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Genética de los síndromes de muerte súbita en niños mexicanos Dr. Pedro Iturralde Torres Molecular FAF DAVD ST DNS SQTL MCD Canalopatías Cardiacas SAT TVPC SQTC SBr DCC Protocolo de Investigación • Estudiar 17 familias mexicanas con SQTL y alto riesgo de muerte súbita • Identificar familias mexicanas con genes nuevos • Identificar nuevas mutaciones • Estudiar el efecto funcional de las mutaciones encontradas Arbol Familiar Alternancia onda T 35 años 8 años Bloqueo AV 2:1 Muerte Súbita QTc:712ms Probando – Femenino 21meses Taquicardia Helicoidal Técnicas para el Dx Genético Gen 5’ E1 E2 E3 Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) E2 Alelo Paterno E2 Obtención DNA Billones de Copias E5 Muestra Sanguínea Alelo Materno Producto de PCR E4 E2 E2 3’ Plataforma deDiagnóstico Detección Intermedia Genético Secuenciación Cromatografía Líquida Desnaturalizante de Alto Rendimiento Gen (DHPLC) Paciente 2 Paciente 1 E2 E1 Normal 5’ E3 E4 E5 Mutación PCR Patient 2 Patient 1 Alelo Materno E2 CGGGCCCGCGGAGGAGCGGC GGA Alelo Paterno E2 Productos PCR Perfíl Normal Gly Val GGA CGGGCCCGCGGAGGAGCGGC T Anormal Perfíl 3’ QTc:712ms Canales afectados con mayor frecuencia en el SQTL Corriente de Sodio Corriente de Potasio IKS Corriente de Potasio IKR Fenotipo de SQTL3 • Segmento ST largo. Onda T angosta y de inicio tardío asociado a mutaciones en SCN5A • Bloqueo AV 2:1 asociado a mutaciones en: SCN5A, HERG y CACNA1 Lupogazoff et al. Circ Res 89:e16-e21, 2001 Splawski et al. Cell 119:19-31, 2004 Hoorntje et al. Circulation 100:1264-1267, 1999 Zhang et al. Circulation 102:2849-2855, 2000 Canal de Sodio Nav DI DII NH3 DIII DIV COOH SCN5A (Cr 3p21-24) codifica NaV1.5, 2015-2016 AA Topología linear del Nav Nav Nav Nav Subunidades β de canal de sodio Gen Proteina Cr #AA SCNB1 SCNB2 SCNB3 SCNB4 Nav 1 19 Nav 2 11 Nav 3 11 Nav 4 11 268 AA 215 AA 215 AA 228 AA Dominio MutacionalDominio Análisis Transmembranal C-Terminal Dominio N-Terminal SCN4B (Ch11q23.3) AA 1-163 N1 AA 164-185 C22 1 Extracelular AA 186-228 AA 186-197 1 2 4 3 Bloqueador Apertura Canal Normal Nav1.5 L179F Ank B Na + 5 Apéndice Citoplasma 8 Resultados L179F ausente en 800 alelos de referencia • 400 Mexicanos Mestizo • 200 Afro-Americanos • 200 Caucasicos Estudios de Expresión L179F-4 fue construída por mutagénesis dirigida y expresada en forma heteróloga en células HEK293 conteniendo en forma estable SCN5A. SCN5A 1 nA 2.5 ms SCN5A+4 WT 1 nA 2.5 ms SCN5A+ 4 L179F 1 nA 2.5 ms SCN5A, canal Nav1.5 Resultados Se encontró una nueva mutación en SCN4B, ausente en 800 alelos de referencia La mutación co-segrega con la enfermedad. - Autosómica dominante con penetrancia incompleta - Los estudios in vitro muestran incremento en la corriente tardía del canal de sodio, similar al SQTL3. Medeiros A. Circulation 2007;116:134-142. LQT9 Ch 3p25 CAV3 < 1% ST1 Ch 12p13.3 CACNA1C < 1% SAT1 Ch 17q23 KCNJ2 <1% SQTL10 SQTL1 Ch 11q23.3 SCN4B <1% Ch 11p15.5 KCNQ1 30-35% SQTL2 Ch 7q35-36 KCH2 25-30% SQTL3 Heterogeneidad Genética Proteínas Auxiliares Ch 3p21-24 Canales Iónicos En el SQTL de Canales Iónicos SCN5A 5-10% SQTL6 SQTL5 Ch 21q22 KCNE2 <1% Ch 21q22 KCNE1 <1% SQTL4 Ch 4q25-27 ANK2 < 1% Tester … Ackerman. Heart Rhythm 2:507-517, 2005 Iturralde P. J Cardiovasc Electrophysiol 2008;1-6. L1821 del/10. Tan & Iturralde, Cardiovasc Res 2007; 76:409-417. L1821 del/10. SQTL3 Incremento en la corriente iónica SCN5A MCD FA TV Disminución en la corriente iónica DNS SBr1 DCC
