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TINCIONES
BACTERIANAS
¡Por favor que
quede bien
gramnegativa
señor Gram!
Te
recomiendo
safranina
para darle un
buen tono
http://www.slideboom.com/presentations/86145/TINCIONES_BACTERIANAS
Porque se colorean las
bacterias?
• Visualizarlas mejor
• Aumentando el contraste
entre la bacteria y el medio
que las rodea
• Detalles morfológicos
• Aumentan un poco su
tamaño
Que es un colorante?
• Compuestos orgánicos (la mayoría)
• Poseen afinidad específica por los
materiales
celulares.
Azul de metileno
Cristal violeta
• Segúnsafranina
su naturaleza se unen a
diferentes componentes
Eosina celulares
Fucsina ácida
Comp
Rojo
congo (-):
– Cationicos (+)
Ac nuc y
polisacáridos ácidos.
– Aniónicos (-)
comp (+): proteínas
CLASIFICACION DE LAS
TINCIONES
• Simples:
– 1 solo colorante
– Todo se tiñe igual
– Ejemplos: Tinta china (-), Azul Metileno de
Loeffler, Azul de lactofenol.
• Diferenciales:
– Más de 1 colorante
– Las estructuras celulares se diferencian en
función de los diferentes colorantes.
– Ejemplos: Gram y Ziehl-Neelsen
PRECOLORACION
• Fijación
– Coagulación del plasma
• Calor
• Sustancias qcas (formaldehido, ácidos y
alcoholes)
• Mordiente
– Sustancias que se combinan con un
constituyente celular y lo altera de tal
modo que ahora después de esto el
colorante podrá fijarse al constituyente.
– Ejemplo: Acido tánico, lugol.
I
COLORACION DE GRAM
• Hans Christian Gram
• 1884
• Descubrimiento accidental
• Biopsia de tejido pulmonar
• Algunas bacterias retenían el
colorante después del lavado y otras
no
• Grampositivas
• Gramnegativas
I
¿QUE SE NECESITA?
Colorantes
• Cristal Violeta
• Lugol
• Alcohol-Cetona.
• Safranina.
Otros
• Charola de tinción.
• Asa bacteriológica.
• Frasco lavador.
• Lámina portaobjetos
Muestra bacteriana
• Sólida (agar)
• Líquida (caldo)
• Especímen clínico.
I
¿COMO SE HACE?
1. Extensión
I
¿COMO SE HACE?
2. Coloración
2.1 Violeta de Genciana
1 min
I
¿COMO SE HACE?
2. Coloración
2.2 Lugol de Gram
1 min
I
¿COMO SE HACE?
2. Coloración
2.3 Alcohol Acetona (Decoloración)
(Etanol al 75 % y acetona al 95 %)
15 - 30 seg
I
¿COMO SE HACE?
2. Coloración
2.4 Safranina
30 seg
I
¿COMO SE HACE?
3. Secado
I
¿COMO SE HACE?
4. Observación
4.1 Aplicar aceite de inmersión
I
¿COMO SE HACE?
4. Observación
4.2 M.O con objetivo de 100x
Gramnegativas
Grampositivas
II-P1
COLORACION DE GRAM
Violeta
Safranina
Violeta
Claro
COLORACION DE ZIELH
NEELSEN
• Franz Ziehl (bacteriólogo) y Friedrich
Neelsen (patólogo).
• Tinción diferencial
• Fundamento: Las paredes celulares
de ciertas bacterias contienen ácidos
grasos (por ejemplo, el ácido
micólico) de cadena larga (50 a 90
átomos de C) que les confieren la
propiedad de resistir la decoloración
con alcohol-ácido
VARIANTES
• Clásica
– En caliente
– Para Micobacterias
• Variante de Kinyoun
– En frío
– Para Actinomyces y Nocardia
TECNICA
• Realizar frotis
• Fijar
• Fucsina-fenicada 5 minutos
– Emisión de vapores (no hierva)
• Lavar
• Decolorar con alcohol-ácido (2 min o hasta
decolración total)
• Lavar
• Aplicar azul de metileno (1 minuto).
• Lavar
CONSULTA
• Tinción negativa
• Tinción para esporas
• Tinción de Loeffler
• Rojo Congo