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ELABORACION DE AUTOVACUNAS
FRENTE A
ESCHERICHIA COLI
Y
CLOSTRIDIUM SPIROFORME
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CLOSTRIDIUM SPIROFORME
Y ESCHERICHIA COLI
Escherichia coli y Clostridium spiroforme se asocian
para producir cuadros entéricos de especial gravedad
en conejos de engorde.
Cavidad abdominal de un conejo de cebo con diarrea.
Se observa que las asas yeyunales están congestivas y con contenido
oscuro. La serosa de ciego está completamente hemorrágica. El
contenido cecal es líquido y marrón oscuro y hay gran cantidad de
moco en colon.
Mediante cultivo bacteriológico se aisló Escherichia coli.
También se detectó gran cantidad de Clostridium spiroforme en
el contenido del ciego.
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ELABORACION DE AUTOVACUNAS FRENTE A
E. coli + Cl. spiroforme
Día 1
Cuando el veterinario solicita una autovacuna,
recuperamos las cepas conservadas en el cepario y
las sembramos en medios de crecimiento sólidos.
Si las muestras se han enviado con el propósito de
elaborar una autovacuna, se evita el tiempo de
descongelar las cepas. Se comprueba la pureza de
cada cepa.
Vial de congelación.
Las cepas se guardan congeladas e
identificadas en viales de congelación
durante al menos 5 años.
Al mismo tiempo se prepara un volumen de
medio de cultivo suficiente para fabricar las dosis
solicitadas, aunque la concentración final de
antígeno se estandariza después de realizar el
recuento final de bacterias.
Cada especie bacteriana se crece por
separado.
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ELABORACION DE AUTOVACUNAS FRENTE A
E. coli + Cl. spiroforme
Día 2
Se inocula un pequeño volumen de medio con la
cepa crecida en medio sólido y se obtiene lo que
denominamos un cultivo iniciador. Se incuba a 35ºC
durante 48 horas en anaerobiosis para el
crecimiento de Cl. spiroforme y a 37ºC durante 24
h para E. coli.
La cepa de Cl. spiroforme o
E. coli se recoge con un asa
siembra
para
inocular
volumen de 100 ml de caldo
cultivo.
de
de
un
de
Para conseguir que una bacteria crezca en
anaerobiosis es necesario eliminar el oxígeno no
sólo del ambiente donde multiplicamos la bacteria
sino también del medio líquido en el que crecerá.
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ELABORACION DE AUTOVACUNAS FRENTE A
E. coli + Cl. spiroforme
Día 4
El cultivo iniciador se utiliza para inocular el resto de medio y
obtener el volumen total necesario.
En las primeras horas después de la siembra, las bacterias
se multiplican de un modo exponencial cada pocas horas, justo
hasta que consumen la mayoría de los nutrientes del medio.
En la gráfica se ve como el número de bacterias aumenta muy
rápidamente. Cuando la mayoría de los nutrientes han sido
consumidos la velocidad de multiplicación es mucho menor.
Botella con crecimiento de Cl. spiroforme
o E. coli comparada con una botella sin
inocular. Se observa turbidez y cambio de
color del medio, indicadores de un
crecimiento masivo y abundante que se
cuantificará mediante citometria de flujo.
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ELABORACION DE AUTOVACUNAS FRENTE A
E. coli + Cl. spiroforme
Día 6
El cultivo se inactiva añadiendo formol al medio
que actuará durante otras 18-24 horas antes de
comenzar con la purificación de los antígenos.
Antes de inactivar el cultivo, nos aseguramos de la
pureza y ausencia de contaminación del mismo.
Día 7
Después de la inactivación, hacemos el recuento
total de las bacterias, e.g. mediante citometría de
flujo. Esto nos permite ajustar las concentraciones
bacterianas de modo que en las autovacunas
utilizamos cantidades análogas y reproducibles de
antígeno.
Recuento de bacterias en citómetro.
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ELABORACION DE AUTOVACUNAS FRENTE A
E. coli + Cl. spiroforme
Día 9
Las bacterinas se mezclan y se envasan.
Se hacen los ensayos para confirmar la ausencia de
contaminación.
El producto final se ensaya en diferentes
medios para confirmar la total ausencia de
contaminación.
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AUTOVACUNAS FRENTE A E. coli+ Cl. spiroforme
Recepción
del pedido
(telefono,
web)
Día 1
Receta
Veterinaria
Preparación
del medio de
crecimiento
en
volúmenes
adecuados
Multiplicación
bacteriana, inicial
(por separado)
Multiplicación
bacteriana final
(por separado)
Control de
calidad
Día 10
Día 9
Días 7 - 8
Día 6
Día 4
Día 2
Descongelación
de cepas de E.
coli y Cl.
spiroforme
Inactivación (por
separado)
Preparación
de antígenos
Mezcla de
las
bacterias
Recuento de bacterias
Citometría de Flujo.
Estimación de la carga
antigénica. Ajuste al número
de dosis
Producto
acabado,
envasado
Fin Control
Calidad
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