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Diagnóstico en Genética ¿Qué es lo que se puede diagnosticar? • Mutaciones – Cromosómicas – Genéticas o puntuales – Dinámicas – Del ADN mitocondrial – Microdelecciones o duplicaciones en tándem Orientación al diagnóstico de: • Cromosomopatías: – Hipocrecimiento – Retardo del desarrollo / RM – Dismorfias / malformaciones • Mutaciones puntuales: – Ej.: Acondroplasia • Enfermedades mitocondriales: – Encefalomiopatías mutación Gly380Arg en FGFR3 (4p16) • Consecuencias de las mutaciones – A nivel molecular • alteraciones de la expresión génica (ej. Enfermedad de Friedreich) • alteraciones proteicas (ej. Anemia Falciforme) – A nivel de fenotipos intermedios • alteraciones funcionales (ej. Sd. QT largo congénito, Test del sudor para FQ) • alteraciones del metabolismo (ej. EIM) • alteraciones histológicas (ej. Miocardiopatías Hipertróficas, Distrofias Musculares) – A nivel clínico • Sds. clínicos característicos (ej. Sd. de Down) Anemia Falciforme Alelo normal HbA Alelo Mutante HbS TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS EN GENÉTICA • Genética Clínica, Historia Familiar y Genealogía – – – – Sindromes genéticos Modo de herencia “Sindrome completo” a nivel familiar. Genética de Poblaciones (ej. FMF, Tay-Sachs, HbS) • Exámenes complementarios habituales – Hemograma y extendido de sangre periférica (Enfs. de atesoramiento) – RX (displasias óseas) – Ecocardiograma y ECG (Miocardiopatías, canalopatías) – Estudios funcionales (Conducción nerviosa en neuropatías primarias) • Citogenética – Técnica estándar. – Técnicas de bandeo – Bandeo de alta resolución • Técnicas bioquímicas y determinaciones cuantitativas – EIM (PQ cualitativas, cromatografías semicuantitativas, dosificación de metabolitos, actividades enzimáticas). – dosificación de FP sérica materna (Defectos del tubo neural). – dosificación de Estriol y HCG en sangre materna (Sd. de Down). – Electroforesis de proteínas (HbS). • Biología Molecular – detección directa de mutaciones • necesidad de conocer secuencia del gen. • diversas mutaciones en distintas familias o poblaciones. • no existencia de correlaciones genotipo-fenotipo – detección de marcadores ligados (diagnóstico indirecto) • posible error por recombinación • Conjunción de técnicas – FISH Electroforesis de Hb Distrofias Musculares • Diagnóstico a nivel: – histopatológico: – proteico: Resistencia Proteína C activada • Factor V de Leiden • Bioquímica de la coagulación • Trombofilia Diagnóstico molecular directo Receptor de Andrógenos Detection of 3 bp deletions (CF DF508 and DI507) on a Spreadex EL 300 gel. Lanes: 1 - M3 Marker (Elchrom); 2 CF patient heterozygous for the DI507 mutation (DI507/N); 3 - CF patient with no 3 bp deletion (N/N); 4 CF patient heterozygous for DF508 mutation; 5 - CF patient homozygous for DF508 (DF508/DF508). Distrofia Miotónica tipo I Caracterización molecular (CTG)n >1000, fenotipo congénito 100< (CTG)n <1000, fenotipo clásico 50< (CTG)n <100, fenotipo leve Cromosoma 19 5’ Gen DMPK (CTG)n 3’ UTR 3’ Distrofia Miotónica tipo I Diagnóstico molecular Diagnóstico por Southern blot: Permite detectar amplificaciones grandes N- paciente no afectado A- paciente afectado PCR/ Southern blot: Permite detectar alelos con expansiones cortas ¿Cómo diagnosticar qué gen está mutado en una Distrofia Muscular? Diagnóstico molecular indirecto Ligamiento al X 5 Cm entre marcador y locus de la enfermedad Fluorescent in situ hybridization FISH se usa actualmente ante la sospecha de varios síndromes de microdelección, incluyendo: • • • • • • • • • • 22q deletion syndrome Williams syndrome Prader-Willi syndrome Angelman syndrome Smith-Magenis syndrome Miller-Dieker syndrome Cri-du-chat syndrome Wolf-Hirschhorn syndrome Retinoblastoma Kallmann VARIOS TIPOS DE SITUACIONES DIAGNÓSTICAS • Diagnóstico preimplantacional • Diagnóstico prenatal – – – – Ecografía Técnicas genéticas Amniocentesis Biopsia de Vellosidades Coriales • Screening poblacional – De Recién nacidos • • • • Hipotiroidismo congénito (TSH). PKU. Galactosemia. EOJA – De heterocigotos • Enfs. AR frecuentes en algunas poblaciones (ej.Tay Sachs en judíos, FQ en poblaciones europeas). • Enfs. XR (mujeres posibles portadoras). • Enfs. AD en etapa presintomática (ej. EH, DM). Screening de PKU • Diagnóstico nosológico de enfermedades monogénicas – – – – – – – Hemocromatosis hereditaria LDLR – Hipercolesterolemia Familiar Fibrosis Quística Déficit de alfa 1 antitripsina Sd. de X-frágil Distrofias musculares Hiperplasia suprarrenal congénita • Diagnóstico de marcadores de susceptibilidad y pronóstico en enfermedades multifactoriales – – – – – – – LDLR ApoE MTHFR Factor V de Leiden Protrombina ACE I/D BRCA 1 y 2 Diagnóstico Genética Somática Genética Predictiva Ej.: Enfermedad de Huntington • Diagnóstico de paternidad • Aplicaciones forenses