Download centro de investigación en sanidad animal (cisa)

CENTRO DE INVESTIGACIÓN EN SANIDAD ANIMAL
(CISA)
Director:
Directora Técnica:
Dirección:
Teléfono:
FAX:
Correo electrónico:
Dr. Esteban Domingo Solans (baja Marzo 2005)
Dra. Marisa Arias Neira
Carretera de Algete a El Casar s/n
28130 VALDEOLMOS (MADRID)
91 6202300 (111)
91 6202247
[email protected]
1
PERSONAL DEL CENTRO DE INVESTIGACIÓN EN SANIDAD ANIMAL
Personal en plantilla
Arias Neira, Marisa
Muñoz Reoyo, Mª Jesús
Brun Torres, Alejandro
Bárcena del Riego, Juan
Gómez Castilla, Jordi
Real Soldevilla, Gustavo del
Carballo Santaolalla, Matilde
Castaño Calvo, Argelia
Torres Trillo, Juan Mª
Torre Reoyo, Ana de la
Blanco Lavilla, Esther
Martínez García, Mercedes
Pascual Alvarez, Gonzalo
Villa Díaz, Ana
Paredes Tomás. Antonio
Pérez Taboada, Nazaret
Losada Carrasco, Magdalena
Gómez Perochena, Elena
Cuellar Cuellar, Mª Luisa
Algaba Alvarez, Julia
González Guirado, Antonia
González Esguevillas, Mónica
Nuero García, Oscar
Lahoz Ruiz, Rosa
Sánchez Nieto, Carlos
González Sáez, Juan Carlos
Benavente Pintor, Mª Angela
Gómez Gómez, Concepción
Toledo Olaya, Ana Mª
Sánchez Lobo, Iria
Viva Alvarez, Fco. José
Viva Barroso, Emilio
Personal contratado
Directora Técnica
Investigador A2
Investigador A2
Investigador A2
Investigador A2
Investigador A2
Investigador A3
Investigador A2
Investigador A3
Investigador A4
Técnico Sup. Esp.
Jefe Servicio Gest.
JefeServicio Mant
Técn. Esp.GMed.
Jefe Admón..
Jefe Biblioteca.
Jefe Negociado
Aux. Técnico Inv.
Ayudante Técnico
Aux. Oficina P3
Ayudante Técnico
Auxiliar Invest.
Auxiliar Invest.
Auxiliar Admón.
Auxiliar Técnico
Oficial Inv y Lab.
Ayud. Manten.
Ayud. Manten.
Ayud. Manten.
Ayud. Manten.
Ayud. Manten.
Ayud. Manten.
.
2
Alejo Herberg, Alí
Saiz Zalabardo, Margarita
Mena Piñeiro, Ignacio
Ortego Alonso, Javier
Ruiz Argüello, Begoña
Tafalla Piñeiro, Carolina
Pérez Martínez, Mª del Mar
Borrego Rivero, Belén
Chamorro Pérez, Sonia
Espinosa Martín, Juan Carlos
Martín González, Sergio
Lorenzo Alguacil, Gema
Molina Polo, Nicolás
Iglesias Hidalgo, Javier
Martín del Burgo, Mª Ángeles
Madueño Amor, Encarnación
Llorente Herranz, Alicia
Gallardo Frontaura, Mª Carmen
Morales Camarzana Mónica
Sánchez Martín, Miguel Angel
Vázquez Ruiz, Belén
Fernández Pinero, Jovita
Moreno López, Sonia
Parra Arrondo, Beatriz
Martín Folgar, Raquel
Cano Benito, Mª Jesús
Fernández-Pacheco, Paloma
Nieto Martínez. Raquel
Robles Suárez, Ana María
García Casado, María Ana
Martín Lluch, Mercedes
Cristina Herrador
Esquinas Muñoz, Mª Angeles
Sánchez-Arévalo Almena. Ana I.
Gutiérrez Rivas, Mónica
Escribano Romero, Estela
Soler Sánchez, Alejandro
Sánchez Freire, Esther
Cuellar Lozano, Carlos
Izquierdo Gil, Ana
Losa Román, Nuria de la
Ferraz Colomina, Rosa Mª
Alcaraz Iglesias, Gema
Martín Martín, Elena
Relaño Ginéz, Aroa
Ramón y Cajal
Ramón y Cajal
Ramón y Cajal
Ramón y Cajal
Ramón y Cajal
Ramón y Cajal
Ramón y Cajal
Titulado Superior
Titulado Superior
Titulado Superior.
Titulado Superior
Titulado Superior
Titulado.Superior
Titulado Superior
Titulado Superior
Titulado Superior
Titulado Superior
Titulado Superior
Titulado Superior
Titulado Superior
Titulado Superior
Titulado Superior
Titulado Superior
Titulado Superior
Titulado Superior
Tec. Sup. Inv.
Téc. Sup Invest.
Téc. Sup. Invest.
Tec. Sup. Invest
Téc. Sup. Invest.
Téc. Sup. Invest.
Téc Medio
Téc Medio
Téc Medio
Juan de la Cierva
Juan de la Cierva
Aux. Invest.
Aux. Invest.
Auxiliar admón.
Aux. Invest.
Aux. Invest.
Aux. Invest.
Aux- Invest.
Aux. Invest.
Aux. Invest.
Becarios
Almanza Reyes, Horacio
Esperón Fajardo, Fernando
Angulo Herrera, Iván
Cámara Pelliso, Susana
Cubillos Zapata, Carolina
Díaz Sansegundo, Fayna
Estévez Fernández, Rodolfo
Herva Moyano, Mª Eugenia
Rodríguez Benito, J. Antonio
Rodríguez Pulido, Miguel R.
Padilla de Beer, Danielle
Sotelo Girón, Elena
Iglesias Martín, Irene
Alamillo Gordo, Elia
Quintana-Lacaci Sanz, Bárbara
González Torres, Lucia
Diaz Toledano, Rosa Mª
García Maceira, Patricia
Montón Redondo, Rosa Mª
3
Predoctoral
Predoctoral
Predoctoral
Predoctoral
Predoctoral
Predoctoral
Tecnólogo
Predoctoral
Predoctoral
Tecnólogo
ALBAN
Predoctoral
Predoctoral
Predoctoral
Finnova
Finnova
Predoctoral
Predoctoral
Finnova
OBJETIVOS DEL CENTRO DE INVESTIGACIÓN EN SANIDAD
ANIMAL
El Centro de Investigación en Sanidad Animal (CISA-INIA) está situado en
Valdeolmos, a 40 Km. de Madrid, ubicado en una finca de 34 hectáreas, con acceso
controlado y restringido. Está dotado de una instalación de “Alta Seguridad Biológica",
diseñada, construida y equipada para trabajar con enfermedades infecciosas exóticas y
de alto riesgo para la Sanidad Animal.
En él se desarrollan diferentes actividades de investigación y desarrollo tecnológico,
formación científico-técnica, y de cooperación internacional. El Centro, se inauguró el 3
de Febrero de 1993. El CISA es “Gran Instalación Científica española” desde 1995.
INSTALACIÓN DE ALTA SEGURIDAD BIOLÓGICA: La zona de alta seguridad
biológica de 10.824 m2, posee unas características arquitectónicas y funcionales
reconocidas internacionalmente para la consecución de la bioseguridad. La hermeticidad
del edificio se consigue gracias a su estructura de hormigón armado, sellado de sus
juntas externas, aire acondicionado con diferentes niveles de presiones negativas,
filtración del aire a través de filtros HEPA, descontaminación de efluentes e
incineración de residuos. En el interior, todas las superficies se encuentran revestidas de
resinas especiales, que les proporciona aislamiento y protección. Todas las
conducciones que atraviesan las paredes, suelos y techos están selladas de forma
independiente. La comunicación con el exterior se realiza a través de sistemas de
descontaminación de doble puerta air-locks, autoclaves de barrera y sistemas de barrera
de descontaminación superficial.
Esta Instalación, con nivel de seguridad biológica 3 y 3+ , dispone de 26 Laboratorios y
14 salas comunes de nivel 3, y 2 Laboratorios de nivel de contención 3+ habilitados
para trabajar y almacenar agentes infecciosos animales que eventualmente pudieran
afectar al ser humano, de acceso restringido con puerta neumática y equipado con ducha
convencional y química. Los trabajos realizados en los laboratorios de nivel 3+ se
realizan utilizando trajes especiales con respiración autónoma, que aseguran el
aislamiento y seguridad del personal. También existe un Animalario constituido por 21
estancias individuales y polivalentes diseñadas para albergar distintas especies animales,
desde peces hasta ganado mayor, con medidas de bioseguridad que garantizan el trabajo
in vivo incluso con patógenos transmisibles por aerosol.
El CISA coopera con el Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación como
laboratorio Nacional de Referencia para algunas enfermedades de la antigua Lista A de
la Oficina Internacional de Epizootías (OIE). Gracias a la labor desarrollada desde su
creación en investigación y desarrollo y en la lucha contra las enfermedades de mayor
impacto económico y sanitario, es Centro Mundial de Referencia de la OIE para la Peste
porcina africana y Peste equina africana, y Centro colaborador de la Organización de las
Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación (FAO) en varias enfermedades
como Peste porcina clásica y Fiebre aftosa, así como en materia de Bioseguridad. Por
estas mismas razones fue nombrado Laboratorio de Referencia de la UE de Peste
porcina africana en 2002.
4
GRUPOS DE INVESTIGACIÓN
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
EPIDEMIOLOGÍA Y SANIDAD AMBIENTAL
ENFERMEDADES
TRANSFRONTERIZAS
Y
EMERGENTES.
DESARROLLO Y CONTROL DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS.
ENFERMEDADES
TRANSFRONTERIZAS
Y
EMERGENTES.
DIAGNÓSTICO E INMUNOPROFILAXIS
ENFERMEDADES
TRANSFRONTERIZAS
Y
EMERGENTES.
ENFERMEDADES EMERGENTES – FIEBRE DEL VALLE DEL RIFT.
BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR. BIOLOGÍA MOLECULAR Y
CELULAR DE PRIONES.
BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR. MÉTODOS ALTERNATIVOS
A LA EXPERIMENTACIÓN ANIMAL
BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR. ARENAVIRUS
BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR. BIOLOGÍA MOLECULAR DE
VIRUS RNA
BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR. MODULACIÓN DEL
SISTEMA INMUNE POR VIRUS.
VIROLOGÍA ANIMAL, INMUNOLOGÍA Y PROFILAXIS. FIEBRE
AFTOSA.
VIROLOGÍA ANIMAL, INMUNOLOGÍA Y PROFILAXIS. SÍNDROME
REPRODUCTIVO Y RESPIRATORIO PORCINO (PRRS)
VIROLOGÍA ANIMAL, INMUNOLOGÍA Y PROFILAXIS. INFLUENZA
ANIMAL.
VIROLOGÍA ANIMAL, INMUNOLOGÍA Y PROFILAXIS. LENGUA
AZUL.
VIROLOGÍA
ANIMAL,
INMUNOLOGÍA
Y
PROFILAXIS.
CALICIVIRUS.
VIROLOGÍA ANIMAL, INMUNOLOGÍA Y PROFILAXIS. RESPUESTA
INMUNE DE PECES.
GRUPOS DE OTROS ORGANISMOS QUE REALIZAN ACTIVIDADES
EN EL CISA-INIA
OPI.: CBMSO – CSIC: FIEBRE AFTOSA.
OPI.: CBMSO – CSIC: RESPUESTA INMUNE FRENTE A FIEBRE
AFTOSA.
GRUPOS DE OTROS DEPARTAMENTOS DEL INIA QUE REALIZAN
ACTIVIDADES EN EL CISA-INIA
ANIMALARIO. PATOLOGÍA
EXPERIMENTAL. PATOLOGÍA
ANIMAL.
SERVICIO DE SECUENCIACIÓN
SERVICIO DE SEGURIDAD BIOLÓGICA Y MANTENIMIENTO
5
EPIDEMIOLOGÍA Y SANIDAD AMBIENTAL
COMPONENTES
Cámara Pellisso, Susana
Carballo Santaolalla, Matilde
Esperón Fajardo, Fernando
Iglesias Martin, Irene
Muñoz Reoyo, Mª Jesús
Torre Reoyo, Ana de la
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. Relación de la exposición a contaminantes con presencia de patologías en
animales.
2. Desarrollo de sistemas de valoración de efectos toxicológicos
3. Valoración toxicológica de sustancias y efluentes.
4. Modelos epidemiológicos de prevención de la entrada de enfermedades
infecciosas animales. Análisis de riesgo.
PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I
•
•
•
Sanidad Animal- Ambiental. Exposición y valoración de efectos en
poblaciones animales: peces, aves y mamíferos.
Detección y valoración de efectos mediante metodología biológica y
procedimientos combinados químico-biológicos.
Valoración sanitario ambiental de sustancias, productos químicos , vertidos y
efluentes.
6
PROYECTOS
Código: REN2002-04162-C02-02/MAR Título: Valoración del estado sanitario de 3
especies de cetáceos residentes en el archipiélago canario: Physeter macrocephalus,
Tursiops truncatus y Globicephala macrorhynchus.
Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I
Duración: 2002-2005
Investigador responsable: Muñoz Reoyo, Mª Jesús
Principales resultados
Estudio de la contribución de contaminantes ambientales en la aparición de patologías
en animales:
A.- Priorización del riesgo de efluentes en la isla de Gran Canaria
Adaptación de Procedimientos WET para la identificación y priorización de efluentes
potencialmente peligrosos para el medio marino. Identificación de las fracciones
responsables de la toxicidad de cada vertido. Se detectaron los principales puntos de
emisión contaminante al medio marino y los principales agentes responsables de la
toxicidad aguda de los efluentes y determinados micro-contaminantes orgánicos que
contribuían a la toxicidad crónica.
Se han realizado avances en el procedimiento metodológico que ha permitido
identificar compuestos presentes en nano-concentraciones utilizando sistemas de
concentración. También se han empleado diferentes bioensayos para detectar efectos
subletales utilizando ensayos crónicos y de teratogenia.
Se ha desarrollado un protocolo especifico para el análisis y priorización del riesgo de
efluentes.
B.- Valoración de la exposición de poblaciones de cetáceos residentes a los
contaminantes ambientales y su contribución en la aparición de patologías.
Se procedió a la valoración toxicológica de los residuos de contaminantes (orgánicos e
inorganicos) en tejidos de animales varados. Esta se realizó considerando (I) la
concentración que se relaciona con efectos que podrían ser esperados, incluyendo
reproductivos, cancerigenos, mutagénicos e inmunotóxicos, (II) la distribución tisular,
(III) el contenido en cada una de las tres especies y (IV) las edades o desarrollo
morfológico.
Se realizó una comparación con las mismas especies de otras áreas geográficas y con los
datos de la toxicidad descritos para otras especies de mamíferos. Se valoro los
resultados obtenidos con los patrones de comportamiento, de acumulación y
distribución tisular existentes. Los resultados de este estudio suministran un patrón
diferencial de residuos con referencia a otras áreas.
C.- Estudio virológico de virus presentes en tejidos de cetáceos.
Se ha colaborado en el rastreo sistemático de virus en muestras de tejidos del banco de
tejidos de cetáceos varados, que tuvieran lesiones compatibles con virus. Para ello se
realizo la inoculación en líneas celulares convencionales de macerados de estos tejidos,
para observar efecto citopático, microscopia electrónica para comprobar estructuras de
morfología compatible con partículas víricas, y PCRs universales de Herpesvirus,
Morbilivirus y Calicivirus.
D.- Adaptación de nuevos métodos inmunológicos para la evaluación de la respuesta
inmune en cetáceos
Se ha procedido a la valoración inmunotoxicológica de las concentraciones tisulares de
compuestos tóxicos, como metales pesados y compuestos organoclorados, de conocido
carácter inmunotóxico. Se realizo mediante ensayos para valorar la estructura inmune
en sangre periférica (caracterización de poblaciones de linfocitos, estableciendo unos
7
valores basales de subpoblaciones mediante citometría de flujo con marcadores de
superficie celular), y la funcionalidad (linfoproliferación y respuesta a mitógenos).
PUBLICACIONES
Artículos Revistas SCI
Carballo, M, Aguayo, S, de la Torre, A., Muñoz, MJ. 2005 . Plasma vitellogenin levels
and gonadal morphology of wild carp (Cyprinus carpio L) in a receiving rivers
downstream of Sewage Treatment Plants . Science of Total Environment 341 (1-3):
71-79.
Jaber, J. R. ; Pérez, J.; Carballo, M.; Arbelo, M.; Espinosa de los Monteros, A.; Herráez,
P.; Muñoz, MJ.; Andrada, M.; Rodríguez M.; and Fernández, A. 2005. Hepatosplenic
large cell immunoblastic lymphoma in a bottlenose dolphin (Tursiops truncatus) with
hight levels of polychlorinated biphenyl congeners. Journal of Comparative Pathology
132 (2-3):242-247
Carballo M., Jiménez JA., de la Torre A, Roset J., Muñoz MJ. 2005. A survey of
potential stressor-induced physiological changes in carp (Cyprinus carpio) and barb
(Barbus bocagei) along the Tajo River. Environmental Toxicology 20(2): 119-125
Otros artículos
De la Torre, A; Muñoz, MJ, Carballo, M. 2005. Evaluación medioambiental.
Evaluación ecotoxicológica. Repercusión ambiental. En: Toxicología Ambiental:
Seguridad Química. E. de la Peña y E. Gómez, eds. Asociación Española de
Toxicología. Madrid. CD-ROM. ISBN: 84-609-4429-8.
Sánchez-Vizcaíno, JM; de la Torre, A; Martínez, B. 2005. Análisis del riesgo potencial
de entrada y difusión de la fiebre aftosa en España. CERSA. ISBN: 84-89456-69-0
Monografía: Las emisiones de gases en el sector porcino. Mayo 2005. Directora de la
monografía: Dra. MJ Muñoz. Número 87. PORCI. Aula Veterinaria. Tratado de ganado
porcino. Grupo Luzán 5, División Veterinaria. Madrid. ISSN: 1130-8451. 2005.
Muñoz, M.J.. 2005 “La Gestión ambiental de hoy”. Trasferencia de tecnología.
Anaporc, 28-30. Número 18,
Martínez-Salvador, A; de la Torre, A; Sánchez-Vizcaíno, JM. 2005.Distribución
geográfica de la Lengua Azul. Ovis 95. 25 – 29 Ed. Luzán.
De la Torre A, Carballo M, García E, Muñoz MJ. 2005. Ecotoxicología . Toxicología
de Postgrado. ISBN 84-600-9848-6. CD. Área Toxicología de Sevilla. M. Repetto Ed.
España.
8
Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 4
Tesis Doctorales
Fernando Esperón Fajardo (2005) “Contaminantes ambientales en odontocetos de las
Islas Canarias. Implicaciones sanitarias”. Universidad Complutense de Madrid. Facultad
de Veterinaria. Noviembre, 2005. Calificación: Cum Laude por unanimidad. Directoras:
M.J. Muñoz Reoyo y M. Carballo Santaolalla
Suficiencia Investigadora
Susana Cámara Pelliso.(2005) “Adaptación de nuevos métodos inmunológicos para la
evaluación de la respuesta inmune de cetáceos”. Universidad Complutense de Madrid.
Facultad de Veterinaria.
OTRAS ACTIVIDADES
I Curso Internacional de Postgrado. Experto Universitario en Toxicología. Área de
Toxicología. Universidad de Sevilla. Dirige: Dr. Manuel Repetto. Coordinadora: M.J.
Muñoz. Enero-Octubre 2005.
II Curso del Curso Internacional de Postgrado: Curso de Finalización del Master en
Toxicología. Área de Toxicología. Universidad de Sevilla. España. Coordinadora: M.J.
Muñoz. Enero-Octubre 2005.
Curso de Tercer Ciclo Doctorado sobre: “Entradas de nitrógeno en el suelo”. Organiza:
Prof. Bermúdez. Dpto. Ecología. Facultad de Biológicas de la UCM. 1 crédito (10
horas). Madrid, Febrero, 2005
Curso de Tercer Ciclo Doctorado. Organizado Dpto. de Morfología, Facultad de
Veterinaria de Las Palmas de Gran Canaria. Febrero-Marzo, 2005
Curso de Tercer Ciclo Doctorado sobre Bioseguridad: “Puntos críticos sanitarioambientales en explotaciones agropecuarias”. “Análisis de riesgo de enfermedades
infecciosas”. Organizado Dpto. de Sanidad Animal de la Facultad de Veterinaria de la
UCM. Impartido en la Facultad de Veterinaria de la UCM. Febrero- Abril 2005.
Curso sobre Evaluación de efectos. Metodologías biológicas. Organizado por INEMETSIA. Madrid. 14 Marzo, 2005.
Curso sobre Control de plagas y vectores biológicos. “Sistemas GIS como herramienta
de modelización y previsión del riesgo”. Organizado por el Ayuntamiento de Madrid.
Madrid, Mayo, 2005.
Curso de Doctorado: Fundamentos de toxicidad celular y molecular. “Evaluación de
efectos medioambientales”. Departamento de Nutrición, Bromatología y Toxicología.
Facultad de Biología. U. Alcalá de Henares. Madrid, Mayo, 2005.
9
Curso sobre Fundamentos y Técnicas de Evaluaciones Ecológicas Rápidas. Organiza:
Parques Nacionales. MMA. Aranjuez, Madrid, Septiembre 2005.
"IVX Curso Internacional sobre Enfermedades Exóticas". Centro de Investigación en
Sanidad Animal, CISA-INIA. Valdeolmos. Financia: AECI-INIA. 2-30 Noviembre de
2000, 120 horas lectivas. Director del curso Marisa Arias Neira. Coordinadora del
Curso: Matilde Carballo Santaolalla. Con la colaboración especial de la Facultad de
Veterinaria de Córdoba. Profesores del Curso: Investigadores del CISA, así como
Profesores, investigadores y profesionales de otras Instituciones y Universidades de
España.
Colaboraciones Científicas con otros organismos e instituciones.
Centro de Ciencias Medioambientales. CSIC.
ETSI Agrónomos de Madrid.
ETSI Minas de Madrid.
F. de Biológicas de Universidad Complutense de Madrid
F. de Biológicas de la Universidad de Salamanca
F. de Farmacia en la Universidad de Alcalá de Henares
F. Veterinaria de la UCM.
F. Veterinaria de la ULPGC.
Comité Técnico de Normalización del AEN/CTN 77 Medioambiente SC Suelos.
10
ENFERMEDADES TRANSFRONTERIZAS Y EMERGENTES.
DESARROLLO Y CONTROL DE ENFERMEDADES
INFECCIOSAS
COMPONENTES
Arias Neira, Marisa
Blanco Lavilla, Esther
Brun Torres, Alejandro
Fernández Pacheco, Paloma
Fernández Pinero, Jovita
Gallardo Frontaura, Carmina
García Casado, María Ana
Gemma Lorenzo
Iglesias Hidalgo, Javier
Llorente, Alicia
Martín Folgar, Raquel
Martín Lluch, Mercedes
Martín Martín, Elena
Nieto Martínez, Raquel
Robles Suárez, Ana
Salguero Bodes, Javier
Sánchez Martín, Miguel Angel
Sánchez-Arévalo Almena, Ana
Sotelo, Elena
Vázquez Ruiz, Belén
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. Actividades de investigación y desarrollo tecnológico, formación científicotécnica y cooperación internacional con especial atención a las enfermedades
transfronterizas y emergentes con mayor riesgo de introducirse o extenderse en
el territorio nacional.
2. Conocimiento de las enfermedades infecciosas animales y de las enfermedades
emergentes (su patología y patogenia), y de los patógenos que las producen (su
caracterización inmunológica y molecular).
PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I
•
•
•
•
•
Desarrollo, estandarización y mejora de métodos de diagnóstico para el
diagnóstico de enfermedades infecciosas, transfronterizas, de interés
económico y sanitario.
Desarrollo de metodologías de diagnóstico para la vigilancia, el control y
erradicación de enfermedades infecciosas de los animales de interés para el
Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación, y el Ministerio de
Defensa.
Actividades como Centro Mundial de Referencia para la Oficina
Internacional de Epizootías (OIE) en Peste Porcina Africana y Peste Equina
Africana.
Actividades como Laboratorio Comunitario de Referencia de Peste Porcina
Africana.
Actividades de apoyo científico-técnico e investigación como Laboratorio
Nacional de Referencia de Peste porcina Africana, Enfermedad Vesicular
porcina, Peste Porcina Clásica y Lengua Azul.
11
PROYECTOS
Código y título: OT01-002. Desarrollo de metodologías para diagnóstico de la Peste
Porcina Africana, diagnóstico de enfermedades exóticas y actuaciones ante emergencias
sanitarias.
Entidad financiadora: INIA
Duración: 2001-2006
Investigador responsable: Arias Neira, Marisa
Código: CT2001-02216 QLK2 Título: African Swine Fever: Improved diagnostic
methods and understanding of virus epidemiology and virus-host interactions
Entidad financiadora: UE
Duración: 2001-2005
Investigador responsable: Arias Neira, Marisa
Código: ILRI2003-001 Título: Memorando de entendimiento entre el INIA y el ILRI International Livestock Research Institute- del CGIAR (Nairobi, Kenya) para el
desarrollo de nuevos ensayos de diagnóstico y control epidemiológico de patógenos
víricos del ganado en África Sub-Sahariana.
Entidad financiadora: ILRI-CGIAR
Duración: 2004-2006
Investigador responsable: Arias Neira, Marisa
Código: UE-LR PPA/03 Título: Laboratorio Comunitario de Referencia de Peste
Porcina Africana
Entidad financiadora: UE
Duración: 2003-2006
Investigador responsable: Arias Neira, Marisa
CONVENIOS
Código: CC03-035 Título: Convenio entre el INIA y la Facultad de Veterinaria de la
Universidad Complutense de Madrid, para la realización de prácticas
Entidad financiadora: INIA
Duración: 2004-2008
Investigador responsable: Arias Neira, Marisa
CONTRATOS
Código: NBQ20050267B Título: Contrato con la Fábrica Nacional de la Marañosa para
la asistencia técnica para el diagnóstico de virus de interés en defensa
Entidad financiadora: Ministerio de Defensa
Duración: 2005-2006
Investigador responsable: Arias Neira, Marisa
Principales resultados
Desarrollo de nuevas metodologías para el diagnóstico de enfermedades infecciosas y/o
exóticas de alto riesgo para España:
•
•
Desarrollo de metodologías diagnósticas basadas en técnicas de detección
molecular para Enfermedades vesiculares.
Desarrollo de una nueva técnica de RT-PCR convencional y una técnica de
RT-PCR a tiempo real, altamente sensibles y específicas, para la detección
universal del virus de la Peste Equina Africana, válidas para su empleo en
diferentes muestras clínicas.
12
•
Puesta a punto de un método para la detección mediante RT-PCR del virus
de la Fiebre del Valle del Rift, para su adaptación a sistemas de tiempo real
en un solo paso.
• Desarrollo, estandarización y validación de los nuevos métodos de
diagnóstico serológico de la Peste Porcina Africana (PPA) desarrollados en
el CISA basados en el uso de las proteínas recombinantes del VPPA p32,
p54 y pp62. Validación de las técnicas serológicas desarrolladas analizando
sueros africanos.
• Diseño de primers para identificación específica de aislados de VPPA en
muestras recogidas en África. Validación de procedimientos para análisis por
técnicas de diagnóstico molecular de muestras de suero, tejidos y garrapatas
de origen africano.
• Caracterización clínica y patológica de aislados africanos de Peste porcina
africana.
• Caracterización clínica, patológica y de protección con mutantes de
delección de Peste porcina africana.
• Estandarización de estudios de epidemiología molecular de aislados
europeos y africanos del VPPA basados en el estudio de la Región Central
Variable (CVR) del genoma.
• Desarrollo y mantenimiento de una base de datos de secuencias del VPPA
incluido también dentro de las actividades del CISA cómo centro de
referencia de la OIE y de la Unión Europea.
• Inicio de los estudios para la valoración de filtros comerciales FTA
(Whatman) en la recogida y almacenamiento de muestras de sangre
infectadas con el virus de la Peste Porcina Africana (PPA) y su posterior
detección mediante técnicas de PCR.
Otras actividades como Laboratorio de Referencia
Investigación epidemiológica; asistencia a Laboratorios de las CC.AA en enfermedades
para las cuales el CISA es Laboratorio Nacional de Referencia. Asistencia a laboratorios
de la UE; y a distintos paises a nivel mundial en materia de investigación diagnóstica de
PPA.
• Armonización y estandarización de metodologías de diagnóstico.
NRL-PPA: Organización del Ensayo colaborativo interlaboratorial como Centro
Nacional de Referencia de PPA para la armonización de técnicas diagnósticas
serológicas. Preparación de un panel de sueros y envío de reactivos de PPA a los
laboratorios regionales participantes. Álava, Albacete, Algete, Badajoz,
Barcelona, Burgos, Cáceres, Ciudad Real, Colmenar Viejo, Córdoba, Cuenca,
Gerona, Gijón, La Pobla del Segur, León, Lérida, Logroño, Lugo, Murcia,
Navarra, Palma de Mallorca, Reus, Santander, Segovia, Soria, Talavera de la
Reina, Tenerife, Valencia, VIC, Vizcaya, Zamora y Zaragoza.
NRL-EVP: Organización del Ensayo colaborativo interlaboratorial como Centro
Nacional de Referencia de EVP para la armonización de técnicas diagnósticas
serológicas. Preparación de un panel de sueros y envío de reactivos de PPA a los
laboratorios regionales participantes. Álava, Albacete, Algete, Badajoz,
Barcelona, Burgos, Cáceres, Ciudad Real, Colmenar Viejo, Córdoba, Cuenca,
Gerona, Gijón, La Pobla del Segur, León, Lérida, Logroño, Lugo, Murcia,
Navarra, Palma de Mallorca, Reus, Santander, Segovia, Soria, Talavera de la
Reina, Tenerife, Valencia, VIC, Vizcaya, Zamora y Zaragoza.
13
EUCRL-OIEWRL–PPA: Organización del II y III Ensayo colaborativo
interlaboratorial como Centro Europeo y mundial de Referencia de PPA para la
armonización de técnicas diagnósticas serológicas y virológicas. Preparación de
un panel de reactivos de PPA, sueros y tejidos, y envío a los laboratorios
nacionales de referencia: Austria, Bélgica, Chipre, Dinamarca, Finlandia,
Francia (2), Alemania, Grecia, Hungría, Irlanda, Italia (2), Latvia, Lituania,
Holanda, Noruega, Polonia, Rumania, Eslovaquia, Eslovenia, UK, Suiza y
EEUU.
CRL-PPA: Organización de agenda y documentos de trabajo para el “Annual
Meeting of African Swine Fever Laboratories”. May 12- 15, 2005, Bruselas,
Belgium.
Transferencia de tecnología de técnicas de diagnóstico serológico y molecular
del VPPA a laboratorios de países del Este de África.
Transferencia de tecnología de técnicas de diagnóstico serológico y molecular de
la Peste porcina Africana, Peste Equina Africana y Peste porcina Clásica a
laboratorios e Instituciones de distintos paises Iberoamericanos a través del "XIV
Curso Internacional sobre Enfermedades Exóticas".
Participación en el Ensayo Colaborativo Interlaboratorial de PPC promovido por
el laboratorio de Referencia Europeo (Hannover) para la armonización de
tecnologías virológicas y serológicas para el diagnóstico de Peste Porcina
Clásica y evaluación de las técnicas de detección molecular desarrolladas en
CISA.
Validación de Kits comerciales: Evaluación del kit de diagnóstico Competition
ELISA Ingezim PPA Compac (INGENASA 11.PPA K3) para la detección de
anticuerpos específicos del VPPA. Los principales objetivos fueron determinar
la sensibilidad y especificidad del kit y la influencia del tratamiento térmico de
las muestras analizadas.
•
•
•
•
•
Estudios de experimentación “in vivo” con aislados de Peste Porcina
Africana, Peste Porcina Clásica y Enfermedad Vesicular para caracterización
patológica y estudios de patogenia; producción de reactivos biológicos para
los laboratorios de referencia.
Producción, y distribución de reactivos de diagnóstico para los programas de
vigilancia epidemiológica de PPA y EVP en España - reactivos para distintas
técnicas de diagnóstico serológico- más de dos millones de
dosis/enfermedad). Existen informes anuales de actividad detallados de
Laboratorios de Referencia.
Producción, y distribución de reactivos de diagnóstico de PPA y PEA como
Laboratorio Comunitario y Mundial de Referencia, a distintos países de EU,
África y Europa no comunitaria. Más detalles en informes anuales a la OIE,
y EU.
Transferencia Tecnológica de las tecnologías desarrolladas a distintos países
de Ibero América a través del Curso Internacional sobre Enfermedades
Exóticas y de Workshop on ASF diagnosis.
Participación en la colaboración en la redacción del capítulo referente a la
PPA de la próxima edición del Manual of Standards for Diagnostic Tests and
Vaccines de la OIE, en el que se ha incluido el método de PCR de la PPA
descrito por Agüero et al. (J. Clin. Microbiol., 41 (9): 4431-4434, 2003) e
íntegramente desarrollado y estandarizado en el CISA.
14
PUBLICACIONES
Artículos en Revistas SCI
Rasmussen, T.B.; Uttenthal, Å.; Fernández, J.; Storgaard, T. (2005) Quantitative
multiplex assay for simultaneous detection and identification of Indiana and New Jersey
serotypes of Vesicular Stomatitis Virus. Journal of Clinical Microbiology, 43 (1): 356362.
Gallardo, C., Blanco, E., Rodríguez, JM., Carrascosa, A.L., and Sánchez-Vizcaíno J.M.,
“Antigen properties and diagnostic potencial of African swine fever virus protein pp62
expressed in insect cells”. Journal of Clinical Microbiology (Vol. 44, No. 3, 1489-95)
Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 6
Tesis Doctorales
Jovita Fernández Pinero (2005). Desarrollo y estandarización de técnicas de PCR
múltiple para el diagnóstico diferencial de enfermedades infecciosas animales de
importancia económica”, Departamento de Biología Molecular, Facultad de Ciencias,
Universidad Autónoma de Madrid. Dra. Maria Luisa Arias Neira y Dra.Montserrat
Agüero García.
OTRAS ACTIVIDADES
Organización de Cursos
Organización del "XIV Curso Internacional sobre Enfermedades Exóticas". Centro de
Investigación en Sanidad Animal, CISA-INIA. Valdeolmos. Financia: AECI-INIA. 230 Noviembre de 2000, 120 horas lectivas. Director del curso Marisa Arias Neira.
Coordinadora del Curso: Matilde Carballo Santaolalla. Con la colaboración especial de
la Facultad de Veterinaria de Córdoba. Profesores del Curso: Investigadores del CISA,
así como Profesores, investigadores y profesionales de otras Instituciones y
Universidades de España.
Organización del Workshop on African Swine Fever Diagnosis. Centro de Investigación
en Sanidad Animal, CISA-INIA, Valdeolmos. 17-19 Octubre 2005. Países participantes:
Alemania, Austria, Bélgica, Bulgaria, Dinamarca, Eslovenia, Eslovakia, Grecia,
Hungría, Italia, Irlanda, Letonia, Lituania, Noruega, Países Bajos, Polonia, Rumanía,
Suecia
15
ENFERMEDADES TRANSFRONTERIZAS Y EMERGENTES.
DIAGNÓSTICO E INMUNOPROFILAXIS
COMPONENTES
Blanco Lavilla, Esther
Gallardo Frontaura, Mª Carmen
Gómez Gómez, Concepción
Izquierdo Gil, Ana
Llorente Herranz, Alicia
Martín Folgar, Raquel
Quintana-Lacaci Sanz, Bárbara
Soler Sánchez, Alejandro
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. Investigación y desarrollo en diagnóstico e inmunoprofilaxis de enfermedades
infecciosas
PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I
•
•
•
Desarrollo de nuevos métodos de diagnóstico para enfermedades vesiculares
y Peste Porcina Africana: Se siguen varias estrategias: i) Obtención de
anticuerpos monoclonales frente a PPA para su utilización en el diseño de
nuevos ensayos y para la obtención de reactivos para detección virológica
del VPPA Ii) Obtención de proteínas β-galactosidasa quiméricas, para su
utilización como biosensores, en la detección específica de anticuerpos
frente a VFA, EVC y PPA.
Estudio de la respuesta inmune inducida frente al VFA y PPA: En los
hospedadores naturales de ambas enfermedades (el cerdo) se estudia la
respuesta inmune inducida tras la inoculación con diferentes aislados de
ambos virus. I) VFA; La respuesta humoral se estudia analizando titulo de
anticuerpos neutralizantes, isotipo de los Ac generados, Ac totales medidos
por ELISA frente a virus completo o péptidos sintéticos. La respuesta celular
se caracteriza mediante la realización de ensayos de linfoproliferación,
análisis de las citoquinas inducidas, análisis por FACS de subpoblaciones
celulares implicadas en respuesta inmune. Además mediante RT-PCR Real
Time se cuantifica el RNA viral presente en diferentes tejidos y muestras. II)
PPA; se determina la presencia de Ac totales mediante ELISA e
Inmunoblotting, así como los isotipos producidos. Análisis de Ac específicos
frente a diferentes proteínas recombinantes (p54, p32, pp62, p72).
Determinación del título de Ac inhibidores de hemoadsorción. La respuesta
celular se evalua determinando la capacidad de respuesta linfoproliferativa
frente a mitógenos inespecíficos (ConA, PMA, PHA, etc), asi como la
producción de citoquinas.
Desarrollo de nuevas vacunas frente al VFA y PPA: Se estudia el potencial
de varias estrategias vacunales para ambas enfermedades, principalmente
mediante la utilización de péptidos sintéticos y cápsidas vacías (VFA) o
mediante inmunización DNA o proteínas recombinantes (PPA). En ambos
16
casos se llevan a cabo diferentes experimentos de inmunización en los cuales
se evalúa la respuesta inmune inducida por las diferentes estrategias
diseñadas así como se determina la capacidad de protección frente al desafío
viral.
PROYECTOS
Código: AGL2004-07857-C03C02/GAN Título: Caracterización de nuevos
inmunógenos del virus de la Peste porcina africana: Estudio de la respuesta inmune
inducida en cerdo
Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I
Duración: 2004-2007
Investigador responsable: Blanco Lavilla, Esther
Código CT2003-503603 SSPE Título: Improvement of Foot and Mouth disease control
by ethically acceptable methods based on scientifically validated assays and new
knowledge on FMD vaccines, including the impact of vaccination
Entidad financiadora: UE
Duración: 2004-2007
Investigador responsable: Blanco Lavilla, Esther
Código: WT 75813 Título: “Control of African Swine Fever Virus (ASFV) through
improved understanding of the epidemiology of the disease and construction and testing
of recombinant and attenuated virus vaccines”.
Entidad financiadora: Wellcome Trust
Duración: 2005-2010
Investigador responsable: Martínez Escribano, José Angel
PRINCIPALES RESULTADOS:
•
•
•
•
•
•
Obtención de biosensores basados en la proteína recombinante βGalactosidasa, capaces de detectar específicamente anticuerpos frente a el
virus de la Fiebre Aftosa, que permiten diferenciar animales infectados de
vacunados.
Desarrollo de un nuevo kit de diagnóstico serológico de la PPA basado en el
uso de proteínas recombinantes.
Análisis epidemiológico y caracterización molecular de aislados de VPPA.
Identificación de regiones genómicas que permiten diferenciar aislados
virales muy similares.
Análisis molecular de dos aislados de PPA procedentes de dos regiones
diferentes de Uganda. Establecimiento de relaciones filogenéticas de ambos
aislados con otros aislados de PPA africanos y de otros orígenes.
Diferenciación de ambos aislados por análisis molecular. Caracterización del
fenotipo de ambos aislados (hemoadsorbente).
Desarrollo de una vacuna peptidica (dendrímero TB) frente al VFA capaz de
proteger totalmente cerdos desafiados con el virus homólogo.
Obtención y caracterización preliminar de anticuerpos monoclonales frente a
las proteínas p32 y p54 del VPPA.
17
PUBLICACIONES
Otros artículos
Raquel Martín-Folgar Carmina Gallardo, A.Izquierdo, A.Llorente y E. Blanco.
“Lengua azul: una enfermedad reemergente”. Revista Mundo Ganadero 173 (Enero
2005). Pag. 27-32
OTRAS ACTIVIDADES
Asistencia a reuniones internacionales:
•
•
Asistencia a reunión proyecto Wellcome, invitada por la coordinación del
proyecto, en Londres. Noviembre 2005.
Asistencia a Reunión proyecto CT2003-503603 SSPE en Bruselas.
Noviembre 2005
18
ENFERMEDADES TRANSFRONTERIZAS Y EMERGENTES.
FIEBRE DEL VALLE DEL RIFT
COMPONENTES
Brun Torres, Alejandro
Lorenzo Alguacil, Gema
Martín Folgar, Raquel
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. Desarrollo de métodos para el diagnóstico de la Fiebre del Valle del Rift .
2. Valoración de nuevas estrategias vacunales.
3. Estudios de patogenia e inmunidad.
PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I
•
•
•
•
Desarrollo de métodos moleculares (one step RT-PCR en tiempo real) para
la detección del virus de la FVR
Desarrollo y caracterización de anticuerpos monoclonales frente a antígenos
estructurales del virus de la FVR y herramientas moleculares para el análisis
de la respuesta inmunológica frente al virus de la FVR
Valoración de la respuesta inmunológica frente a vacunas DNA y estrategias
de prime boosting (DNA-MVA), en modelos ovino y murino.
Establecimiento de modelos murinos de infección para el estudio de
patogenia del VFVR
PROYECTOS
Código: GR2004/SAL/0466 Título: Valoración de la respuesta inmunológica inducida
frente a antígenos del virus de la Fiebre del Valle del Rift mediante inmunización con
DNA en ovinos.
Entidad financiadora: Comunidad Autónoma de Madrid Duración: 2005-2006
Investigador Responsable: Brun Torres, Alejandro
Principales resultados
En las etapas iniciales del proyecto GR/SAL/0466 se han obtenido diversas
construcciones genéticas en diferentes sistemas de expresión eucariota y procariota. Las
construcciones codificando las tanto las glicoproteínas (G1/G2) del VFVR como la
nucleoproteína (N) viral, o combinaciones de las mismas, bajo control de promotor
eucariota se han utilizado en ensayos de valoración de la respuesta inmunológica en
ratones Balb/c. Las combinaciones que generaron una mejor respuesta cualitativa se
inocularán en grupos de ovinos con el objeto de valorar el tipo de respuesta
inmunológica generada, tanto a nivel humoral como celular.
19
En combinación con el grupo de la Dra. Sarah Gilbert (University of Oxford, Wellcome
Trust Centre for Human Genetics), se están generando vectores MVA recombinantes
que expresan las glicoproteínas G1 y G2, así como su precursor G1/G2 y la
nucleoproteína N. Se valorará su aplicación en estrategias de prime (DNA) boost
(MVA) en colaboración con el ILRI de Nairobi (Kenia). Convenio INIA-ILRI
Finalmente se ha puesto a punto un método para la detección mediante RT-PCR de
secuencias específicas del virus, para su adaptación a sistemas de tiempo real en un solo
paso.
PUBLICACIONES
Artículos en Revistas SCI
Castilla, J., Gutiérrez-Adán, A., Brun, A., Pintado, B., Salguero, F.J., Parra, B., Díaz
San Segundo, F., Ramírez, M.A., Rábano, A., Cano, M.J. and Torres, J.M., (2005).
Transgenic mice expressing bovine PrP with a four extra repeat insert mutation show a
spontaneous, non-transmissible, neurodegenerative disease and expedited course on
BSE infection. Febs Letters 579: 6237-6246
Castilla, J., Brun, A., San Segundo, F., Salguero FJ., Gutiérrez-Adán, A., Pintado, B.,
Torres JM. (2005). Vertical transmission of BSE prions evaluated in a transgenic mouse
model. Journal of Virology 79, 8665-8669.
Gutiérrez-Adán, A., Castilla, J., Brun, A., Ramírez, M.A., Salguero, F.J., Parra,
B., Torres, J.M., Pintado, B., (2005). Transgenic models to study BSE. Transgenic
Research 14:346-347.
Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 4
OTRAS ACTIVIDADES
•
•
•
Coordinador de Workpackage “Vaccine technologies”. Red europea de
Excelencia EPIZONE. Coordinación y armonización de tareas de
investigación llevadas a cabo por diversos laboratorios europeos con el
objeto de desarrollar futuras estrategias de vacunación frente a enfermedades
de interés veterinario en las que no existen vacunas o su desarrollo puede ser
mejorable.
Tutor de Esther Sánchez Freire, Finnova 2005.
Profesor en el "XIV Curso Internacional sobre Enfermedades Exóticas".
Centro de Investigación en Sanidad Animal, CISA-INIA. Valdeolmos.
Financia: AECI-INIA. 2-30 Noviembre de 2000, 120 horas lectivas. Director
del curso Marisa Arias Neira. Coordinadora del Curso: Matilde Carballo
Santaolalla. Con la colaboración especial de la Facultad de Veterinaria de
Córdoba. Profesores del Curso: Investigadores del CISA, así como
Profesores, investigadores y profesionales de otras Instituciones y
Universidades de España.
20
BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR: BIOLOGÍA
MOLECULAR Y CELULAR DE PRIONES
COMPONENTES
Alamillo Gordo, Elia
Cano Benito, Mª Jesús
De la Losa Román, Nuria
Espinosa Martín, Juan Carlos
González Torres, Lucía
Hervas Moyano, Mª Eugenia
Martín González, Sergio
Morales Camarzana, Mónica
Padilla de Beer Danielle, Alejandra
Parra Arrondo, Beatriz
Relaño Ginéz, Aroa
Rodríguez Benito, J. Antonio
Torres Trillo, Juan Mª
Villa Díaz, Ana
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. El objetivo general del grupo es avanzar en el conocimiento de la biología de los
priones mediante el desarrollo de modelos basados en ratones transgénicos y
cultivos celulares que expresan diferentes secuencias de la PrP.
PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I
•
•
•
•
Desarrollo de bioensayos de alta sensibilidad para la detección de priones y
el diagnostico de las enfermedades producidas por estos agentes infecciosos.
Estudio de los elementos moleculares que determinan la transmisión y la
barrera de especie de los priones.
Estudio de los elementos moleculares implicados en la replicación y en la
patogénesis de los priones
Diseño y evaluación de nuevas estrategias terapéuticas contra los priones.
PROYECTOS
21
Código: EET2001-4217-C02-02 Título: Inmunoterapia aplicada a enfermedades
producidas por priones
Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I
Duración: 2002-2005
Investigador responsable: Torres Trillo, Juan Mª
Código: CT2002-01309 QLK3 Título: European project to study BSE strain in sheep.
Entidad financiadora: UE
Duración: 2003-2007
Investigador responsable: Torres Trillo, Juan Mª
Código: CT2001-01333 QLRT Título: Improved bioassays for TSE agents based on the
bank vole, wild rodent species highly susceptible to scrapie, and its possible role in
scrapie epidemiology
Entidad financiadora: UE
Duración: 2002-2006
Investigador responsable: Torres Trillo, Juan Mª
Código: EET2002-05140 Título: Estudio de la transmisibilidad de la EEB y del scrapie
a la especie porcina
Entidad financiadora: Plan Nacional de I+D+I
Duración: 2003-2006
Investigador responsable: Torres Trillo, Juan Mª
Código: EET2002-05168-C04-02 Título: Estudio neuropatológico de un modelo
experimental murino de encefalopatía espongiforme bovina
Entidad financiadora: Plan Nacional de I+D+I
Duración: 2003-2008
Investigador responsable: Brun Torres, Alejandro
Código: CT2004-506579 FOOD PRO Título: Network of Excellence of the Prion
diseases “Neuroprion”.
Entidad financiadora: UE
Duración: 2003-2008
Investigador responsable: Torres Trillo, Juan Mª
CONVENIOS
Código: CC05-02 Título: Convenio de Colaboración entre el INIA y el Instituto Grifols
S.A. para la preparación de un homogenado de cerebro de Hamster inoculado con la
cepa de prion 263K.
Entidad financiadora: Instituto Grifols S.A.
Duración: 2005- 2007
Investigador responsable: Torres Trillo, Juan Mª
Código: CC05-036 Título: Cooperation agreement between INIA, Bio-rad and the
commissariat à l’energie Atomique for the development of a blood test to identify
animals that are carriers of the q171 genotype in the ovine prp gene based on the 2A11
monoclonal antibody
Entidad financiadora: Bio-Rad
Duración: 2005- 2007
Investigador responsable: Juan Mª Torres Trillo
Principales resultados
22
En general, los proyectos han avanzado de acuerdo al calendario previsto.
Hemos podido demostrar que la inmunogenicicidad de la PrP se ve incrementada
cuando se presenta fusionada al peptido señal de transporte al lisosoma (LIMPII).
Paralelamente se han generado ratones transgénicos que expresen el gen de la PrP con
mutaciones asociadas a patología con el fin de desarrollar modelos biológicos que
mimeticen las diferentes formas etiológicas de las encefalopatías espongiformes
descritas en humanos.
• Ratones transgénicos expresando la PrP humana con la mutación E200K
(CJD)
• Ratones transgénicos expresando la PrP humana con la mutación D178N
(FFI)
• Ratones transgénicos expresando la PrP humana con la mutación A117V
(GSS).
Se ha finalizado la caracterización de BSE antes y después de pasar por oveja en ratones
transgenicos que expresan la PrP bovina. Esta caracterización nos ha permitido concluir
que este modelo permite discriminar entre BSE y scrapie en oveja demostrando que
BSE después de pasar por la obeja mantiene características de BSE pero con un claro
aumento de su virulencia lo que tiene importantes implicaciones en sanidad animal y
humana. Por otra parte, hemos generado ratones transgenicos que expresan la PrP
humana M129M y V129V. Estos animales se han inoculado con diferentes aislados de
BSE, BSE pasado por oveja y scrapie para su caracterización.
Hemos conseguido desarrollar ratones transgénicos que expresan el gen de la PrP del
campañol. Estos ratones están siendo analizados en relación a su susceptibilidad a BSE
y a scrapie lo que nos permitirá concluir si los elementos determinantes de la
susceptibilidad diferencial a BSE mapean en el gen de la PrP o si por el contrario son
elementos no asociado a la secuencia de la PrP.
Se ha confirmado la elevada barrera de transmisión que presenta la especie porcina a la
infección con BSE. Los experimentos de infección de los ratones transgenicos que
expresan PrP porcina siguen avanzando y confirmando hasta el día de hoy la
imposibilidad de infectar estos ratones scrapie utilizando varios inoculos de distinto
origen. Una alta barrera de transmisión parece evidente para Scrapie en cerdo, pero no
podemos descartar que en los próximos meses aparezca algún positivo, aunque con
tiempos de incubación muy largos.
Se han obtenido muestras a los diferentes tiempos de inoculación y se está procediendo
a su análisis mediante técnicas histopatológicas e inmunohistoquímicas. Igualmente a
partir de muestras tomadas a diferentes tiempos se ha procedido a la extracción de RNA
tisular para la obtención de cDNAs y su posterior marcaje con sondas Cy3
fluorescentes. Estos cDNAs marcados serán empleados para la hibridación de
microarrays comerciales Debido a los largos tiempo de incubación, característicos de
estas enfermedades, aún no se tienen resultados dignos de mención.
Además de permitirnos afianzar nuestras relaciones con el resto de los 52 grupos de
investigación europeos integrados en la Red Neuroprion, nos ha permitido realizar
importantes avances en los temas en los que nuestro grupo está implicado.
23
Hemos determinado algunas características bioquímicas y biológicas de BSE que solo
son dependientes de cepa y que son independientes de la secuencia de la PrP de cada
especie. Esto nos ha permitido proponer un sistema de diagnostico diferencial de EEB
en otras especies (especialmente en oveja y humanos).
Hemos obtenido neuroesferas de los diferentes modelos de ratones transgénicos
generados previamente en el laboratorio y estamos estudiando su susceptibilidad a la
infección con priones.
Hemos obtenido células madre neurales y embrionarias de ratones nulos para el gen de la PrP y
estamos evaluado su capacidad neuroregenerativa tras su implantación en el cerebro de ratones
afectados de EEB.
Se han obtenido los cerebros de hámster inoculados con 263K y se está procediendo a
su procesamiento.
Hemos confirmado que el monoclonal 2A11 es capaz de discriminar los diferentes
aplotipos del residuo 171 de la PrP y estamos optimizando un test ELISA commercial
para genotipado masivo con la colaboración de Bio-Rad y el CEA.
PUBLICACIONES
Artículos en Revistas SCI
Soto, C., Anderes, L., Suardi, S., Cardone, F., Castilla, J., Frossard, M.J., Peano, S., Saa,
P., Limido, L., Carbonatto, M., Ironside, J., Torres, J.M., Pocchiari, M., Tagliavini, F.
“Pre-symptomatic detection of prions by cyclic amplification of protein misfolding”.
FEBS Lett. 579(3): 638-642 (2005).
Castilla, J., Brun, A., San Segundo, F., Salguero F.J., Gutiérrez-Adán, A., Pintado, B.,
Ramírez, MA., del Riego, L., Torres JM. “Vertical transmisión of BSE prions evaluated
in transgenic mouse model.” J. Viro. 79:8665–8668 (2005).
Gavín R, N Braun, O Nicolas, B Parra, JM Ureña, A Mingorance, E Soriano, JM
Torres, A Aguzzi and JA del Río. PrP(106–126) activates neuronal intracellular kinases
and Egr1 synthesis through activation of NADPH-oxidase independently of PrPc. FEBS
letter 579(19): 4099-4106 (2005).
Castilla, A.Gutiérrez-Adán, A. Brun, B. Pintado, F.J. Salguero, B. Parra, F. Díaz San
Segundo, M.A. Ramírez, A. Rábano, M.J. Cano and J.M. Torres. Transgenic mice
expressing bovine PrP with a four extra repeat octapeptide insert mutation show a
spontaneous, non-transmissible, neurodegenerative disease and an expedited course of
BSE infection. FEBS letter 579 (27): 6237-6246 (2005).
Gutiérrez-Adán A, J. Castilla, A. Brun, M.A. Ramírez, F.J. Salguero, B. Parra, J.M.
Torres, B. Pintado. Transgenic models to study BSE. Transgenic Research 14:346-347
(2005).
Eva Pericuesta, Miguel A Ramirez, Ana Villa-Diaz, Aroa Relano-Gines, Juan M Torres,
Marta Nieto, Belen Pintado, Alfonso Gutierrez-Adan. The proximal promoter region of
24
mTert is sufficient to regulate telomerase activity in ES cells and transgenic animals.
Reproductive Biology and Endocrinology 2006, 4:5
Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 6
Tesis Doctorales
Beatriz Parra Arrondo. (2005) Modelos basados en ratones transgénicos o en cultivos
celulares para el estudio de las encefalopatías espongiformes transmisibles. Universidad
Autónoma de Madrid. Departamento de Biología Molecular. Juan Mª Torres Trillo
OTRAS ACTIVIDADES
Cursos
•
•
•
•
•
Juan María Torres: Profesor en el "IVX Curso Internacional sobre
Enfermedades Exóticas". Centro de Investigación en Sanidad Animal, CISAINIA. Valdeolmos.
Profesor del “Master de Salud Pública” Escuela Nacional de Sanidad. (Juan
Mª Torres Trillo)
Tutor Externo de la asignatura de “Estancias” tutelando 200 horas de
prácticas a alumnos de 2º ciclo de la Fac. Veterinaria de la Univ.
Complutense. (Juan Mª Torres Trillo)
Tutor Beca FINNOVA (Lucia González Torres)
Juan Maria Torres. Member of the executive committee of NoE neuroprion
Informes
•
•
•
•
Juan María Torres. Evaluación de proyectos de investigación:
Varias convocatorias del Plan Nacional de I+D+I
Varias convocatorias de NoE neuroprion
Convocatoria “TSE Research requirements” DEFRA (UK)
Servicios
Juan Maria Torres .Seguimiento y participación en el desarrollo del convenio CC03-034
(INIA-FEDENCA-FUNDACIÓN BIODIVERSIDAD-SYVA)
Estancias en el grupo de personal de otras entidades
•
•
•
•
Dr. Olivier Andréoletti UMR959 INRA-ENVT Institut de la Recherche
Agronomique Toulouse-France (Julio 2005)
Carlos Maluquer de Motes Porta. Dep. Microbiology, Faculty of Biology.
University of Barcelona.
Monica Morales Camarzana. SYVA (Enero-Diciembre 2005)
Julita García. INGENASA. (noviembre de 2004 a 31 de Agosto de 2005)
25
BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR. MÉTODOS
ALTERNATIVOS A LA EXPERIMENTACIÓN ANIMAL
COMPONENTES
Castaño Calvo, Argelia
Cuellar Cuellar, Mª Luisa
Sánchez Nieto, Carlos
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. Métodos alternativos a la experimentación animal.
PROYECTOS
Código: BIO2002-01912 Título: Aplicación y desarrollo de biomarcadores moleculares
en células derivadas de peces como sistemas alternativos de valoración de alteraciones
genómicas.
Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I
Duración: 2002-2005
Investigador Responsable: Castaño Calvo, Argelia
26
BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR. ARENAVIRUS
COMPONENTES
Pérez Martínez, Mª del Mar
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. Identificación de las Dianas Celulares de los Arenavirus y sus implicaciones
PROYECTOS
Código y Título: Identificación de las Dianas Celulares de los Arenavirus y sus
implicaciones
Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I
Duración: 2005-2007
Investigador Responsable: Pérez Martínez, Mª del Mar
27
BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR. BIOLOGÍA
MOLECULAR DE VIRUS RNA
COMPONENTES
Gómez Castilla, Jordi
Diaz Toledano, Rosa Mª
Mena Piñeiro, Ignacio
Correo electrónico:
OBJETIVOS
1. Caracterización de las señales de ARN alrededor del ires del virus de la hepatitis
C y los pestivirus animales relacionados para el diseño de un ribozima modular
derivado de la masa p de la canobac.
PROYECTOS
Código: BIO2004-06114 Título: Caracterización de las señales de ARN alrededor del
ires del virus de la hepatitis C y los pestivirus animales relacionados para el diseño de
un ribozima modular derivado de la masa p de la canobac
Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I
Duración: 2004-2007
Investigador Responsable: Gómez Castilla, Jordi
28
BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR. MODULACIÓN DEL
SISTEMA INMUNE POR VIRUS
COMPONENTES
Alejo Herberg, Alí
Ruiz Argüello, Begoña
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. El principal objetivo de este grupo es la caracterización de receptores solubles de
citoquinas y de proteínas de unión codificadas por los poxvirus. Los poxvirus
son una familia de virus DNA de gran tamaño que codifican proteínas únicas
que imitan a las moléculas del sistema inmune del hospedador o que van
dirigidas a componentes clave del sistema inmune. Una estrategia
frecuentemente utilizada por los poxvirus es la expresión de receptores solubles
de citoquinas que son secretados al medio extracelular, donde se unen a distintas
citoquinas celulares, bloqueando su actividad biológica. Así, se han identificado
varios receptores solubles de TNF en miembros de la mayoría de los géneros de
poxvirus, lo cual indica la importancia de la vía del TNF como estrategia
antiviral. Además, el hecho de que virus de diferentes familias hayan
desarrollado estrategias contra las mismas moléculas inmunomoduladoras
demuestra la importancia de éstas en los mecanismos de defensa del hospedador.
Los resultados obtenidos serán particularmente relevantes para determinar la
adaptación de los mecanismos virales de inmunomodulación al hospedador y
por tanto, para comprender mejor su sistema inmune. También podrían
identificar nuevas moléculas inmunomoduladoras. Asimismo, estos resultados
serán importantes para el desarrollo de nuevas estrategias para la generación de
vacunas y tratamiento de enfermedades emergentes.
PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I
•
•
Identificación y caracterización in vitro de receptores solubles de citoquinas
y proteínas de unión codificadas por los poxvirus.
Estudio de la función de los inmunomoduladores virales durante la
infección: ″Mousepox″ como modelo de patogénesis viral.
Principales resultados
Se han caracterizado, in vitro, las proteínas virales CrmB y CrmD. Ambas contienen
cuatro dominios ricos en cisteínas homólogos al dominio extracelular de los receptores
de TNF y una región C-terminal de función desconocida que no se parece a ninguna
proteína celular. Estudios previos del laboratorio del Dr. Alcamí demostraron, por
primera vez, que estas proteínas no sólo bloquean la actividad biológica del TNF sino
que además unen interleuquina-8. En colaboración con el Dr. A.Alcamí se ha realizado
un screening completo (mediante SPR, BIAcore X) para determinar los posibles
ligandos de estas proteínas y se ha demostrado que ambas unen e inhiben la actividad de
29
algunas quimioquinas. Además, ambas pueden unir TNF y quimioquinas
simultáneamente y por sitios independientes. Estos resultados identifican CrmB y CrmD
como proteínas virales solubles de unión a quimioquinas y describen un nuevo dominio
de interacción con quimioquinas (el dominio C-terminal). Por último, estudios
preliminares in vivo demuestran que estas proteínas tienen un papel inmunomodulador
en la patogénesis viral ya que ratones infectados con virus recombinantes a los cuales se
les ha delecionado la proteína CrmD muestran un fenotipo atenuado.
Se trabaja en estrecha colaboración con el laboratorio del Dr. Antonio Alcamí (Centro Nacional
de Biotecnología, CSIC).
PUBLICACIONES
Artículos en Revistas SCI
B. Costes, M. B. Ruiz-Arguello, N. A. Bryant, A. Alcami & A. Vanderplasschen.
(2005) Both soluble and membrane-anchored forms of Felid herpesvirus 1 glycoprotein
G function as a broad-spectrum chemokine-binding protein. J. Gen. Virol. 86: 32093214.
Libros y capítulos de libros
M. Begoña Ruiz-Argüello, Alí Alejo & Antonio Alcami. (2005) Secreted tumour
necrosis factor inhibitors encoded by poxviruses. SGM Symposium 64: Molecular
pathogenesis of virus infections (Editors P. Digard, A. A. Nash & R. E. Randall).
Cambridge University Press, pp. 269-289.
Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 2
30
VIROLOGÍA ANIMAL, INMUNOLOGÍA Y PROFILAXIS. FIEBRE
AFTOSA
COMPONENTES
Gutiérrez Rivas, Mónica
Molina Polo, Nicolás
Rodríguez Pulido, Miguel Ramón
Saiz Salabardo, Margarita
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. Regulación de la expresión génica e infectividad del virus de la Fiebre Aftosa.
2. Caracterización funcional de las regiones no codificantes del genoma del virus
de la fiebre aftosa (FMDV). Implicación en procesos de replicación y traducción
viral.
3. Estudio de genotipos virales atenuados con potencial vacunal.
4. Estudios de la base del tropismo y virulencia de FMDV.
PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I
•
•
Mutagénesis sobre clones infecciosos y ensayos in vitro e in vivo de los
genotipos variantes.
Ensayos de virulencia en ratón lactante y cerdo
PROYECTOS
Código: RTA03-201 Título: Identificación y estudio de regiones reguladoras en el
genoma del virus de la fiebre aftosa: implicaciones en virulencia y respuesta inmune
Entidad financiadora: INIA
Duración: 2003-2005
Investigador responsable: Saiz Salabardo, Margarita
Código: CT-2002-01719 QLK2 Título: Foot and mouth disease virus: the molecular
basisi of tissue tropism (FMD tropism)”
Entidad financiadora: UE
Duración: 2002-2005
Investigador responsable: Saiz Salabardo, Margarita
Principales resultados
• Identificación de interacciones entre regiones situadas en los extremos 5´ y
3´ del RNA viral.
• Identificación de proteínas celulares que interaccionan con dominios del
extremo 5´ implicados en replicación y traducción.
• Generación y caracterización de mutantes en la región de interacción con
receptores tipo integrina.
Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 1
31
VIROLOGÍA ANIMAL, INMUNOLOGÍA Y PROFILAXIS.
SÍNDROME REPRODUCTIVO Y RESPIRATORIO PORCINO
(PRRS)
COMPONENTES
Núñez Garrote, José Ignacio
OBJETIVOS
1. Realización de estudios de epidemiología molecular de enfermedades de
relevancia en sanidad animal
PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I
•
•
•
•
Epidemiología molecular del virus RNA de importancia en sanidad animal
Virus de la Fiebre Aftosa
Virus de la Peste porcina Clásica
Caracterización genómica del VSRRP
PROYECTOS
Código: AGL2004-06850-C02-02/GAN Título: Variabilidad genómica de cepas del
virus del síndrome reproductor y respiratorio porcino (VSRRP) aisladas en España a lo
largo del tiempo
Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I
Duración: 2002-2005
Investigador responsable: Núñez Garrote, José Ignacio
Principales resultados
Diseño de parejas de primers para la amplificación inicial de la región 5´de la ORF 1a
de distintas cepas del virus del síndrome respiratorio y reproductor porcino (VSRRP).
Empleo de reacciones de RT-PCR con RNAs control para la optimización y puesta a
punto de las condiciones de amplificación mediante distintas estrategias como el uso de
“random primers” para la obtención de cDNA, uso de distintas concentraciones de
MgCl2, empleo de distintas condiciones de los ciclos de amplificación por PCR, así
como el empleo de distintas polimerasas. Para todos los productos amplificados
mediante el empleo de polimerasas sin actividad “proof-reading”, se ha realizado la
amplificación de un segundo producto de RT-PCR para su comparación de secuencias,
en todos los casos se ha observado idéntica secuencia. Obtención de datos de secuencia
de la región comprendida entre los nucleótidos 964 y 1952 (posiciones referidas a
Lelystad virus, número de acceso en EMBL M96262) de seis aislados españoles
proporcionados por el grupo del subproyecto coordinado. El análisis de estas
secuencias permitió obtener el primer alineamiento de una región no estructural de
aislados españoles del VSRRP.
Como parte de la colaboración entre los dos subproyectos, se ha trabajado en la
reconstrucción filiogenética a partir de secuencias de la ORF 5 de 31 aislados españoles,
analizando la evolución temporal de los aislados españoles del VSRRP y hemos
32
establecido unas tasas de fijación de mutaciones para estos virus, todo ello ha permitido
enviar un artículo para su publicación en una revista internacional
OTRAS ACTIVIDADES
Como muestra de la colaboración con la empresa TDI, parte del diseño de los primers
empleados para la amplificación del genoma de VSRRP se ha realizado con la ayuda del
programa Hint-PCR, desarrollado en la empresa TDI (Dopazo and Sobrino J Virol Met.
(1993) 41:157-65).
Se ha colaborado con el grupo del Dr. Fernando Alonso del departamento de
biotecnología del INIA en un ensayo de interacción virus-células del sistema inmune
porcino. Esta experiencia consistió en la inoculación de cerdos con el VSRRP, en el que
nuestra colaboración incluyó la detección del virus en hisopos nasales y faríngeos, así
como en muestras recogidas de sangre y suero a distintos tiempos p.i. por medio de RTPCR para detectar la presencia de virus en estas localizaciones. Debido a la dificultad de
evaluación de los síntomas clínicos en determinados ensayos al reproducir esta
enfermedad, la detección por RT-PCR puede servir de indicativo de replicación viral.
33
VIROLOGÍA ANIMAL, INMUNOLOGÍA Y PROFILAXIS.
INFLUENZA ANIMAL
COMPONENTES
Martín del Burgo, M. Angeles
Real Soldevilla, Gustavo del
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. Epizootiología de la influenza porcina: prevalencia de la enfermedad y
caracterización de los virus circulantes
2. Patogenia de la influenza porcina: factores de virulencia, mecanismos de
transmisión interespecífica
3. Vacunas frente a la Influenza porcina: desarrollo de cepas atenuadas, nuevos
vectores
PROYECTOS
Código: AGL2004-02132 Título: Epizootiología molecular de la Influenza porcina en
España. Desarrollo de nuevas vacunas frente a la gripe porcina
Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I
Duración: 2004-2007
Investigador responsable: Real Soldevilla, Gustavo del
COVENIOS
Código: CC03-017 Título: Caracterización genética y antigénica de cepas virales
aviares presentes en España para las enfermedades de Gumboro, Bronquitis Infecciosa y
Rinotraqueitis Aviar
Entidad financiadora: INPROVO
Duración: 2005
Investigador responsable: Real Soldevilla, Gustavo del
Principales resultados
La situación actual de la Influenza porcina en España es desconocida ya que los últimos
datos sobre su prevalencia son de los años 80. En otros países Europeos, de los que se
disponen datos recientes, se ha constatado un cambio importante en la composición de
las cepas circulantes lo cual tiene consecuencias importantes en el impacto de la
enfermedad y en la eficacia de las vacunas actuales. Asimismo, el cerdo es un
hospedador muy importante desde el punto de vista de la epidemiología de la gripe
humana. La situación actual de alarma ante la aparición de un virus de gripe pandémico
de origen aviar subraya, aún mas, su papel como hospedador intermediario al ser
susceptible a la infección con virus aviares. La rápida evolución genética y antigénica
de los virus de la gripe obliga a realizar un seguimiento epidemiológico continuo para
detectar la aparición de cepas capaces de saltar de especie o con mayor virulencia. Las
vacunas de la gripe también tienen que ser adaptadas en función de las cepas que
circulan en cada momento y lugar. Desde el punto de vista teórico, es esencial conocer
los mecanismos de virulencia, y de adaptación y transmisión a otras especies para poder
34
prever la aparición de virus con mayor potencial patogénico y diseñar las medidas
profilácticas adecuadas. En nuestro laboratorio hemos realizado un estudio
epizootiológico de la gripe porcina en España en colaboración con los laboratorios
Hipra de Amer (Gerona). De los datos resultantes se desprende una alta tasa de
infección y una distribución de cepas diferente a lo esperado. El estudio de las
características antigénicas y genéticas de aislados virales recientes también aporta
información interesante sobre la patogenia de la enfermedad. Por otro lado, estamos
evaluando nuevos métodos de vacunación en colaboración con la Escuela de Medicina
Monte Sinaí de Nueva York en donde han desarrollado métodos originales de
atenuación y de manipulación genética del virus Influenza.
PUBLICACIONES
Otros artículos
Gustavo del Real: La influencia animal: una amenaza para la humanidad"
En la revista: Ganadería. ISSN 1695-1123, Año 5, Nº. 33, 2005, pags. 44-49.
35
VIROLOGÍA ANIMAL, INMUNOLOGÍA Y PROFILAXIS.
LENGUA AZUL
COMPONENTES
Calvo Pinilla, Eva
Ortego Alonso, Javier
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. Desarrollo de Vectores virales Bioseguros basados en genomas de Coronavirus
2. Desarrollo de vacunas recombinantes frente al virus de la Lengua Azul (BTV)
PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I
•
•
•
•
•
•
Expresión de genes de Rotavirus para generar virus like particles (VLPs)
Modificación del tropismo de especie del virus TGEV. Cambio de tropismo
del virus porcino a humano y ratón.
Generación de DNAs desnudos que codifican las proteínas de la la cápsida
externa del virus de la lengua azul.
Generación de virus vaccinia recombinantes (rMVA) para expresar las
proteínas de la cápsida externa del virus de la lengua azul.
Evaluación de las estrategias de vacunación de las combinaciones
DNA/rMVA en modelos animales de laboratorio.
Desarrollo de test de ELISA diferenciales para lengua azul.
Principales resultados
Vectores virales bioseguros basados en genomas de Coronavirus.
Se ha conseguido generar virus TGEV recombinantes que expresan las proteínas VP7,
VP2 y VP6 de rotavirus. Se esta procediendo ahora al estudio de la generación de VLPs
en células infectadas con estos virus recombinantes.
Se han generado virus recombinantes TGEV con tropismo por la especie humana y
murina por intercambio de la proteína de la espícula con el de otros coronavirus con
tropismo por estas especies (NL-63 y MHV respectivamente).
Desarrollo de vacunas marcadas recombinantes frente al virus de la lengua azul (BTV).
Se han generado hasta el momento los cDNAs y virus vaccinia recombinantes que
expresan la proteína VP2 del virus de la lengua azul, serotipo 4 (responsable de los
últimos brotes de este virus en España).
36
OTRAS ACTIVIDADES
Cursos:
Profesor en el "IVX Curso Internacional sobre Enfermedades Exóticas". Centro de
Investigación en Sanidad Animal, CISA-INIA. Valdeolmos. Financia: AECI-INIA. 2-30
Noviembre de 2000, 120 horas lectivas. Director del curso Marisa Arias Neira.
Coordinadora del Curso: Matilde Carballo Santaolalla. Con la colaboración especial de la
Facultad de Veterinaria de Córdoba. Profesores del Curso: Investigadores del CISA, así
como Profesores, investigadores y profesionales de otras Instituciones y Universidades de
España.
37
VIROLOGÍA, INMUNOLOGÍA Y PROFILAXIS. CALICIVIRUS
COMPONENTES
Almanza Reyes, Horacio
Angulo Herrera, Ivan
Bárcena del Riego, Juan
Blanco Lavilla, Esther
Cubillos Zapata, Carolina
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. Desarrollo de vacunas basadas en péptidos sintéticos que mimetizan diversos
sitios antigénicos del VFA y son capaces de estimular linfocitos B y T porcinos.
2. Caracterización inmunogénica de VLPs quiméricas del virus de la enfermedad
hemorrágica del conejo (RHDV) que expresan sitios antigénicos B y T del VFA.
3. Caracterización de la respuesta inmune inducida en el cerdo por los distintos
péptidos y VLPs, seleccionados en los apartados anteriores.
PRINCIPALES LINEAS DE I+D+I
•
•
•
•
Vectores vacunales basados en VLPS quiméricas de calicivirus
Bases moleculares del tropismo celular del calicivirus felino
Análisis de la reactividad cruzada entre pestivirus.
Caracterización genética de cepas virales aviares presentes en España para
las enfermedades de Gumboro, bronquitis infecciosa y rinotraqueitis aviar
PROYECTOS
Código: BIO2002-04091-C03-03. Título: Nuevas estrategias vacunales frente al virus
de la fiebre aftosa y estudio de los mecanismos implicados en la patogenicidad viral”
Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I
Duración: 2002-2006
Investigador responsable: Barcena de Riego, Juan
Principales resultados
Se ha evaluado en cerdos la inmunogenicidad de construcciones de péptidos sintéticos
dendriméricas (MAPs) que incluyen el sitio antigénico A del virus de la fiebre aftosa
(VFA), junto con un epítopo T derivado de la proteína viral 3A. Dichas construcciones
dendriméricas inducen niveles de anticuerpos y respuestas celulares significativamente
mayores que los péptidos lineales correspondientes. En cuanto a las VLPs quiméricas
que expresan sitios antigénicos B y T de VFA, se ha realizado un estudio sobre su
capacidad para interaccionar con células dendríticas (CDs) porcinas. Los resultados
obtenidos indican que las CDs porcinas son capaces de procesar eficientemente tanto las
VLPs nativas de RHDV como las VLPs quiméricas ensayadas. Se comprobó además
que las VLPs promueven incrementos en marcadores de superficie de CDs como
CD80/86 y MHC de clase II, es decir, las VLPs promueven la activación de las CDs
38
LÍNEAS DE INVESTIGACIÓN EN VIROLOGÍA ANIMAL,
INMUNOLOGÍA Y PROFILAXIS. RESPUESTA INMUNE DE
PECES
COMPONENTES
Sánchez Freire, Esther
Tafalla Piñeiro, Carolina
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. Estudio de los mecanismos de defensa antivirales en peces
2. Caracterización de citoquinas en trucha
3. Utilización de citoquinas como adyuvantes en vacunas dna frente a virus en
peces
PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I
•
•
Estudio del sistema inmune antiviral en peces teleosteos. Función de
citoquinas.
Optimización de vacunas frente a virus en peces.
PROYECTOS
Código: AGL2004-07404-C02-02 Título: Vacunas dna en acuicultura: estudio de la
respuesta inmune celular en el modelo trucha arcoiris / rabdovirus
Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I
Duración: 2004-2007
Investigador responsable: Tafalla Piñeiro, Carolina
Principales resultados
Interferón
En colaboración con el grupo del Profesor Secombes de la Universidad de Aberdeen se
han puesto a punto PCRs cuantitativas para determinar los niveles de expresión de tres
formas de interferón (IFN) de tipo I en respuesta a VHSV (IFN1, IFN2 e IFN3) que este
grupo ha identificado. Se han evaluado los niveles de expresión de estos genes en
respuesta a VHSV in vivo (en sangre, riñón, bazo, hígado y músculo), así como in vitro
(en leucocitos totales de riñón y en la línea celular RTG-2).
Se ha realizado un estudio de la expresión de las proteínas Mx inducidas por IFN de
tipo I en respuesta a distintos estímulos. Hasta el momento, se habían caracterizado tres
isoformas de Mx en trucha arcoris (Mx1, Mx2 y Mx3), sin embargo, no se conoce el
papel que cada una de estas isoformas tiene en la respuesta antiviral, ni en la resistencia
inducida por una vacuna. Para intentar comprender la función de cada una de estas
proteínas, hemos diseñado RT-PCRs específicas para cada una de las isoformas. Hemos
inoculado truchas con VHSV, con una vacuna DNA frente a VHSV o con el estímulo
viral Poly I:C, para evaluar la expresión de los distintos Mx en bazo, hígado riñón
39
anterior y músculo. Hemos demostrado que en respuesta a VHSV se inducen las tres
isoformas, aunque en todos los tejidos la expresión de Mx3 es menor. Sin embargo,
cuando los peces se vacunan frente a VHSV, Mx3 es la isoforma que se expresa
mayoritariamente en músculo e hígado. En el bazo de los peces vacunados es Mx1 la
forma mayoritaria, y en el riñón no se induce significativamente la expresión de ninguna
isoforma.
Interleuquina 8
Se está trabajando en el estudio de la actividad de la IL-8 (una quimioquina de tipo
CXC) como adyuvante para una vacuna DNA. Para ello, se ha clonado el gen completo
de la IL-8 en un plásmido de expresión eucariota (bajo el control del promotor CMV).
En primer lugar, se ha comprobado la eficacia de este plásmido (pIL8) en expresar de
forma correcta la IL-8. Hemos visto que tras su inyección intramuscular, la citoquina se
transcribe fundamentalmente en sangre y músculo y es capaz de atraer células inmunes
(fundamentalmente neutrófilos) al sitio de inyección. Una vez comprobada la eficacia
de este plásmido, se han vacunado truchas arcoiris, tanto sólo con una vacuna DNA
frente a VHSV como en conjunción con el pIL8. A distintos tiempos post-vacunación,
se recogieron muestras de hígado, riñón y bazo y se determinó la expresión de distintas
citoquinas pro-inflamatorias (IL-1 y TNF-α), citoquinas fundamentalmente inhibitorias
como son el TGF-β y la IL-11, o la IL-18 (implicada en la proliferación linfocitaria). De
estos trabajos se dedujo que la IL-8 era capaz de modular la respuesta inmune que se
induce con la vacunación, actuando principalmente sobre las citoquinas proinflamatorias (IL-1 y TNF-α), aumentando significativamente sus niveles de expresión.
Estos resultados sugieren que la IL-8 sería capaz de aumentar la inmunogenicidad de la
vacuna DNA, lo cual se está estudiando es estos momentos, y se comentará en el
siguiente informe.
En colaboración con el grupo de la Dr. Sara Pérez-Prieto (Centro de Investigaciones
Biológicas, CSIC, Madrid) se ha realizado un estudio del papel de la IL-1 y la IL-8 en la
coinfección de los virus IPNV e IHNV, que tiene como resultado la inhibición de
IHNV. Se han determinando los niveles de expresión en respuesta a los distintos virus
por separado o cuando están juntos.
PUBLICACIONES
Artículos en Revistas SCI
Tafalla, C., Coll, J., Secombes, C.J., (2005) Expression of genes related to the early
immune response in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) after viral haemorrhagic
septicemia virus (VHSV) infection. Developmental & Comparative Immunology 29(7):
615-626.
Otros artículos
Jiménez, J. Coll, A. Estepa & C. Tafalla (2005) Futuro de las vacunas DNA frente a
virus en acuicultura. Revista Aquatic 23: 20-35.
Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 3
40
GRUPOS DE INVESTIGACIÓN DE OTROS ORGANISMOS QUE
REALIZAN ACTIVIDADES EN EL CISA-INIA
OPI: CBMSO - CSIC
GRUPO DE INVESTIGACIÓN EN FIEBRE AFTOSA
COMPONENTES
Borrego Rivero, Belén
Fernández-Pacheco, Paloma
Ganges Espinosa, Lliliane
Sobrino Castelló, Francisco
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. Desarrollo de vacunas marcadoras basadas en subunidades de virus, empleando
como modelo el virus de la Fiebre Aftosa y el de la Peste Porcina Clásica.
2. Estudio de las bases moleculares de la patogenia de virus animales, empleando
como modelo el virus de la Fiebre Aftosa, con especial énfasis en la
identificación de dianas y estrategias antivirales.
PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I
•
•
•
Respuesta inmune frente al virus de la Fiebre Aftosa en cerdo: desarrollo de
nuevas vacunas.
Estudio de las bases moleculares de la patogenia del virus de la Fiebre
Aftosa
Desarrollo de nuevas vacunas frente al virus de la Peste Porcina Clásica.
PROYECTOS
Código: CT2002-1304 QLK2 Título: Optimizing DNA based vaccination against
FMDV in sheep and pigs (FMDNAVACC)
Entidad financiadora: UE
Duración: 2002-2006
Investigador responsable: Sobrino Castelló, Francisco
Código: BIO2002-04091-C03-02 Título: Estudio de los mecanismos implicados en la
patogenicidad del virus de la Fiebre Aftosa:
Entidad financiadora: UE
Duración: 2002-2005
Investigador Responsable: Sobrino Castelló, Francisco
CONVENIOS
Código: CC05-016 Título: Ayuda a empresas de la CAM para la realización de
proyectos de investigación y desarrollo tecnológico. Desarrollo de una vacuna contra
fiebre aftosa basada en subunidades víricas.
Entidad financiadora: BIONOSTRA SA.
Duración: 2004-2005
Investigador Responsable: Sobrino Castelló, Francisco
41
Principales resultados
Se está caracterizando la respuesta inmune celular que induce el VFA y sus vacunas
convencionales en modelos animales experimentales animales que incluyen un
importante hospedador natural, el cerdo. Esta información está siendo empleada para el
diseño de nuevas vacunas marcadoras basadas en subunidades virales (péptidos,
vacunas DNA y VLPs heterólogas) y el análisis de su inmunogenicidad en modelos
animales. Algunas de las estrategias desarrolladas están siendo también empleadas para
el desarrollo de nuevas vacunas frente a otra importante enfermedad viral animal, la
peste porcina clásica.
Se trabaja, también, en el análisis funcional de distintas proteínas virales en la
internalización, el ciclo de multiplicación y los mecanismos que median la
patogenicidad del VFA en cultivos celulares y modelos animales. En particular, se
estudia la implicación funcional de proteínas no estructurales, como 3A, en el la
virulencia y rango de hospedador del virus. Para ello se están caracterizando las
interacciones de proteínas del virus con elementos celulares empleando ensayos de
expresión transitoria y estable en líneas susceptibles, así como las propiedades
biológicas de mutantes obtenidos utilizado clones infecciosos.
PUBLICACIONES
Artículos en Revistas SCI
De Oliveira, E., Jiménez-Clavero, M.A., Núñez, J.I., Sobrino, F. and Andreu, D. (2005)
Analysis of the immune response against mixotope peptide libraries related to foot-andmouth disease virus. Vaccine. 23, 2647-2657.
Ganges, L., Barrera, M., Núñez, J.I., Blanco, I., Frias, M.T., Rodríguez, F. and Sobrino,
F. (2005) A DNA vaccine expressing the E2 protein of Classical swine fever virus
elicits T cell responses that prime for rapid antibody production and total protection
upon viral challenge. Vaccine. 23, 3741-3752.
Díaz de Arce, H., Ganges, L., Barrera, M., Naranjo, D., Sobrino, F., Frías, M. and
Núñez, J.I. (2005) Origin and evolution of viruses causing classical swine fever in
Cuba. Virus Res. 112, 123-131.
Núñez, J.I., Fussi, P., Borrego, B., Brocchi, E., Pacciarini, M.L. and Sobrino, F. (2005)
Molecular epidemiology of the 1993 Italian foot-and-mouth disease outbreak. Arch.
Virol. ISSN:0304-8608 (Paper) 1432-8798 (Online). DOI:10.1007/s00705-005-0585-y.
Issue:Online First .
Novella IS., Gilbertson DL, Borrego B., Domingo E., Holland JJ. Adaptability costs in
immune escape variants of vesicular stomatitis virus.Virus Res. 2005 Jan;107(1):27-34.
Libros y capítulos de libros
Carrasco, L., y Sobrino, F., Picornaviridae. En: Carrasco, L., y Almendral, J.M., (eds.).
(2005) Virus patógenos. Editorial Hélice.
Diplomas de Estudios Avanzados, 2005, (Dpto. Biología molecular, UAM):
42
Raúl Postigo Fernández: funcionalidad de las proteínas no estructurales del VFA, y sus
implicaciones en los fenómenos de virulencia y patogenicidad.
Mónica González Magaldi: Análisis bioquímico y funcional de la proteína 3A del virus
de la fiebre aftosa.
Horacio Serrano: Análisis de la selección de variantes virales en animales inmunizados
con vacunas sintéticas frente a la fiebre aftosa.
OTRAS ACTIVIDADES
Tutorías
Seckin Soya, del Departamento de Ingeniería Genética de la Facultad de Ingeniería
Universidad de Ege, Turquís. Julio 2005. (Belén Borrego)
Otros
Belén Borrego: Miembro de la Comisión de Evaluación de Ganadería y Pesca de la
ANEP (Agencia Nacional de Evaluación y Prospectiva) dentro del Programa Ramón y
Cajal y Juan de la Cierva 2005.
43
GRUPO DE INVESTIGACIÓN DE OTROS ORGANISMOS QUE
REALIZAN ACTIVIDADES EN EL CISA-INIA
OPI.: CBMSO – CSIC
GRUPO DE INVESTIGACIÓN EN RESPUESTA INMUNE FRENTE
A FIEBRE AFTOSA
COMPONENTES
Díaz San Segundo, Fayna
Ojosnegros Martos, Samuel
Sanz-Ramos Rojo, Marta
Sevilla Hidalgo, Noemí
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
Estudio de la respuesta inmune temprana frente al virus de la fiebre aftosa
(VFA)
Interacción de VFA con células dendríticas (DCs).
Estudio de la heterogeneidad de subpoblaciones virales en relación con sitios de
replicación in vivo.
PROYECTOS
Código: AGL2004-00499 Título: Estudio de la respuesta inmune innata en la infección
con el virus de la fiebre aftosa (VFA): papel de las células dendríticas y natural killer
(NK).
Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I
Duración: 2004-2007
Investigador responsable: Sevilla Hidalgo, Noemí
Principales resultados
Con el objetivo de evaluar las características de la respuesta inmune temprana en
hospedadores naturales, el cerdo, frente a la infección con VFA, se diseñó un
experimento en el que 20 cerdos hembra Swiss White Landrace fueron inoculados con
105 UFP del VFA C-S8c1 y se fueron sacrificaron en grupos de 2 a distintos días postinoculación (dpi): 1, 2, 3, 5, 7, 10, 14 y 17 dpi. Cuatro cerdos se inocularon con PBS
como animales control. Se obtuvieron PBLs (peripheral blood lymphocytes) y se
marcaron con anticuerpos anti CD3, CD4, CD8 y CD21 conjugados a un fluorocromo
para poder detectar las distintas poblaciones de linfocitos mediante citometría de flujo.
Asimismo, utilizamos un anticuerpo anti proteína 3A del virus directamente conjugado
por nosotros a un fluorocromo con el fin de detectar aquellas células que estuvieran
infectadas por el virus durante el curso de la infección. Mediante esta técnica se observó
que había una disminución drástica en el número de linfocitos, tanto T como B, en el
pico de la replicación viral (entre 2 y 14 dpi), creando una ventana en la que el animal
está inmunodeprimido y puede ser sensible a múltiples infecciones aún no estudiado en
el caso de VFA. Por otra parte, el marcaje con una proteína anti VFA nos permitió
44
detectar infección en linfocitos. Esto, para el caso de VFA, es la primera vez que se ha
descrito, y parece ser que aplica únicamente al serotipo C (VFA tiene 7 serotipos
distintos entre los cuales no existe protección cruzada) ya que otros serotipos evaluados,
como O y A no infectan linfocitos. Nosotros hemos demostrado esta infección no sólo
mediante citometría de flujo sino por ensayos de centros infecciosos en los que
linfocitos purificados de cerdos infectados se cocultivaron con células BHK
susceptibles a VFA, observándose placas de lisis resultante de la producción viral de
estos linfocitos.
La linfopenia transitoria encontrada se podría atribuir a un “secuestro” de linfocitos en
órganos linfoides. Para descartar esta posibilidad, se realizó inmunohistoquímica con
marcadores de células T y B, obteniéndose una disminución significativa de linfocitos
en órganos linfoides. Mediante técnica de TUNEL se descartó apoptosis en linfocitos
como una posible explicación a la pérdida de los mismos, por lo que los datos apuntan a
una muerte celular debido a infección viral pero que no implica apoptosis. La linfopenia
y depleción linfoide detectada no era total en tanto en cuanto se encontraban linfocitos
circulantes y en tejidos aunque en proporción mucho menor a los animales naive. La
funcionalidad de estos linfocitos se determinó mediante ensayos de linfoproliferación en
respuesta a estimulación con un mitógeno, en los que se determinó que estos linfocitos
no eran capaces de proliferar. Todos los datos en conjunto apuntan a un estado
inmunosuprimido de los animales comenzando a tiempos muy cortos pi, lo que sugiere
que la respuesta inmune innata se encuentra comprometida en algún modo durante la
infección de VFA. Este es uno de los puntos más importantes que se están analizando
actualmente en mi laboratorio. De manera más concreta, nos estamos centrando en el
efecto del virus sobre los linfocitos T, es decir, qué hace el virus en ellos para hacerles
no funcionales.
Como otra línea de investigación en mi laboratorio nos estamos centrando en la
interacción del VFA con células dendríticas, tanto in vivo como in vitro, aunque en este
línea no tenemos resultados concluyentes todavía.
PUBLICACIONES
Artículos en Revistas SCI
Salguero, F.J., Sánchez-Martín, M.A., Díaz-San Segundo, F., de Avila, A. and Sevilla,
N. (2005) Foot-and-mouth disease virus (FMDV) causes an acute disease that can be
lethal for adult laboratory mice. Virology 332: 384-396.
J. Andrade, J. T. Lam, M. Zamora, C. Huang, D. Franco, N. Sevilla, P. J. Gruber, J. T.
Lu and P. Ruiz-Lozano (2205) Predominant fusion of bone marrow-derived
cardiomyocytes. Cardiovasc Res. 68: 387-93.
Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 5
45
OTRAS ACTIVIDADES
Cursos
Noemí Sevilla: tutora externo de la asignatura Estancias del 2º ciclo de la Facultad de
Veterinaria Complutense de Madrid (200h)
Informes
Noemí Sevilla, evaluación de proyectos de investigación:
•
•
Convocatorias del Plan Nacional I+D+I
Evaluador externo del “Research Council Honk Kong Government”
46
GRUPOS DE INVESTIGACIÓN DE OTROS DEPARTAMENTOS
DEL INIA QUE REALIZAN ACTIVIDADES EN EL CISA-INIA
COMPONENTES
Saiz Calahorra, Juan Carlos
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. Colaboración para la experimentación “in vivo” en las instalaciones de BSL3
con el virus del Nilo Occidental (WNV), para llevar a cabo estudios de
patogenicidad, viremia y de respuesta inmunológica en ratones gestantes y no
gestantes
PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I
•
Inoculación del virus del Nilo Occidental (West Nile Virus) en ratones
gestantes y no gestantes. Además de determinar la mortalidad originada en
los distintos grupos de ratones inoculados, también se procedió a la
obtención de tejidos y sueros de los animales a distintos tiempos postinfección para, posteriormente, determinar los niveles de viremia y de
anticuerpos
PROYECTO
Código y título: AGL2004-06071 Título:
Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I
Investigador responsable: Saiz Calahorra, Juan Carlos
47
Duración: 2004-2007
ANIMALARIO. PATOLOGÍA EXPERIMENTAL. PATOLOGÍA
ANIMAL
COMPONENTES
Benavente Pintor, Ángela
Díaz Sansegundo, Fayna
Salguero Bodes, Francisco Javier
Sánchez Lobo, Iria
Sánchez Martín, Miguel Ángel
Toledo Olaya, Ana María
Viva Álvarez, Francisco
Viva Barroso, Emilio
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1. Apoyo clínico y veterinario. Colaboración científica y científico-técnica en
patología animal en experimentaciones “in vivo” de proyectos en ejecución o
colaboración en el CISA.
PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I
•
•
•
Apoyo a grupos de investigación que precisen del reactivo biológico animal
de experimentación para sus fines científicos
Colaboración científica y participación en proyectos I+D+I.
Responsable del Animalario ubicado en la zona de nivel de Seguridad 3,
realizando entre otras las siguientes actividades de carácter general:
o Garantizar el bienestar de los animales presentes en la instalación en
todo momento:Alimentación; ambiente; trato humanitario, analgesia
y anestesia; sacrificio con métodos humanitarios.
o Apoyo clínico y veterinario: Garantizar la salud de los animales
mediante monitorización de las posibles enfermedades, haciendo
cuarentenas, pruebas de laboratorio y observación.
o Gestión de los recursos humanos y materiales disponibles para el
buen funcionamiento.
o Seguir las directrices de la Dirección del Centro, Oficina para la
Seguridad Biológica y Comité de Ética en Experimentación Animal.
Principales resultados
Durante el año 2005 se han llevado a cabo más de 30 ensayos de experimentación “in
vivo”, procedentes de proyectos en ejecución en el CISA y/o colaboraciones con otras
instituciones realizando la gestión necesaria para la realización de los mismos y
realizando apoyo clínico y veterinario. Asimismo en una parte de los proyectos y
colaboraciones se han realizado estudios de colaboración científica y científico-técnica
en patología animal. Estos resultados han dado lugar a distintas publicaciones y se han
presentado a diferentes reuniones y congresos de la especialidad.
48
PUBLICACIONES
Artículos en revistas SCI
Salguero F.J., Sánchez-Martín, M.A., Díaz-San Segundo, F., De Ávila, A., Sevilla N.
Foot and Mouth disease virus causes an acute that can be lethal for adult laboratory mice.
Virology 332/384-396/2005
Sánchez Cordón, P.J., Núñez, A., Salguero F.J., Carrasco L., Gómez-Villamandos J.C.
Evolution of T-Lymphocytes and cytokines expression “in situ” during Classical Swine
Fever . Journal of Comparative Pathology 132/249-260/2005
Núñez, A., Gómez-Villamandos, J.C., Sánchez Cordón, P.J., Fernández de Marco, M.,
Salguero, F.J., Carrasco, L. Expression of proinflammatory cytokines by hepatic
macrophages in acute Classical Swine Fever. Journal of Comparative Pathology 133/2332/2005.
Castilla, J., Brun, A., San Segundo, F., Salguero FJ., Gutiérrez-Adán, A., Pintado, B.,
Torres JM. (2005). Vertical transmission of BSE prions evaluated in a transgenic mouse
model. Journal of Virology 79, 8665-8669.
Castilla, J., Gutiérrez-Adán, A., Brun, A., Pintado, B., Salguero, F.J., Parra, B., Díaz
San Segundo, F., Ramírez, M.A., Rábano, A., Cano, M.J. and Torres, J.M., (2005).
Transgenic mice expressing bovine PrP with a four extra repeat insert mutation show a
spontaneous, non-transmissible, neurodegenerative disease and expedited course on
BSE infection. Febs Letters 579: 6237-6246
Gutiérrez-Adán, A., Castilla, J., Brun, A., Ramírez, M.A., Salguero, F.J., Parra,
B., Torres, J.M., Pintado, B., (2005). Transgenic models to study BSE. Transgenic
Research 14:346-347.
Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 15
49
SERVICIO DE SECUENCIACIÓN
COMPONENTES
Madueño Amor, Encarnación
Nuero García, Oscar
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
1.
Este servicio ofrece sus servicios a investigadores del Centro y de todo el
Instituto, así como a otros OPIs y empresas privadas.
PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I
El servicio de secuenciación del CISA presenta dos tipos de actividades principalmente:
Secuenciación automática de DNA y Análisis de fragmentos de DNA. Incluidas en
ambas técnicas está la obtención de DNA, purificación y cuantificación para su
posterior análisis.
La secuenciación que se está realizando es de dos tipos:
•
•
Microsecuenciación que incluye secuenciación simple ( obtención de
secuencias puntuales muy útiles para los investigadores para comprobar la
existencia de mutaciones, clonaje en el lugar adecuado, etc.) y secuenciación
total de pequeños fragmentos de DNA mediante primer walking.
Macrosecuenciación con este nombre se define la secuenciación de novo o la
resecuenciación tanto de genomas como de grandes fragmentos de DNA. En
ambos casos, esta actividad viene acompañada de la realización de otras
técnicas previas como la sonicación del DNA en fragmentos más pequeños,
subclonaje en vectores y preparación de DNA a gran escala.
Para la secuenciación se pueden utilizar cebadores universales, aportados por el servicio
o cebadores específicos aportados por el usuario. Los reactivos y kits para la
secuenciación son aportados por el servicio.
Se ofrece asistencia técnica para que el usuario pueda consultar cualquier duda sobre los
procedimientos de secuenciación.
El análisis de fragmentos se aplica entre otros en el descubrimiento y validación de
SNPs, detección de mutaciones, detección de heterocigotos, identificación de allelos,
etc.
El servicio de secuenciación del CISA permite potenciar los estudios moleculares
dirigidos a la diagnosis y prevención de patógenos animales de alto riesgo, exóticos y
con gran impacto económico; así como también los estudios moleculares derivados de
la investigación básica llevada a cabo por todo el personal investigador del INIA.
Pretende facilitar las actividades del CISA en el campo de la biología molecular en
todos sus aspectos: identificación de aislados y nuevas cepas virales en caso de nuevos
brotes epidémicos, estudios de filogenia viral, estudios de mutaciones virales, etc.
50
Así mismo, participa en el desarrollo diagnóstico en sanidad animal, publicaciones y
establecimiento de nuevas colaboraciones con otros centros de investigación.
Interviene directamente en los estudios de mejora genética de especies domésticas y la
conservación de recursos genéticos animales ayudando a seleccionar los caracteres
relacionados con la calidad de los productos, funcionalidad y resistencia a
enfermedades.
Finalmente, está participando en estudios de detección e identificación de virus, viroides
y fitoplasmas de especies vegetales de interés económico.
Principales resultados
Durante el año 2005 se han realizado 236 registros que comprenden, 1613 reacciones de
análisis de fragmentos, 2508 reacciones de secuenciación de ADN.
51
SERVICIO DE SEGURIDAD BIOLÓGICA Y MANTENIMIENTO
Componentes
Gómez Perochena, Elena
Pascual Álvarez, Gonzalo
Correo electrónico: [email protected]
OBJETIVOS
Este servicio atiende las necesidades surgidas en el CISA en cuanto a controles de
seguridad biológica, mantenimiento de instalaciones y equipos, prevención de riesgos y
controles externos de seguridad.
52