Download FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Herpes Simplex Virus Type 1

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Herpes Simplex Virus Type 1
Ready-to-Use
(Link)
Nº de catálogo IR521
Uso previsto
Para uso en diagnóstico in vitro.
FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Herpes Simplex Virus Type 1, Ready-to-Use (Link), está indicado para su uso en
inmunohistoquímica junto con los instrumentos Autostainer Link. El anticuerpo reacciona con antígenos tanto
específicos como comunes. Este anticuerpo resulta útil para la identificación del virus de herpes simple en material
celular humano (1, 2). La interpretación de los resultados de cualquier tinción o su ausencia debe complementarse
con estudios morfológicos con controles adecuados y debe evaluarla un anatomopatólogo cualificado en el contexto
de la historia clínica del paciente y de otras pruebas diagnósticas.
Resumen
y explicación
El virus del herpes simple (HSV) pertenece a la familia de virus Herpesviridae. El genoma del HSV comprende un
ADN bicatenario lineal de 150 kb encerrado en una nucleocápside que está rodeada por tegumento y una envoltura
compuesta por una bicapa lipídica y distintas glucoproteínas (3, 4). Tras producirse la infección, el HSV se une a la
superficie celular de la célula huésped mediante las glucoproteínas de la envoltura y la envoltura vírica se fusiona
con la membrana (5-8).
El HSV infecta a las células del mucoepitelio o de la piel y el HSV de tipo 1 está asociado principalmente con
infecciones orales, faríngeas, faciales, oculares y del sistema nervioso central, mientras que el HSV de tipo 2 está
asociado con infecciones anales y genitales (3, 5). Tras la infección primaria, el virus del herpes asciende de forma
retrógrada hasta los ganglios del sistema nervioso del huésped. Una vez allí, el virus se duplica, es detectado por el
sistema inmunitario del huésped y permanece en estado latente. Una vez reactivado, el virus viaja a lo largo de las
neuronas sensoriales hasta los sitios mucocutáneos inervados, se duplica y conduce la formación de grupos de
vesículas en los alrededores del sitio inicial de exposición anatómica (3).
Consulte las Instrucciones generales para la tinción inmunohistoquímica de Dako o las instrucciones del sistema de
detección de los procedimientos de IHQ para: 1) Principio del procedimiento, 2) Material necesario pero no
suministrado, 3) Almacenamiento, 4) Preparación de la muestra, 5) Procedimiento de tinción, 6) Control de calidad,
7) Solución de problemas, 8) Interpretación de la tinción, 9) Limitaciones generales.
Reactivo
suministrado
El anticuerpo policlonal de conejo listo para su uso se suministra en forma líquida en un tampón que contiene
proteína estabilizadora y 0,015 mol/L de azida de sodio.
Inmunógeno
Células de córnea de conejo enteras infectadas con HSV de tipo 1 (cepa MacIntyre) solubilizadas con detergente
(línea celular continua).
Especificidad
El anticuerpo reacciona con los antígenos específicos del HSV de tipo 1, así como con los antígenos comunes del HSV
de tipo 1 y de tipo 2. El anticuerpo reacciona con todas las principales glucoproteínas presentes en la envoltura vírica y
con al menos una proteína de la nucleocápside, según se determina mediante inmunoelectroforesis cruzada. Los
anticuerpos contaminantes frente a suero humano y bovino se han eliminado mediante absorción de la fase sólida.
En un ensayo ELISA, el anticuerpo no muestra ninguna reacción con plasma humano y bovino. El anticuerpo no
muestra reactividad cruzada frente al citomegalovirus y el virus de Epstein-Barr.
En inmunofluorescencia indirecta, se puede esperar una débil reactividad cruzada frente al virus de la varicella
zoster si el anticuerpo se utiliza en una concentración relativamente alta. No obstante, no se detectó reactividad
cruzada al analizar el anticuerpo con una dilución de 1:100.
Precauciones
1. Para usuarios profesionales.
2. Este producto contiene azida sódica (NaN3), un compuesto químico altamente tóxico en su forma pura. Aunque a
las concentraciones presentes en el producto no está clasificado como peligroso, la azida de sodio puede
reaccionar con cañerías de plomo y cobre formando acumulaciones de azidas metálicas altamente explosivas.
Una vez desechado el producto, deje correr abundante cantidad de agua para evitar acumulaciones de azidas
metálicas en las cañerías.
3. Al igual que con cualquier producto derivado de fuentes biológicas, deberán aplicarse procedimientos adecuados
de manejo.
4. Utilice el equipo de protección personal adecuado para evitar el contacto con los ojos y la piel.
5. La solución no utilizada debe desecharse con arreglo a las normativas locales, provinciales y nacionales.
Almacenamiento
(117767-002)
Dako Denmark A/S
Almacenar a 2–8 °C No utilizar después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan
en condiciones diferentes a las especificadas, el usuario debe comprobarlas. No existen signos evidentes que
indiquen inestabilidad de este producto. Por lo tanto, los controles positivo y negativo deberán realizarse de manera
simultánea con las muestras del paciente. En caso de observarse una coloración inesperada que no pueda ser
explicada por las variaciones en los procedimientos del laboratorio y se sospeche un problema con el anticuerpo,
comuníquese con la Asistencia Técnica de Dako.
IR521/ES/MNI/2009.12.04 p. 1/3
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Preparación de las
muestras incluido
material necesario
pero no suministrado
El anticuerpo puede utilizarse para marcar cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina. Las muestras
de tejido deben cortarse en secciones de aproximadamente 4 µm.
Se requiere el tratamiento previo con recuperación del epítopo inducida por calor (HIER) usando Dako PT Link (nº
de catálogo PT100/PT101). Para más detalles, consulte la Guía del usuario de PT Link. Se obtienen resultados
óptimos al pretratar los tejidos con EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nº de catálogo
K8000/K8004).
Cortes incluidos en parafina: se recomienda el tratamiento previo de los cortes de tejido fijados en formol e incluidos
en parafina siguiendo el procedimiento de preparación de la muestra 3 en 1 para Dako PT Link. Siga el
procedimiento previo al tratamiento explicado en el prospecto de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High
pH (50x) (nº de catálogo K8000/K8004). Nota: Después de la tinción, se deben deshidratar, enjuagar y montar los
cortes usando un medio de montaje permanente.
Cortes desparafinados: se recomienda el tratamiento previo de los cortes de tejido desparafinados, fijados en formol
e incluidos en parafina usando Dako PT Link y siguiendo el mismo procedimiento descrito para los cortes incluidos
en parafina. Tras la tinción, los portaobjetos deben montarse utilizando un medio de montaje acuoso o permanente.
Los cortes de tejido no se deben secar durante el tratamiento ni durante el siguiente procedimiento de tinción
inmunohistoquímica. Para una mejor adherencia de los cortes de tejidos a los portaobjetos, se recomienda el uso de
FLEX IHC Microscope Slides (nº de catálogo K8020).
Procedimiento de
tinción incluido
material necesario
pero no suministrado
El sistema de visualización recomendado es EnVision FLEX, High pH (Link) (nº de catálogo K8000). Los pasos de
tinción y los tiempos de incubación han sido preprogramados en el software del Autostainer Link. El volumen de
reactivo recomendado es de 1 x 200 µL o 2 x 150 µL por portaobjetos. Consulte la Guía del usuario del Autostainer
Link para ver instrucciones detalladas sobre la carga de portaobjetos y reactivos. Si todavía no están disponibles los
protocolos en la plataforma del Autostainer utilizada, comuníquese con el servicio técnico de Dako. Todos los pasos
de incubación deben realizarse a temperatura ambiente.
Las condiciones óptimas pueden variar según la muestra y el método de preparación, y deberán determinarse
individualmente en cada laboratorio. Si el patólogo encargado de la evaluación desea otra intensidad de tinción, se
pueden ajustar los tiempos de incubación y la elección del sistema de visualización EnVision FLEX/EnVision
FLEX+. Se puede solicitar información a un especialista en aplicaciones de Dako o a un especialista del servicio
técnico para reprogramar el protocolo. Verifique que el rendimiento del protocolo ajustado siga siendo válido
confirmando que el patrón de tinción sea idéntico al descrito en “Características de resultados”.
Se recomienda la contratinción en hematoxilina usando EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (nº de catálogo K8008).
Se recomienda un medio de montaje no acuoso permanente.
Los controles positivo y negativo deberán realizarse de manera simultánea empleando el mismo protocolo que para
las muestras del paciente. El control positivo de tejido debe incluir una lesión con infección por HSV, y las
células/estructuras deben exhibir patrones de reacción como se describe para este tejido en “Características de
resultados” en todas las muestras positivas. El reactivo de control negativo recomendado es FLEX Negative Control,
Rabbit (Link) (nº de catálogo IR600).
Interpretación de
la tinción
Las células marcadas con el anticuerpo muestran una tinción intranuclear fuerte, ocasionalmente difusa.
Características de
resultados
Tejidos normales: este anticuerpo no marca el tejido normal.
Tejidos anormales: el anticuerpo marcó 7/7 tejidos del sistema nervioso central procedentes de pacientes con
encefalitis por herpes simple (1) y 14/14 lesiones esofágicas de pacientes con esofagitis por herpes simple (2). Las
células infectadas en una lesión con HSV muestran una reacción de tinción de débil a fuerte.
Referencias
bibliográficas
1. Debiasi RL, Kleinschmidt-DeMasters BK, Richardson-Burns S, Tyler KL. Central nervous system apoptosis in
human herpes simpex virus and cytolomegavirus encephalitis. J Infect Dis 2002;186:1547-57.
2. Itoh T, Takahashi T, Kusaka K, Kawaura K, Nakagawa Y, Yamakawa J, et al. Herpes simplex esophagitis from
1307 autopsy cases. J Gastroenterol Hepatol 2003;18:1407-11.
3. Fatahzadeh M, Schwartz RA. Human herpes simplex virus infections: epidermiology, pathogenesis,
symptomatology, diagnosis and management. J Am Acad Dermatol 2007; 57:737-63.
4. Grünewald K, Desai P, Winkler DC, Heymann JB, Belnap DM, Baumeister W et al. Three-dimensional structure
of herpes simplex virus from cryo-electron tomography. Science 2003;302:1396-8.
5. Koelle DM, Corey L. Recent progress in herpes simplex virus immunobiology and vaccine research. Clin
Microbiol Rev 2003;16:96-113.
6. Turner A, Bruun B, Minson T, Browne H. Glycoproteins gB, gD, and gHgL of herpes simplex virus type 1 are
necessary and sufficient to mediate membrane fusion in a cos cell transfection system. J Virol 1998;72:873-5.
7. Subramanian RP, Geraghty RJ. Herpes simplex virus type 1 mediates fusion trough a hemifusion intermediate by
sequential activity of glycoproteins D, H, L and B. PNAS 2007; 104:2903-8.
8. Mettenleiter TC. Herpesvirus assembly and egress. J Virol 2002;76:1537-47.
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d ia gn óstic o in vi tro
Co ntie ne sufici en te pa ra
<n > e nsa yos
Fa bri ca nte
Con sul te la s i ns tru cci on es
d e u so
Có di go d el l ote
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