducto final. Tal ncARN incluye: Wilkins (nl916) el PNFoM de 1962 «por sus
descubrimientos sobre la estructura
ARNs de transferencia que, adapmolecular de los ácidos nucleicos y su
tándose a los tripletos del ARN
importancia en la transferencia de
mensajero, colocan uno tras otro
información en la materia viva».
los aminoácidos que construyen
una cadena peptídica; ARN ribosómicos (rARNs) involucrados en la estructura de los ribosomas; pequeños ARNs nucleolares requeridos en el
procesamiento de los rARNs, y pequeños ARNs nucleares que son componentes críticos de los espliceosomas -macrocomplejos ribonucleoproteicos- encargados de procesar en el núcleo los pre-mARNS en mARNs
que traducen proteínas. Existen otros ARNs sin función bien conocida.
Una primera característica del genoma es la existencia de regiones ricas y pobres en el dinucleotido GC; regiones que pudieran tener funciones biológicas diferentes: densidad génica, composición de secuencias iterativas o correspondencia con el patrón de bandas cromosómicas y con la
tasa de recombinación. Otro hecho distintivo es la distribución de las
llamadas islas CpG; dinucleotido singular debido a su escasez en el genoma humano. Por su parte, se desconoce el papel que el ADN iterativo
juega en la célula, aunque representa una extraordinaria fuente de información, todavía de difícil acceso, sobre los procesos biológicos. Las repeticiones constituyen un rico registro paleontológico en el que se esconden claves evolutivas. Como marcadores pasivos, proporcionan apuntes
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para estudiar procesos de mutación y selección; es posible reconocer cohortes de
iteraciones nacidas al unísono y seguir
sus destinos en diferentes regiones del
genoma o en especies diferentes. Como
marcadores o agentes activos las iteraciones h a n reestructurado el genoma al
provocar reordenamientos ectópicos, crear por entero nuevos genes y remodelar
genes existentes; y también arrojan luz
sobre la estructura y dinámica cromosómica, y proporcionan herramientas útiles
para estudios de genética médica y de poblaciones.
El ADN iterativo puede concentrarse
en aglomerados {cluster) - s a t é l i t e s - o
dispersarse -transposones-. Conglomerados de secuencias repetidas o iterativas representan el 10-15% del genoma y
comprenden despliegues de cortas repeticiones dispuestas en u n orden cabezacola. Tales repeticiones en tándem, sin
relación entre ellas, se denominan, colectivamente, satélites de ADN y cuyas longitudes varían desde unos pocos nucleotides hasta varios millones. Su localización
también es muy heterogénea; algunas repeticiones se encuentran, sólo, en las heterocromatinas pericentromérica o teFIGURA 6a. La figura es un mero
lomérica, y algunas solo se encuentran
diagrama. Las dos bandas enrolla- en u n determinado cromosoma. Las sedas representan las dos cadenas
cuencias simples iterativas {simple seazúcar-fosfato y las curvas
horizontales los pares de bases que quence repeats - SSRs) son estructuras
repetidas muy frecuentes en el genoma
estabilizan la estructura. La
línea vertical señala el eje de la
humano; son repeticiones en tándem de
doble hélice
una unidad particular. Las SSRs de u n a
(Nature, 25 abril, 1953).
unidad repetida corta (n = 1-13 bases) se
denominan microsatélites; aquellas con
(n
= 14-500 bases) se denominan minisatéunidades repetidas mayores
,
aproximadamente,
el 3% del genoma, relites. Las SSRs comprenden
kb
y
siendo
el
componente
principal repetigistrándose u n a SSR cada 2
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dones dinucleotídicas. Las SSRs desempeñan un importante papel en estudios de genética humana por mostrar un extraordinario grado de polimorfismo de longitud en las poblaciones humanas.
Otra clase de secuencias iterativas de pares de bases incluye familias
de secuencias dispersas por todo el genoma, a veces incluso dentro de los
genes y que representan el 45% del ADN total. Estas secuencias tienen
las propiedades de los elementos transponibles. La mayor parte de la
genética clásica se centró en la localización de los genes en los cromosomas; cada gen o más precisamente cada alelo, ocupa un lugar fijo (locus)
en un determinado cromosoma, con lo que la estructura de un determinado mapa genético es prácticamente invariable. Sin embargo, a comienzos de los 1940s los investigadores encontraron que algunas secuencias de ADN pueden cambiar de posición. Tales secuencias móviles
se denominan elementos génicos transponibles o, simplemente, transposones. Los transposones fueron descubiertos por Barbara McClintock a
raíz de sus estudios sobre la inestabilidad genética del maíz.
Los transposones son elementos móviles que pueden mudarse, por
ellos mismos, desde una posición a otra en una molécula de ADN. La mayoría de las secuencias repetidas en el genoma humano derivan de elementos transponibles. El 45% del genoma humano pertenece a esta clase de secuencias; la mayoría del remanente del genoma, constituido por
secuencias únicas de ADN, debe haber derivado, también, de transposones ancestrales aunque, en la actualidad, irreconocibles; en los mamíferos, la casi totalidad de los transposones pertenecen a cuatro tipos. Tres
de ellos se mudan de una localización a otra a través de un ARN intermediario utilizando su autocapacidad de transcriptasa inversa (retrotransposones o elementos móviles homólogos a la forma integrada de retrovirus): SINEs (secuencias cortas dispersas, short interspersed
sequences), LINEs (secuencias largas dispersa, long interspersed sequences) y LTRs (retrotransposones
flanqueados por largas secuencias repetidas terminales homologas a las que flanquean los retrovirus, long terminal repeats),
El cuarto tipo lo representan
varias familias de transposones
ADN, similares a los transposones bacterianos.
Sobre la base de experimentos iniciados a finales de los FIGURA 7. Richard J Roberts (nl943) y Phillip
A Sharp (nl944).
1950s, Howard Temin propuso.
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en 1964, la hipótesis del provirus de ADN, que establecía que
el genoma de los virus tumorales AKN se copiaba en ADN en
la célula infectada; una propuesta que iba directamente en
contra del dogma central de la
biología umversalmente aceptado. En 1970, Temin y David
Baltimore (Figura 8), indepenFIGURA 8. Martin Howard Temin (1934-1994)
dientemente, descubrieron una
y David Baltimore (nl938), descubridores de la enzima viral -transcriptasa intranscriptasa inversa, compartieron con
versa- que sintetiza ADN a
Renato Dilbecco (nl914) el PNFoM de 1975
partir de un molde ARN. Te«por sus descubrimientos sobre la interacción
min concluyó su publicación de
entre virus tumorales y el material
genético celular».
1970 con la aseveración de que
sus resultados «constituyen
una prueba relevante de que la hipótesis del provirus de ADN es correcta, y de que los virus tumorales ARN tienen un genoma ADN cuando
están en las células y un genoma ARN cuando están como viriones (partículas virales libres). Estos resultados tendrán implicaciones importantes
en las teorías de carcinogenesis viral y, posiblemente, en las teorías de
transferencia de información en otros sistemas biológicos». Como predijo
Temin, el descubrimiento de la síntesis de ADN dirigida por ARN -transcripción inversa- condujo avances importantes en la comprensión del cáncer, de los retrovirus humanos y de los reordenamientos génicos. La transcriptasa inversa ha sido una herramienta crítica en el clonaje de ADN y,
con ello, ha impactado en todas las áreas de la biología celular y molecular contemporáneas. La transcriptasa inversa deshancó el que se había
denominado, hasta entonces, «dogma central de la biología molecular»: la
unidireccionalidad del flujo de información. La ruta: [ADN -^ ARN -^ proteína], quedó establecida como: [ADN <-» ARN -^ proteína].
Si la replicación del ADN garantiza la continuidad de la información
génica de padres a hijos, la transcripción regula la expresión de esa información en cada célula; la transcripción dicta lo que cada célula es. La ARN
polimerasa transcribe porciones determinadas -genes- de una de las bandas de la doble hélice de ADN en un polímero lineal similar de bases, el
ácido ribonucleico (ARN, que contiene el azúcar ribosa en vez de desoxirribosa, y las bases A, C, G, y U -uridina- en vez de T). El PNFolVE de 1959
recayó en Severo Ochoa y Arthur Kornberg por su descubrimiento de los
mecanismos de biosíntesis del ARN y del ADN (Figura 9).
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La. transcripción sigue un
principio de complementariedad
similar al indicado para la replicación del ADN. En el caso de la
transcripción, la complementariedad es similar a excepción de
que a una A en la banda de lectura del ADN le corresponderá
una U en el ARN complementario; pero a una T en el ADN coFIGURA 9. Severo Ochoa (1905-1993) y Artrresponderá una A en el ARN.
hur Kornberg (nl918) compartieron el PNEsto es, a la secuencia de bases
FoM, en 1959, «por su descubrimiento de los
ATCG en el ADN le corresponde
mecanismos involucrados en la síntesis
la secuencia de bases UAGC en biológica del ácido ribonucleico y del ácido deel ARN. La banda de ADN que
soxirribonucleico».
es transcrita se denomina banda
codificante. Una vez que ha sido completada la síntesis del ARN complementario a un gen determinado, se libera como una molécula lineal sencilla: pre ARN mensajero. Este ARN será procesado y convertido en ARN
mensajero que dirigirá la síntesis de la proteína codificada en el correspondiente gen; ello, en un proceso denominado traducción.
La traducción refleja el hecho de que un lenguaje molecular se traduce a otro. El primer lenguaje, el del ADN y ARN, se escribe mediante el
orden de las cuatro bases y obedece, esencialmente, a las mismas reglas
de complementariedad; ADN y ARN son dialectos de un mismo lenguaje.
El lenguaje de proteína es muy diferente al del ADN/ARN y requiere una
traducción compleja que convierte la secuencia de bases, en los ácidos nucleicos, en una secuencia de aminoácidos, en las proteínas. Los aminoácidos son tompletamente diferentes de las bases. Frente a las cuatro bases, veinte son los aminoácidos que forman las proteínas. Dada la gran
diferencia estructural entre aminoácidos y bases no debe extrañar que se
requiera una compleja maquinaria de traducción para convertir la secuencia de bases de un gen, en otra gramaticalmente correcta de aminoácidos en la correspondiente proteína.
¿Cómo una secuencia de solo cuatro bases en un gen dirige la síntesis
de una proteína formada por una secuencia de 20 aminoácidos? La solución a este problema de codificación es que cada aminoácido está especificado por una combinación de tres bases contiguas. El código que relaciona la secuencia de bases en el ARN con la secuencia de aminoácidos
en una proteína se denomina código genético. El código genético asigna
cada uno de los 20 aminoácidos a un determinado grupo contiguo de tres
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10. Robert W HoUey (1922-1993), Har Gobind Khorana (nl922) y
Marshall W Nirenberg (nl927) compartieron el PNFoM, en 1968.
FIGURA
bases, tripletes o codones en el ARN. Existen 64 combinaciones posibles
de cuatro bases agrupadas en tripletes (4^). La correspondencia se asegura, primero porque algunos aminoácidos están especificados por más
de un triple (degeneración o redundancia del código) y, segundo, porque
algunos triples no codifican aminoácidos sino que se utilizan como señales de terminación del proceso de traducción. El PNFoM de 1968 se concedió a Robert W Holley, Har G Khorana y Marshall Niremberg «por su
interpretación del código genético y su función en la síntesis de proteínas» (Figura 10).
Finalmente, debe apuntarse un hecho importante respecto a las diferencias estructurales entre el ADN y las proteínas. Mientras que la secuencia de bases apenas influye en la estructura en doble hélice del ADN,
la secuencia de aminoácidos tiene enormes consecuencias sobre la estructura de la proteína. Siguiendo el dictado de la secuencia lineal de
aminoácidos (estructura primaria de la proteína) cada proteína se pliega
(estructura secundaria) y adopta, finalmente, una estructura tridimensional (estructura terciaria), compleja y distintiva, y esta gran diversidad
estructural permite a las diferentes proteínas desarrollar funciones celulares específicas. Ello significa que mientras que posibles cambios de una
base por otra (polimorfismo o mutación) no alteran la estabilidad del
ADN, la sustitución de un aminoácido por otro puede tener graves consecuencias: enfermedad molecular.
Una mutación es una alteración en la secuencia de bases de un gen. En
general, el cambio de base sucede en la región codificante del gen, aunque
existen mutaciones que alteran la región reguladora; así, algunas formas
de cáncer resultan de mutaciones reguladoras que activan genes involucrados en promover crecimiento celular de manera incontrolada. Las mutaciones codificantes alteran la secuencia de bases en un gen de varias for-
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mas; el tipo más simple de mutación consiste en el cambio de una base por
otra, mutación puntual que puede tener graves repercusiones en la estructura tridimensional funcional del producto de su expresión. Otras mutaciones afectan mayor número de bases tanto por delección como por inserción. Las mutaciones de uno u otro tipo pueden ser espontáneas y
consecuencia de errores durante la replicación del ADN, o inducidas por la
acción de diversos mecanismos mutagénicos. Los agentes mutágenos pueden ser físicos como, por ejemplo, la radiación ultravioleta o químicos como
diferentes sustancias mutagénicas; en ambos casos, los mutágenos reaccionan con las bases del ADN cambiando una base en otra, o reducen la fidelidad de la replicación del ADN. Una característica común a todos los
agentes mutagénicos es que son altamente carcinogénicos.
Pero no todas las mutaciones son deletéreas. El código genético es universal para todas las formas de vida conocidas. Una de las principales implicaciones de esta universalidad es que toda la vida existente en la Tierra deriva de una común forma de vida ancestral, en la que se desarrolló
el código genético que hoy utilizan
todos sus descendientes. Esta evidencia incontrovertible de un ancestro común de todas las formas
de vida confirma una de las predicciones más destacadas de
Charles R. Darwin (Figura 11). En
Sobre el Origen de las Especies por
Medio de la Selección Natural,
Darwin concluyó que «.. probablemente todos los seres orgánicos
que han vivido sobre la tierra descienden de alguna forma primordial en la que se originó la vida».
Dado que, en tiempos de Darwin,
el conocimiento de las bases genéticas o moleculares de la vida eran
escasos, tal hipótesis intuitiva representa uno de los logros, en biología, de mayor alcance intelecFIGURA 11. Charles Robert Darwin
tual. La evolución es una de las
(1809-1882).
ideas unificadoras en biología.
Para explicar esa evolución a partir de un ancestro común, Darwin invocó un mecanismo que denominó selección natural. De acuerdo con ello,
no todos los organismos tienen las mismas posibilidades de sobrevivir y
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reproducirse. Los mejor adaptados tendrán mayor descendencia y sus características se perpetuarán y expandirán en la población. Sin embargo,
la teoría de Darwin no explica satisfactoriamente la herencia. Aunque
Darwin y Mendel fueron contemporáneos no tuvieron conocimiento el
uno del otro; fue necesario que los seguidores de Darwin incorporaran los
descubrimientos de Mendel a la teoría de la selección natural. La teoría
sintética de la evolución explica la transformación de una especie mediante selección natural (especiación). La evolución es un proceso de
cambio; al nivel molecular este proceso implica la inserción, delección o
sustitución de bases (mutaciones) en el ADN. Si esas mutaciones ofrecen
alguna ventaja se irán acumulando hasta dar lugar a una serie de caracteres bastante diferentes a los originales que, a lo largo de millones de
años, irán desembocando en especies diferentes. En ello, los transposones
han jugado un papel decisivo.
ADN recombinante
Establecidas las bases de la biología o genética molecular, hubo que esperar algunos años hasta que se dispusieron de herramientas eficaces para
manipular la estructura genética; ello, aunque las técnicas de la genética
clásica se habían demostrado eficaces en el análisis de los genes y de los
cromosomas. El avance más significativo fue el desarrollo, en los 1970s, del
ADN recombinante; una técnica mediante la que un fragmento' de ADN
puede ser seccionado y separado de un genoma donante, e insertado, trasplantado o recombinado en otro genoma receptor. Werner Arber, Paul Berg,
Daniel Nathans y Hamilton Smith fueron los protagonistas (Figura 12).
FIGURA 12. Werner Arber (nl929), Daniel Nathans (nl928) y Hamilton O Smith
(nl931) compartieron el PNFoM, en 1978, «por el descubrimiento de las enzimas de restricción y su aplicación a problemas de genética molecular).
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El genoma humano
159
El primer paso en el desarrollo de la tecnología del ADN recombinante fue la caracterización de las endonucleasas de restricción: enzimas que
seccionan el ADN en secuencias específicas de bases. Tales enzimas se
identificaron en bacterias, donde proporcionan un mecanismo de defensa
contra la entrada de ADN extraño (por ejemplo, virus infectivos o bacteriófagos) en la bacteria. Las bacterias disponen de una amplia variedad
de endonucleasas de restricción que escinden el ADN en más de cien sitios distintos de reconocimiento. Lugares que constan de secuencias específicas de cuatro a ocho pares de bases dispuestas simétricamente; característica por la que tales secuencias se denominan palíndromos.
Palíndromo -proviene de la griega «recurrente»- define una palabra o expresión que resulta lo mismo leída en un sentido que en otro, como «anilina»; también un número capicúa es un palíndromo. En genética se refiere a un fragmento de ADN en el que una secuencia de pares de bases
se lee de igual manera en uno u otro sentido a partir de un eje de simetría. Tales secuencias representan el sustrato de las enzimas de restricción que rompen la molécula en el entorno del eje de simetría de las
secuencias y en las dos cadenas.
Como las endonucleasas de restricción seccionan el ADN sobre secuencias específicas, tales enzimas pueden utilizarse para romper una
molécula de ADN en trozos distintivos. Por ejemplo, una determinada
enzima de restricción (EcoBI, aislada de la bacteria Escherichia coli, un
comensal normal de nuestro intestino grueso) reconoce una secuencia característica de seis pares de bases (GAATTC). Esta secuencia se repite
cinco veces en el genoma de un cierto virus bacteriano (bacteriófago X,
cuya célula diana es E. coli); de este modo, la enzima de restricción rompe el ADN del bacteriófago en seis fragmentos de diferente tamaño. Estos fragmentos pueden separarse según su tamaño utilizando una técnica denominada electroforesis en gel, que separa diferentes moléculas
sobre la base de su velocidad de migración en un campo eléctrico y en el
que el gel actúa como un tamiz retardando, selectivamente, el movimiento de las moléculas de mayor tamaño. La localización de los sitios de
reconocimiento de múltiples y diferentes endonucleasas de restricción se
utiliza para generar detallados mapas de restricción de moléculas de
ADN, tal como genomas virales. Tras la separación electroforética de los
distintos trozos de ADN de restricción, estos pueden recogerse para estudios posteriores, en especial la determinación de las secuencias de bases (secuenciación del ADN) que forman los genomas virales.
Sin embargo, la digestión por endonucleasas de restricción no proporciona la suficiente resolución para analizar moléculas de ADN de mayor
tamaño, tal como el genoma humano. Por ejemplo, la enzima SeoRI seña-
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lada rompe la molécula de ADN con u n a frecuencia estadística determinada (1/4^ pares de bases). Ello significa que u n a molécula de ADN algo
mayor que el genoma del bacteriófago señalado será rota en diez fragmentos; segmentos de ADN que podrán ser separados e identificados satisfactoriamente con la técnica de electroforesis en gel. Pero la misma enzima originaría más de 500,000 fragmentos al actuar sobre u n a molécula
de ADN humano; tal cantidad de fragmentos es imposible de separar con
nitidez mediante la técnica apuntada, que proporcionaría u n a mancha
continua mas que un patrón discreto de fragmentos de ADN reconocibles.
En este caso, la obtención de fragmentos puros de ADN se consigue mediante la técnica del clonaje molecular.
La estrategia básica en el clonaje molecular es insertar u n fragmento
de ADN de interés, en u n a molécula ADN receptora (vector) capaz de replicarse de manera independiente en u n a célula hospedadora. El resultado será u n a molécula recombinante (ADN recombinante) que contendrá el ADN insertado junto a las secuencias del vector. Ello permite
obtener grandes cantidades del ADN donante insertado. Por ejemplo,
puede clonarse un determinado fragmento de ADN humano en u n vector
bacteriófago X. Tal molécula recombinante puede introducirse en la bacteria Escherichia coli, hospedador habitual del bacteriófago X, donde se
replica eficazmente originando u n a progenie de millones de fagos que
contienen el inserto de ADN humano. Ese ADN recombinante puede digerirse con la misma endonucleasa de restricción utilizada para obtener
el inserto inicial y recuperar los millones de copias producidas de ese inserto (ADN donante, utilizando terminología de trasplante). Ello proporciona la cantidad suficiente del fragmento de ADN humano puro para su
posterior análisis y manipulación. También pueden clonarse secuencias
ARN. Aquí, el primer paso es sintetizar u n a copia ADN a partir del molde original ARN; ello, utilizando transcriptasa inversa. El producto, denominado ADN complementario (ADNc, porque es complementario al
ARN utilizado como molde), puede ser insertado en u n vector ADN siguiendo el esquema descrito en el párrafo anterior. Dada la complejidad
de los genes eucarióticos, la posibilidad de clonar ADNc h a sido crítica
para comprender la estructura y función de tales genes.
Proyecto Genoma Humano
Su objetivo es, u n a vez conseguida la secuencia completa del ADN,
identificar todos los genes y su función. Ello h a de representar un broche
de oro al «conócete a ti mismo» y la llave de la Medicina Molecular. El
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El genoma humano
161
FIGURA
13. Robert Sinsheimer y Charles DeLisi.
Proyecto genoma humano tiene su origen en las iniciativas de Robert L.
Sinsheimer y de Charles DeLisi (Figura 13), a mediados de los 1980s.
DeLisi -físico y jefe de biomatemáticas de los Institutos Nacionales de
Salud de EE.UU- fue el director de la Oficina de Salud y Medio Ambiente del Departamento de Energía, en Washington DC. El departamento -sus raíces alcanzan el Proyecto Manhattan y había financiado
investigación sobre los efectos biológicos de la radicación, en especial los
referentes a mutaciones génicas- mantenía una División de Ciencias de
la Vida en el Laboratorio Nacional de Los Álamos, Nuevo Méjico; aquí,
en 1983, estableció una base de datos -«Genbank»- para la informatización de las secuencias de ADN que iban analizándose. DeLisi estaba interesado en aprovechar esos datos para comprender las bases genéticas
de las enfermedades humanas. Sinsheimer -biólogo molecular- había
declarado, en 1969, que la biología molecular abría nuevas e ilimitadas
posibilidades para la humanidad. «Es la primera vez -decía- que una
criatura viva conoce su origen y puede diseñar su futuro». En 1977 fue
nombrado rector del campus de Santa Cruz de la Universidad de California y, en 1984, estableció un proyecto, en dicha universidad, encaminado a determinar los detalles del genoma humano.
En junio de 1985 en Santa Cruz (California) y en marzo de 1986 en
Santa Fe (Nuevo Méjico), hubo sendas reuniones, independientes, lideradas por Sinsheimer y por DeLisi, respectivamente, para discutir los aspectos técnicos de un proyecto para descifrar el genoma humano. Días
después de la reunión convocada por DeLisi, Renato Dulbecco, presiden-
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162
te del Instituto Salk (California), declaró (Editorial, Science 7 marzo
1986) que la ciencia había alcanzado u n punto crucial en la investigación
del cáncer y que cualquier avance en tal sentido pasaba por la secuenciación completa del ADN del genoma humano. La relación entre el mapeo génico humano y la biología del cáncer había sido apuntada por M Siniscalco en 1979. Dulbecco, que no había participado en las conferencias
de Santa Cruz y Santa Fe, reclamó que los EE.UU. deberían afrontar la
secuencia del genoma humano como u n a empresa comparable, en esfuerzo y en espíritu, al programa que había conducido a la conquista del
espacio.
Los acontecimientos se sucedieron a u n a velocidad vertiginosa. En junio de 1986, Walter Gilbert y Paul Berg copresidieron u n a sesión sobre
el genoma humano en u n simposio organizado en Cold Spring Harbor sobre la Biología Molecular del Homo sapiens; uno de los participantes, Gilbert, denominó la secuencia completa del genoma humano el «santo
grial» de la biología. A esta reunión siguieron otras importantes: en septiembre de 1986, u n a del Consejo Nacional de Investigación de los
EE.UU. {National Research Council, NRC), que nominó u n Comité para
el Mapeo y la Secuenciación del Genoma Humano {Committee on Mapping and Sequencing the Human Genome, CMSHM); u n a segunda, convocada por la Fundación «Instituto de Medicina Howard Hughes», tuvo
lugar en agosto de 1987, y, en octubre de ese mismo año, los Institutos
Nacionales de Salud de EE.UU. se planteaban su papel en el futuro Proyecto. Tras varias reuniones a lo largo del año 1987, el CMSHN-NCR
emitió, en febrero de 1988, un informe: «Mapeo y Secuenciación del Genoma Humano» {Mapping and Sequencing the Human Genome), de cuyo
«Executive summary» puede entresacarse:
«Los humanos llevan tiempo intrigados por las fuerzas que dan forma a
ellos y a otros organismos. ¿Qué código dicta el color de los ojos, del pelo o
la forma de una flor?. Hace más de 100 años Gregor Mendel descubrió que
tales rasgos hereditarios están controlados por unidades celulares que,
posteriormente, se conocieron como genes. En años recientes, la comprensión de esos genes ha crecido considerablemente tras el conocimiento de la
biología molecular del ADN, la molécula gigante de la que están formados
los genes. Ahora es posible obtener la descripción última de los genes y del
ADN; ello, desde el reciente desarrollo de las técnicas que permiten mapear (localizar) los genes en el ADN de cualquier organismo y luego secuenciar (ordenar) cada una de las unidades de ADN, conocidas como nucleotidos, que constituyen los genes.
Cuantos más de nuestros genes estén mapeados y sus ADNs secuenciados,
dispondremos de una fuente cada vez más útil - una base de datos esen-
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163
cial que facilitará la investigación en bioquímica, fisiología, biología celular y medicina. Esta base de datos tendrá su mayor impacto sobre el cuidado de la salud y la prevención de la enfermedad así como sobre nuestro
conocimiento de las células y los organismos. La concepción de organizar
un gran proyecto para mapear y secuenciar el ADN en los genes y en las
regiones intergénicas que los conectan (el ADN completo o genoma humano) recibe cada vez más atención en el mundo. Varios países han expresado su interés en apoyar tal proyecto. Para evaluar lo que los Estados Unidos de Norte América deberían hacer en esta área, el NRC estableció el
CMSHM, cuyas conclusiones se recogen en este documento, y en donde el
Comité explora cómo, cuando y por qué debemos mapear y secuenciar el
ADN en el genoma humano. Para llevar a cabo esos objetivos, el comité alcanzó las siguientes conclusiones:
• Conseguir un mapa, una secuencia y un conocimiento cada vez mayores
del genoma himiano exige una acción especial que deberá organizarse y
establecerse para ese propósito. Tal esfuerzo especial en las próximas
dos décadas potenciará significativamente el progreso en biología y medicina humanas.
• Los problemas técnicos asociados con el mapeo y la secuenciación de los
genomas humano y de otros organismos son lo suficientemente grandes
para que un programa científico como este requiera un esfuerzo diversificado y sostenido para mejorar nuestras posibilidades para analizar
las complejas moléculas de ADN. Aunque las capacidades necesarias no
existen todavía, la manera en que deben desarrollarse parece evidente.
Las tecnologías avanzadas requeridas emergerán de un esfuerzo común
que recalque proyectos piloto y desarrollo tecnológico. Una vez establecidas, estas tecnologías no solo harán factible completar el análisis del
genoma humano y otros, sino que también harán contribuciones importantes a muchas otras áreas de la biología básica y la biotecnología.
• Los objetivos iniciales más importantes se esforzarán en adquirir un
mapa de alta resolución de ligamiento génico del genoma humano, una
colección de clones ordenados de ADN y una serie de mapas físicos complementarios de resolución progresivamente creciente. El objetivo último será obtener la secuencia nucleotídica completa del genoma humano, comenzando a partir del material de la colección de clones
ordenados de ADN. La consecución de este objetivo requerirá mayores
(pero alcanzables) avances en el manejo y en la tecnología de secuenciación del ADN.
• Un aproche genético comparativo es esencial para interpretar la información en el genoma humano. Más aún, deberán llevarse a cabo en paralelo estudios intensivos de aquellos organismos que proporcionen modelos particularmente útiles para comprender la estructura, función y
evolución génica humana.
• El esfuerzo para mapear y secuenciar comenzará como una serie de programas encaminados a mejorar el desarrollo tecnológico, competitivos y
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revisados por pares. Los fondos deben incluir tanto a3aidas individuales
como a grupos de mediano tamaño interdisciplinares de científicos e ingenieros.
• El proyecto genoma humano deberá diferir de la marcha de la investigación actual en cuanto que los subproyectos deben incrementar en un
factor de 5 a 10 sus eficacias de mapeo, secuenciación, análisis o interpretación de la información.
• Los progresos hacia los objetivos antes expuestos requerirán el establecimiento de instalaciones centralizadas bien dotadas, incluyendo un
banco central para losfi:-agmentosde ADN clonados generados en el esfuerzo de mapeo y secuenciación y un centro de datos para la colección
computarizada y la distribución de grandes cantidades de información
de las secuencias de ADN. El comité sugiere que los grupos que soporten tales servicios sean seleccionados mediante concurso abierto.
Sobre la base de esas conclusiones y en vista de la importancia y magnitud de la tarea, el comité recomienda unos fondos adicionales de $200 millones anuales, que no deberán retrotraerse del presupuesto federal actual
para investigación en ciencias biomédicas. Por su parte, la mayoría del comité recomienda que una agencia federal única deberá liderar el proyecto. Esta agencia deberá recibir y administrar los fondos para el proyecto y
deberá ser responsable de las operaciones del banco central y del centro de
datos, así como administrar el sistema de revisión por pares utilizado para
determinar los beneficiarios de los fondos. Deberá trabajar en estrecha colaboración con un Consejo Asesor Científico {Scientific Advisory Board,
SAB) para desarrollar e implementar una alto estándar en la revisión por
pares. El SAB, compuesto en principio por expertos científicos de renombre en campos relevantes, deberá asesorar no solo en cuanto a la revisión
por pares sino sobre el control de calidad, cooperación internacional, coordinación de esfuerzos entre los laboratorios y las operaciones del banco
central y los centros de datos...».
El «Executive summary» concluye: «El Comité cree firmemente que
debe emprenderse un proyecto para mapear y secuenciar el genoma humano. Son evidentes las implicaciones éticas, sociales y legales de tal esfuerzo, pero está convencido de que pueden afrontarse adecuadamente.
El proyecto incrementaría enormemente nuestro conocimiento y comprensión de la biología h u m a n a y permitiría u n rápido progreso para incidir en el diagnóstico y, finalmente, en el control de muchas enfermedades h u m a n a s . Puede vislumbrarse que el proyecto conduciría, también,
al desarrollo de nuevas tecnologías y a la producción de mapas y de secuencias de diversos organismos, lo que proporcionaría información relevante de la mayor importancia para mejorar nuestro conocimiento de
toda la Biología».
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En octubre de 1988 se creaba la Oficina para la Investigación del Genoma Humano de los Institutos Nacionales de Salud, bajo la presidencia
de J a m e s Watson y con el mandato de llevar a cabo el Proyecto Genoma
Humano. Watson, Mr DNA, movilizó vocaciones y recursos en EE.UU.,
Europa y Japón logrando el establecimiento de un Consorcio Internacional p a r a el desarrollo del proyecto. «Cómo primer proyecto de Gran Ciencia en biología -comentaba DeLisi- el mapeo y descifiramiento de la secuencia completa del ADN humano estimulará la investigación en muy
diversos campos, desde la tecnología de las computadoras a la química
teórica». Escudriñar el genoma humano - e n el caso del Consorcio Internacional un mosaico de material genético correspondiente a linfocitos y
espermatozoides de seis a diez individuos anónimos- representa una colosal empresa que, sobre la información proporcionada por los cariotipos
de las diferentes cromosomopatías, aberraciones cromosómicas o anatomía mórbida cromosómica se h a abordado combinando tres estrategias
sucesivas y a la vez solapantes: mapas genéticos, mapas físicos y secuenciación.
Los cromosomas pueden teñirse y examinarse microscópicamente revelando patrones distintivos de bandas claras y oscuras (mapa cromosómico). Por ejemplo, la tinción de cromosomas metafásicos con el colorante Giemsa (bandeo G) muestra bandas claras que contienen genes
constitutivos y específicos de tejidos, SINEs y regiones de ADN ricas en
GC, y bandas más oscuras que contienen menos genes, más LINEs y menor contenido en GC. Las aberraciones cromosómicas contribuyen de manera significativa a malformaciones congénitas, siendo responsables de
>50% de todos los abortos espontáneos. Además, el 0.7% de los neonatos
- y el 2% de los nacidos vivos en mujeres >35 a ñ o s - presentan anomalías
cromosómicas significativas. También numerosos cánceres resultan de
este tipo de anomalías. El análisis citogenético de los cromosomas en linfocitos periféricos h a facilitado la identificación de numerosas anomalías
cromosómicas. En tales análisis los cromosomas son detenidos en metafase y teñidos con Giemsa. El bandeo G proporciona 350-550 bandas por
genoma haploide; 1 banda corresponde a 5-10 millones bp y acoge entre
1 y varios genes. La numeración de las bandas de cada cromosoma procede del centromere al telomere de cada uno de los brazos. Los cromosomas se ordenan -cariotipo- por pares y de acuerdo con su tamaño, a la
vez que pueden identificarse por su patrón de bandeo. Los cariotipos
pueden revelar delecciones, duplicaciones y reorganizaciones cromosómicas, y pueden ayudar a localizar la región de ADN responsable de u n a enfermedad génica. A parte de tales aberraciones, en ocasiones pueden detectarse, a través del microscopio, una serie de variaciones cromosó-
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micas; sirvan de ejemplo el aspecto desenrollado del brazo largo del cromosoma 1, los cromosomas en anillo, las piezas cromosómicas extra o los
mosaicismos.
Las preparaciones de cromosomas intactos pueden utilizarse, también, para el diagnóstico genético molecular, el análisis de delecciones y
duplicaciones génicas y el mapeo de genes en el genoma. La hibridación
in situ fluorescente (FISH) utiliza sondas de cADN marcadas con sustancias fluorescentes, con lo que bajo el microscopio de fluorescencia puede
determinarse la localización relativa de una secuencia particular de ADN;
ello permite la localización de la sonda cADN en regiones subcromosómicas que la técnica de bandeo cromosómico no puede determinar. El análisis estándar por FISH proporciona resoluciones de 5-10 Mb y sirve de
puente entre el análisis citogenético estándar y el estudio molecular detallado utilizando ADN purificado. Utilizando sondas multicolor y cromosomas interfásicos, en los que el ADN es menos compacto, puede obtenerse una panorámica con una resolución de 100 kb.
Por otro lado, en ocasiones puede cuantificarse la cantidad o dosis de
u n a enzima codificada por u n determinado gen (dosis génica). Es posible
mostrar, ante la delección de u n a porción cromosómica, que la cuantía de
u n a determinada enzima es, solo, la mitad de la cuantificada en controles, o ante u n a duplicación cromosómica que los niveles son el 150% de
los controles. De esta manera se localizaron los genes de la fosfatasa acida (c2), adenilato quinasa (c9) o superoxide dismutasa (c21). Sin embargo, uno de los descubrimientos más sorprendentes h a sido que células
somáticas de especies diferentes, cuando crecen el mismo medio de cultivo y en presencia de ciertos promotores, funden produciendo células híbridas. Sobre la base de que las células híbridas pierden progresivamente y durante las sucesivas divisiones celulares cromosomas de u n a de las
especies, es posible adjudicar diferentes actividades enzimáticas a cromosomas determinados.
Dado el tamaño y la complejidad del genoma humano, la identificación y localización de los genes no es trivial. Los mapas genómicos int e n t a n facilitar la localización de u n gen de interés. Dos tipos de mapas
(genéticos o físicos) describen el orden de los marcadores y las distancias
entre ellos en los cromosomas. Uno de los objetivos del Proyecto genoma
humano es incrementar la resolución de esos mapas h a s t a que se conozca la localización exacta de cada uno de los genes. Un m a p a genético determina la posición relativa de u n gen o de u n locus sobre la base
de las frecuencias de recombinación relativas a otros loci en el mismo
cromosoma. Cualquier secuencia polimórfica cuyo patrón de herencia
pueda seguirse, es útil para mapeo genético. Los marcadores polimórfi-
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cos más utilizados son las repeticiones de secuencias simples (satélites)
y los cambios mononucleotídicos. El mapa genético se construye asignado la fi:*ecuencia con que dos marcadores se heredan conjuntamente mediante estudios de ligamiento genético. La localización cromosómica de
un gen puede determinarse rastreando la herencia de marcadores polimórficos.
La firecuencia observada de recombinación entre dos loci es u n a fimción de su distancia y se expresa en centimorgan (cM); ello, en recuerdo
de Thomas H Morgan, u n genetista que estudió el ligamiento génico y estableció el concepto de que la firecuencia de recombinación varía como
u n a fianción de la distancia entre dos locus génicos. Si la fi:*ecuencia de recombinación entre dos loci es del 1%, ambos loci distan 1 cM. Por tanto,
el m a p a genético se construye calculando, en estudios de ligamiento, la
firecuencia con que dos marcadores se heredan juntos. Ligamiento genético es la tendencia de los genes a heredarse conjuntamente como resultado de su localización sobre el mismo cromosoma. Dado que la fi^ecuencia de recombinación incrementa como una ñmción de la distancia
genética, cuanto más próximos se encuentren dos loci mayor posibilidad
habrá de que no recombinen y que, por el contrario, se hereden juntos (ligamiento génico). Un conjunto de marcadores lo suficientemente próximos para que se hereden conjuntamente definen un haplotipo. A efectos
de identificar u n locus cromosómico que segregue con u n a enfermedad es
necesario determinar el genotipo de muestras de ADN de varios miembros de varios pedigrís. Luego, puede determinarse si ciertos aleles marcadores cosegregan con la enfermedad.
Los marcadores utilizados en la confección de los mapas genéticos corresponden a diferentes polimorfismos de secuencias de ADN que se distribuyen por todo el genoma. Un polimorfismo ADN es u n a alteración en
u n a determinada secuencia ADN que se observa con u n a frecuencia > 1 %
en u n a población determinada. A diferencia de las mutaciones, estas alteraciones en la secuencia no condicionan efectos adversos en la función
de los genes y pueden considerarse variaciones neutras en la secuencia
ADN. Los polimorfismos son importantes porque permiten rastrear u n
gen -refiriéndolo a u n a región polimórfica cromosómica d e t e r m i n a d a - en
pedigrís. Los polimorfismos más importantes son los debidos a variaciones en la longitud de secuencias simples iterativas, y a variaciones de u n
nucleotide en u n a posición dada (polimorfismos mononucleotídicos, single nucleotide polymorphisms - SNPs). El International SNP Map Working Group anunció, en noviembre de 2000, u n mapa de más de u n millón
de SNPs distribuidos a través del genoma humano, que proporciona u n a
densidad de secuencias de u n SNP cada 1.0 kb.
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Una clase especial de polimorfismo es el polimorfismo de longitud del
fragmento de restricción {restriction fragment-lenght
polymorphism,
RFLP). Si el cambio de u n a base ocurre en u n sitio de reconocimiento
para u n a endonucleasa de restricción, puede destruir la secuencia de reconocimiento de esta enzima y abolir dicho sitio de reconocimiento; alternativamente, el polimorfismo puede crear u n sitio nuevo de restricción. Polimorfismos de este tipo modifican el tamaño de los fragmentos
que resultan de una digestión con esa enzima. El tamaño alterado de los
segmentos de restricción puede detectarse mediante electroforesis en gel.
Si u n determinado sitio de restricción h a sido destruido, la banda polimórfica correspondiente al fragmento de restricción estudiado será mayor, y si se h a generado uno nuevo, la banda será de menor tamaño. Tales polimorfismos proporcionan «huellas dactilares» del ADN.
Por su parte, el mapa físico es la distancia de hecho (expresada en pares de bases - p b - de secuencia ADN) entre genes. En términos físicos, 1
cM equivale, aproximadamente, a u n millón de pares de bases (1 Mb). El
m a p a físico refleja la ordenación y distancias entre genes; u n mapa que
tiene varios niveles de resolución. Un mapa físico de baja resolución indica qué cromosoma ubica u n gen particular. El uso de técnicas como la
hibridación in situ (FISH) - a n t e s citada— permite determinar la localización (cartografía o mapeo) de u n determinado gen en u n cromosoma.
Utilizando diferentes sondas marcadas con diferentes distintivos fluorescentes es posible «pintar» los cromosomas y demostrar las localizaciones relativas de los diferentes genes, aunque ello sigue significando un
bajo nivel de resolución. Mayor resolución se consigue clonando trozos de
ADN en diferentes vectores de clonaje y estimando las distancias mediante el solapamiento de los fragmentos. El acortamiento de los fragmentos incrementa la resolución. E n u n a primera fase los grandes fragmentos de restricción se clonan en cromosomas artificiales de levadura
(YACs); luego se fragmentan en otros más pequeños que se clonan en cromosomas artificiales de bacterias (BACs), cósmidos, fagos y, por último,
en plásmidos; ello, de tal manera, que u n segmento de ADN queda cubierto por u n a serie de clones contiguos icontigs). La utilización de sitios
etiquetados por la secuencia {sequence tagged sites, STSs) como unidad
estándar para la confección del mapa físico, h a representado u n a gran^
ventaja. Los STSs sirven como contraseñas que permiten solapar fragmentos clonados y disponerlos en el mismo orden que ocupan en el genoma. Los STSs constan de 200-500 pb.
El objetivo final del Proyecto genoma humano es conocer la secuencia
completa de los pares de bases que componen el ADN nuclear humano: la
secuenciación del genoma. Sin embargo, la tecnología actual no permite la
secuenciación directa del ADN completo de un cromosoma; es necesario
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manejar trozos lo suficientemente pequeños representados por los BAGs.
Sobre la base de este esquema general, se dispone de dos estrategias de
secuenciación: «abordaje jerárquico» {hierarchical shotgun) utilizado por
el Consorcio Internacional, y «abordaje genómico global» {whole genome
shotgun) aplicado por Celera Genomics. En el primer caso se escinde el
ADN de cada cromosoma de manera ordenada y en fragmentos cada vez
más pequeños (YACS BACs cósmidos) lográndose el reensamblaje de las
secuencias de acuerdo con el orden relativo -conocido sobre la base de los
diferentes marcadores genéticos localizados en el mapa genético, en especial STSs- de cada uno de los fragmentos. La segunda estrategia escinde
aleatoriamente el ADN en pequeños segmentos que, tras su clonaje, se
preparan para su secuenciación; la reconstrucción se logra mediante el solapamiento de las secuencias de los extremos de los fragmentos.
En 1975, Frederick Sanger -que había recibido el PNQ de 1958 por
su trabajo sobre la estructura de las proteínas, especialmente la insulin a - anunciaba que había desarrollado un método para determinar eficazmente el orden de los pares de bases en un genoma; por su parte. Alan
Maxam y Walter Gilbert desarrollaron, de manera completamente independiente y el mismo año, un método de secuenciación diferente (Figura
14). Focos años después, numerosos grupos habían logrado automatizar
el proceso. El primer prototipo práctico fue desarrollado por un equipo en
el Instituto Tecnológico de California, en 1986. Este prototipo fue rápidamente convertido en un instrumento comercial y puesto en el mercado
en 1987. El crecimiento de la capacidad de secuenciación ha sido explosivo. En 1976 un investigador era capaz de secuenciar 5 kb a lo largo de
un año; la capacidad de secuenciación conseguida por Celera Genomics
es de 100,000 kb / día, lo que ha hecho que la máquina PRISMA 3700
(Perkin-Elmer) sea una pieza clave de su proyecto.
FIGURA 14. Paul Berg (nl926), Walter Gilbert (nl932) y Frederick Sanger (nl918)
compartieron el Premio Nobel de Química, en 1980, «por sus contribuciones referentes a
la determinación de las secuencias de bases en los ácidos nucleicos».
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Si los secuenciadores son las herramientas claves, la bioinformática
es el cerebro del Proyecto, principalmente en el caso de Celera Genomics.
Las 230 máquinas PRISMA 3700 -completamente robotizadas en sus
funciones- que dispuso Celera vomitan un flujo continuo de datos -señales que representan las bases adenina, citosina, guanina y t i m i n a - que,
a través de u n a red de fibra óptica, h a n estado alimentando u n computador desarrollado por Compaq expresamente para Celera: u n sistema en
paralelo con u n a capacidad de computación de 1.3 teraflop (tera = 10^^) o
1.3 billones de operaciones por segundo, que hacen de este artilugio la
computadora civil más potente del mundo. Solo tiene u n rival: ASCI Red,
construida por Intel para el gobierno USA y con el objetivo de modelar
explosiones nucleares. Tan fantástico apoyo computacional se debe a la
exigencia de la estrategia seguida por Celera -opuesta a la del consorcio
internacional- de secuenciar segmentos aleatorios de ADN que deben ser
correctamente ordenados.
El 26 de junio de 2000, en una Conferencia de prensa pactada tras duras negociaciones entre el Consocio Internacional para la Secuenciación
del Genoma Humano y Celera Genomics se presentó, en la Casa Blanca,
u n «borrador de trabajo» {working draft) del Genoma Humano. El acto lo
encabezó el presidente William J Clinton; fueron coprotagonistas J Craig
Venter, presidente de Celera y Francis Collins, director del Consorcio Internacional (Figura 15), y fueron testigos representantes de los países copartícipes en el Proyecto: Tony Blair, Primer Ministro del Reino Unido
por videoconferencia y los distintos embajadores en presencia física:
«El consorcio público Proyecto Genoma Humano da a conocer, hoy, la conclusión de un borrador de trabajo de la secuencia del genoma humano - la
huella genética del ser humano-. Este borrador incluye dos tareas: colocar largos fragmentos de ADN en orden correcto para completar todos los
cromosomas, y determinar la secuencia de ADN de esos fragmentos. El ensamblaje que hoy se da a conocer consta de fragmentos solapantes que cubren el 97% del genoma humano, representando un 85% del genoma la secuencia hasta ahora ensamblada.
La secuenciación se disparó durante el último año; el 60% de la secuencia
se ha conseguido en los últimos seis meses. Durante este tiempo el consorcio ha proporcionado mil bases de secuencia bruta por segundo -7 días
a la semana, 24 horas cada día-. La calidad media del «borrador de trabajo» supera con mucho las expectativas originales del consorcio para este
producto intermedio. Los centros del consorcio han proporcionado mayor
cantidad de secuencia que la esperada.
Consecuencia de todo ello es que el «borrador de trabajo» está mucho más
cerca de la versión final de lo que el consorcio había previsto para este mo-
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15. J Craig Venter y Francis Collins, «apadrinados» por William Jefferson.
Clinton (nl946), anunciaron, el 26 de junio de 2000, un borrador de trabajo del
genoma humano
FIGURA
mentó. Aproximadamente el 50% de la secuencia del genoma se encuentra
en forma casi definitiva, y el 24% lo está definitivamente. La secuencia
genómica está organizada en segmentos contiguos de, aproximadamente,
200,000 bases. La fiabilidad media de la secuencia de ADN en este ensamblaje es del 99.9 %. La información de la secuencia por parte del proyecto público ha sido continua, inmediata y de libre disposición, sin restricciones para su utilización o redistribución. La información es consultada a diario por científicos de la academia y de la industria.
Hasta este momento ya han sido identificadas algunas decenas de miles de
genes a partir de la secuencia del genoma. El análisis de la secuencia disponible muestra los 38.000 genes presupuestos y confirmados por evidencia experimental. Hay muchos miles de predicciones génicas adicionales que han
de ser comprobados experimentalmente. Docenas de genes involucrados en
enfermedades han sido identificados accediendo al borrador de trabajo.
El objetivo del consorcio para la primavera de 2000 fue producir una versión tipo borrador de trabajo de la secuencia humana, un ensamblaje que
contiene fragmentos solapantes que cubren aproximadamente el 90% del
genoma y que se secuencia en forma de borrador de trabajo; ello es, con algunas lagunas y ambigüedades. El objetivo último del consorcio es producir una secuencia completamente finalizada; en otras palabras, sin lagunas y con el 99.9% de fiabilidad. La fecha para este último objetivo había
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sido el año 2003, pero a la vista de los resultados actuales es completamente seguro que la obtención de la secuencia definitiva se acortará significativamente.
En un anuncio paralelo, Celera Genomics anunció hoy que h a completado
su propio ensamblaje de la secuencia del ADN humano. Los proyectos público y privado utilizan automatismos y tecnología de secuenciación similares, pero emplean distintos aproches para secuenciar el genoma humano. El proyecto público usa u n a estrategia denominada «abordaje jerárquico» {hierarchical shotgun); el proyecto de Celera utiliza u n aproche
denominado «abordaje genómico global» {whole genome shotgun). El abordaje jerárquico tiene la ventaja de que la localización global de cada secuencia individual se conoce con certeza, pero requiere construir un mapa
de largos fi:'agmentos que cubra el genoma. El abordaje global no requiere
este paso, pero tiene otros requerimientos en la fase de ensamblaje. Ambas estrategias alinean la secuencia a lo largo de los cromosomas humanos utilizando mojones localizados en el mapa físico producido en el Proyecto Genoma Humano.
La producción de secuencias más allá de lo esperado h a ido pareja de u n a
sorprendente cosecha de variaciones génicas h u m a n a s -los llamados polimorfismos nucleotídicos simples o SNPs-. El Proyecto Genoma Humano
tenía el objetivo de descubrir 100,000 SNPs antes del año 2003. Hasta
ahora, con las secuencias ensambladas y otros datos acumulados por el
Consorcio SNP, los científicos ya han identificado más de 300,000 SNPs y
seguramente dispondrán hasta un millón de SNPs a finales del año 2000.
Los SNPs proporcionan u n a poderosa herramienta para estudiar las enfermedades y la historia humanas. La secuenciación - d e t e r m i n a r el orden
exacto de las cuatro bases químicas del ADN denominadas A, T, C y G - se
h a conseguido en el Proyecto Genoma Humano merced a los avances tecnológicos en el desciframiento del ADN y a la naturaleza colaborativa del
esfuerzo, que h a incluido 1,000 científicos de casi todo el mundo que h a n
trabajado juntos con eficacia.
El Consorcio internacional para la secuenciación del genoma humano incluye científicos de 16 instituciones en Francia, Alemania, Japón, China,
Gran Bretaña y Estados Unidos. Los cinco centros principales están localizados en: Baylor College of Medicine, Houston, Texas; Joint Genome Institute en Walnut Creek, CA; Sanger Centre cerca de Cambridge, Inglaterra; Washington University School of Medicine, St. Louis; y Whitehead
Institute, Cambridge, Massachusetts. Juntos, estos cinco centros h a n generado el 82% de la secuencia.
El proyecto h a sido t a n estrechamente coordinado que ninguna región del
genoma h a sido desatendida a la vez que se h a n minimizado las duplicaciones. Los participantes en el consorcio internacional se h a n adherido a
los estándares de calidad del proyecto y a la política de publicidad de los
datos. El proyecto se financia mediante ayudas de las agencias guberna-
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mentales y fundaciones privadas en varios países, que incluyen el Instituto Nacional para la Investigación del Genoma Humano de los Institutos
Nacionales de Salud y el Departamento de la Energía, de EE UU, y el
Wellcome Trust en Inglaterra.
El coste global de la secuenciación del borrador de trabajo ha sido, aproximadamente, de 300 millones de dólares USA; de los que, aproximadamente, 150 millones han sido financiados por los Institutos Nacionales de
Salud de EE UU. El coste de la secuenciación del genoma humano se refiere frecuentemente a tres mil millones de dólares. Sin embargo, esa cifra se refiere a la estimación inicial del Proyecto Genoma Humano para
un periodo de 15 años (1990-2005) y para una amplia gama de actividades
científicas relacionadas con la genómica, que incluyen estudios de enfermedades humanas, organismos experimentales (como bacterias, levaduras, lombrices, moscas y ratón), desarrollos de nuevas tecnologías para investigación biomédica, métodos computacionales para el análisis de
genomas y aspectos éticos, legales y sociales relacionados con la genética».
El Consorcio Internacional y Celera representan dos maneras de hacer ciencia: burocracia y ortodoxia de planteamientos frente a iniciativa
e innovación. El Consorcio inició su marcha en 1990, Celera entró en la
competición en 1998 con u n a inversión de $300 millones. Celera anunció
que lograría la secuencia completa del genoma humano en tres años, adelantándose en cuatro a los objetivos del Consorcio; ello, sobre la base del
análisis de los datos que el Consorcio facilitaba «día a día» en bancos de
datos de libre acceso, de u n a nueva estrategia de secuenciación que obvia u n a parte de la cadena metodológica simplificándola y abaratándola
y que había sido testada en la secuenciación de genomas más simples
(Celera publicó el genoma de Drosophila en marzo de 2000), y de la utilización de máquinas ultrarrápidas -secuenciadores automatizados y
computadoras-, de novísima generación.
El Proyecto Genoma Humano h a sacado a la superficie u n serio dilema político sobre la base de una serie de conflictos de intereses. Temeroso de que Celera patentara la secuencia, el Consorcio reaccionó. El Wellcome Trust, inglés, incrementó de inmediato su aporte al proyecto
comprometiéndose a que el Sanger Centre completara u n tercio de la secuencia; por su parte, EE. UU. consolidó su esfuerzo y creó cuatro supercentros de secuenciación. El Consorcio, además, replanteó sus objetivos
que desplazó desde la consecución de una secuencia definitiva a producir
un borrador del 90% del genoma para la primavera de 2001, la fecha
anunciada por Celera. Un año después, el Consorcio revisó sus plazos a la
baja señalando la primavera de 2000 como tope; ello, a efectos de adelantarse a los intereses de Celera. Llegando juntos a la meta de esta prime-
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ra etapa, el Consorcio y Celera h a n pactado el reconocimiento del borrador como patrimonio de la humanidad. A partir de ese momento comenzó
una segunda etapa, más dura, cuya meta es la transferencia de secuencias concretas al mercado del diagnóstico médico: los chips de ADN. En resumen, el genoma humano es para el Consorcio Internacional u n bien público o u n bien común, para Celera Gemomics es u n a fuente de beneficios.
El Proyecto Genoma Humano se centra, ahora, en convertir el «borrador de trabajo» en u n a «obra definitiva». Ello se conseguirá rellenando las lagunas existentes en la secuencia presentada e incrementado la
fiabilidad de la secuencia global hasta el 99.99%. Aunque la versión denominada «borrador de trabajo» es útil para la mayor parte de la investigación médica, u n a secuencia t a n perfecta como sea posible es crítica
para obtener toda la información contenida en los datos de la secuencia
humana. Ello ya se h a conseguido para los cromosomas 21 y 22, así como
para el 24% del total del genoma. La secuenciación del c21, el más pequeño de los cromosomas humanos, h a deparado u n hallazgo inesperado:
la pobreza de genes en el cromosoma. Si el número total esperado de genes para el genoma humano era, aproximadamente, 100000, la predicción para el c21 era 800 a 1000 genes. Sin embargo, el consorcio internacional para c21 h a encontrado, solamente, 225 genes. Los genes c21 más
los correspondientes a c22 - e l primer cromosoma humano secuenciadoson 770; si tal es la tendencia en el resto de los cromosomas, el número
total de genes del genoma humano sería, aproximadamente, 35000; u n a
cifra muy lejana de los 80000-100000 esperados.
La cifra de partida se debe a Walter Gilbert, uno de los pioneros de la
genómica quién, en los 1980s, estimó en, aproximadamente, 100000 los
genes humanos; ello sobre la base de las bases por el secuenciadas en segmentos de ADN. A finales de los 1990s, Craig Venter barajó 50000-80000
genes, e Incyte Pharmaceuticals y Human Genome Sciences, otras dos
firmas norteamericanas que entraron en la «arena» genómica, subieron
la cifra a 120000-150000. Por otro lado, el número de genes aceptado a la
baja h a deparado otra «noticia»: que la diferencia cuantitativa génica no
es t a n dispar entre las distintas especies. Esta estimación a la baja - p e nuria genómica- no es t a n sorprendente. La dotación genómica (14000
genes) de la Drosophila melanogaster es inferior a la dotación (19000 genes) del Caenorhabditis elegans, aunque la mosca es más compleja que el
gusano. La contestación debe estar en relación con el proteoma. Es cada
vez más evidente el papel que el procesamiento alternativo del ARN juega en expandir la diversidad proteómica, lo que puede explicar la discrepancia aparente entre el número de genes y la complejidad del organismo. El procesamiento (splicing) alternativo puede generar más
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transcriptos que el correspondiente al número de genes en un genoma
dado. Además, una secuencia codificante puede comenzar a leerse en distintas bases; tal transcripción o lectura alternativa incrementa las posibilidades de expresión de una secuencia dada. El desarrollo de un catálogo completo de los transcriptos alternativos (transcriptoma) de un
genoma y determinar su ñmción, será el principal reto de la era postgenómica. Otra vez, un dogma biológico ha sido cuestionado; ahora se
plantea la revisión del esquema estándar: [un gen -> una proteína].
Con todo, cabe recordar las impresiones de Ralph Waldo Emerson
-recogidas en Science de 22 de diciembre de 2000- tras visitar, en 1833,
el Gabinete de Historia Natural del Jardín Botánico de Paris: «Los límites de lo posible se han ampliado... y lo real se nos hace más extraño que
lo imaginario». Para Science, «la explosión en la secuenciación genómica»
hace actual la expresión de Emerson y «justifica su elección como Acontecimiento Científico del año (Breakthrough of the Year 2000)». Cualquiera puede apreciar su inmenso poder y potencialidad; también su
asombrosa complejidad y su imperfección. Poco después de la publicación
formal de la secuencia dorada, Tony Blair declaró: «Hoy somos testigos
de una revolución en la ciencia médica cuyo impacto puede superar al
que supuso el descubrimiento de los antibióticos». Justo cinco días antes,
el temor a la creación de un «gueto genético» estremeció Londres cuando
una de las compañías aseguradoras más importantes de Inglaterra reveló que había utilizado ilegalmente datos de análisis genéticos experimentales para evaluar algunas peticiones de seguros. Sólo de manera
gradual, mediante la investigación meticulosa y concienzuda, podrá clarificarse el verdadero impacto social y médico de la ciencia genética.
Historia del Proyecto Genoma Humano
1865
Mendel expone su trabajo ante la Sociedad de Historia Natural de Brünn.
1900
«Descubrimiento» del trabajo de Mendel por de Vries, Correns y von Tschermak-S.
1902
Boveri y Sutton demuestran la presencia de pares de cromosomas en especies diploides.
1905
Bateson denomina «genética» a la ciencia de la herencia.
1909
Johannsen introduce la palabra «gen».
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1911
Morgan postula la base cromosómica del ligamiento genético.
1928
Griffith descubre u n «principio transformador» en Diploccocus
pneumoniae.
1941
Beadle y Tatum establecen el «dogma» «un gen - u n a enzima».
1944
Avery, MacLeod y McCarthy demuestran que el «principio transformador» en pneumoco es ADN.
1950
McClintock propone los «elementos transportables».
1952
Hershey y Chase demuestran que el material genético del bacteriófago T2 es ADN.
1953
Watson y Crick publican la estructura de doble hélice de ADN sobre la base de los datos de difracción de rayos X de Wilkins y de la regla de correspondencia de bases de
Chargaff.
1956
Tjio y Levan establecen que la dotación cromosómica normal diploide de la especie
h u m a n a es 46.
1958
Kornberg aisla la ADN polimerasa L
1959
Ochoa aisla la RNA polimerasa.
1964
Se establece la colinearidad entre genes y productos polipeptídicos sobre la base de
los trabajos de Yanofski et al y de Brenner et al.
Temin propone la hipótesis la formación de provirus ADN a partir de virus tumorales ARN.
1966
Niremberg y Khorana completan el código genético.
1970
Nathans y Smith aislan la primera endonucleasa de restricción.
Baltimore identifica la transcriptasa inversa en virus tumorales ARN.
1972
El laboratorio de Berg consigue la primera molécula de ADN recombinante in vitro.
1977
Breathnach, Mandel y Chambón y Jeffreys y Flavell, demuestran intrones en genes
eucarióticos.
Maxam y Gilbert y Sanger, Nicklen y Coulson publican técnicas de secuenciación de
ADN.
Sanger et al publican la secuencia completa (5387 nucleotides) del fago FX174.
1978
Se descubre procesamiento (splicing) de ARNs derivados de adenovirus en tres laboratorios diferentes.
1980
Botstein y Davis y Skolnick y White proponen un método para mapear la totalidad
del genoma humano sobre la base de RFLPs.
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1982
Wada propone la utilización de robots y la secuenciación automática.
1984
Científicos del MRC (UK) descifi:'an la secuencia completa del virus Epstein-Barr
(170 kb).
1985
Sinsheimer, Rector de la Univ. California en Santa Cruz, organiza una reunión para
discutir la viabilidad de secuenciar el genoma humano.
Mullis et al desarrollan la PCR.
Sanger et al publican la secuencia completa (48502 pares de bases) del fago lambda.
1986
Brenner urge a la Unión Europea a elaborar un programa colaborativo para mapear
y secuenciar el genoma humano.
DeLisi, del Departamento de Energía (DOE) de EE.UU., organiza u n a reunión para
discutir la estrategia para secuenciar el genoma humano.
Dulbecco apoya la secuenciación del genoma humano.
La secuenciación del genoma humano se debate en una reunión sobre «La Biología
Molecular del Homo sapiens» en Cold Spring Harbor Laboratory.
Hood y Smith anuncian el primer prototipo de secuenciadota automática de ADN.
DeLisi inicia el estudio del genoma humano consiguiendo, para el año, 1987 $5.3 millones a tal efecto.
1987
Gilbert crea Genome Corp.
Burke, Olson y Carie construyen cromosomas artificiales de levadura (YACs) como
herramientas de clonaje, incrementando xlO el tamaño del inserto.
Donis-Keller et al publican el primer mapa genético con 403 marcadores.
1988
La National Science Foundation (EE.UU.) endorsa el Proyecto Genoma Humano al
que dota con $200 millones.
Wyngaarden, director de los Institutos Nacionales de la Salud (NIH, EE.UU.), reclama el protagonismo de ellos en el Proyecto.
Se celebra la 1.^ Reunión anual sobre el Genoma Humano.
Watson acepta dirigir la Oficina para la Investigación del Genoma Humano de los
NIH. Establece que el 3% de los fondos se destinarán al estudio de aspectos éticos y
sociales.
Los NIH y el DOE firman un acuerdo de colaboración sobre el Proyecto Genoma Humano.
1989
El Comité Asesor para el ADN recombinante de los Institutos Nacionales de la Salud
de EE.UU recomienda la aprobación del primer trasplante génico en humanos (terapia génica).
Tsui, Collins et al clonan el gen de la fibrosis quística.
La Oficina dirigid^ por Watson es elevada de categoría: Centro Nacional para la Investigación del Genoma Humano (NCHGR).
1990
Los NIH y el DOE publican un plan de cinco años. Los objetivos incluyen u n a mapa
genético completo, un mapa físico con marcadores cada 100 kb y la secuencia de 20
Mb de ADN en organismos modelo, para el año 2005.
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Los NIH comienzan un ambicioso programa a gran escala a efectos de secuenciar los
genomas de Micoplasma caporicolum, Escherichia coli, Caenorhabditis elegans y
Saccharomyces
cerevisiae.
Los NIH y el DOE señalan el uno de octubre como fecha del inicio del Proyecto.
Lipman y Myers publican el algoritmo BLAST para alinear secuencias.
1991
Craig Venter anuncia una estrategia alternativa de secuenciación.
Japón inicia la secuenciación del genoma del arroz.
1992
Tras u n a discusión con Healey, directora de los NIH, con motivo de la patente de genes, Watson dimite como director del NCHGR.
El Wellcome Trust, de Inglaterra, entra en el Proyecto aportando $ 95 millones.
Simon et al desarrollan cromosomas artificiales bacterianos (BACs) para clonaje.
Cohen et al, del Centro para el Estudio de los Polimorfismos Humanos (CEPH, París)
y Généthon mapean el cromosoma 21.
Equipos de EE.UU y de Francia completan mapas genéticos murine (marcadores espaciados 4.3 cM) y humano (marcadores espaciados 5 cM).
1993
Francis Collins es nombrado director del NCHGR.
Los NIH y el DOE revisan los objetivos para el periodo 1993-98, que incluyen secuenciar 80 Mb de ADN para finales de 1998 y completar el genoma para 2005.
El Wellcome Trust y el Consejo de Investigación del Reino Unido (NRC) abren el Centro Sanger, el mayor laboratorio de secuenciación del consorcio internacional.
1994
Murria, Cohen et al publican u n mapa completo de ligamiento génico del genoma humano, con marcadores espaciados 0.7 cM.
1995
Venter y Fraser y Smith publican la primera secuencia de un organismo vivo: Haemophilus influenzae, 1.8 Mb.
El gobierno japonés aporta $15.9 millones para garantizar el trabajo de varios grupos de secuenciación durante los 5 años siguientes.
Investigadores del Instituto Whitehead y de Généthon publican u n mapa físico del
genoma humano conteniendo 15000 marcadores.
1996
Affymetrix comercializa chips de ADN.
Un consorcio internacional publica el genoma completo del S. cerevisiae.
1997
El NCHGR es promovido a Instituto Nacional para la Investigación del Genoma Humano .
Blattner, Plunkett et al publican la secuencia completa del ADN de E. coli: 5 Mb.
1998
Japón, EE.UU., UE, China y Corea del Sur establecen u n a colaboración interncional
para secuenciar el genoma del arroz.
Green, Swing et al publican u n programa (PHRED) para interpretar automáticamente datos de secuenciación.
Venter anuncia la creación de una compañía, Celera Genomics, para secuenciar el genoma humano en tres años y con un capital de $300 milones.
El Wellcome Trust (UK) y los NIH y el DOE (EE.UU) reaccionan ante el anuncio de
Venter incrementando los fondos y redefiniendo los objetivos: conseguir un «borrador
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de trabajo» de la totalidad del genoma humano para el año 2001, y completarlo en
2002-03.
Sulston, Waaterson et al completan la secuencia genómica de C. elegans.
1999
Los NIH adelantan la conclusión de los datos al año 2000, y lanzan u n proyecto para
secuenciar el genoma del ratón en 3 años y con un presupuesto de $130 millones.
Investigadores ingleses, japoneses y norteamericanos completan la secuencia del cromosoma 22.
2000
Celera e investigadores académicos secuencian el genoma (180 Mb) de la mosca Drosophila
melanogaster.
El Consorcio Internacional para el genoma humano publica la secuencia completa del
cromosoma 21.
En u n a ceremonia en la Casa Blanca, el Consorcio Internacional y Celera anuncian
la consecución de u n «borrador de trabajo» del genoma humano.
Un consorcio internacional publica la secuencia completa de u n vegetal: Arabidopsis
thaliana.
En diciembre fracasan los planes para una publicación conjunta del «borrador de trabajo» por parte del Consorcio Internacional y de Celera.
2001
El Consorcio Internacional publica su trabajo en Nature (15 de febrero) y Celera en
Science (16 de febrero).
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