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TINCIONES BACTERIANAS ¡Por favor que quede bien gramnegativa señor Gram! Te recomiendo safranina para darle un buen tono http://www.slideboom.com/presentations/86145/TINCIONES_BACTERIANAS Porque se colorean las bacterias? • Visualizarlas mejor • Aumentando el contraste entre la bacteria y el medio que las rodea • Detalles morfológicos • Aumentan un poco su tamaño Que es un colorante? • Compuestos orgánicos (la mayoría) • Poseen afinidad específica por los materiales celulares. Azul de metileno Cristal violeta • Segúnsafranina su naturaleza se unen a diferentes componentes Eosina celulares Fucsina ácida Comp Rojo congo (-): – Cationicos (+) Ac nuc y polisacáridos ácidos. – Aniónicos (-) comp (+): proteínas CLASIFICACION DE LAS TINCIONES • Simples: – 1 solo colorante – Todo se tiñe igual – Ejemplos: Tinta china (-), Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol. • Diferenciales: – Más de 1 colorante – Las estructuras celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes. – Ejemplos: Gram y Ziehl-Neelsen PRECOLORACION • Fijación – Coagulación del plasma • Calor • Sustancias qcas (formaldehido, ácidos y alcoholes) • Mordiente – Sustancias que se combinan con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora después de esto el colorante podrá fijarse al constituyente. – Ejemplo: Acido tánico, lugol. I COLORACION DE GRAM • Hans Christian Gram • 1884 • Descubrimiento accidental • Biopsia de tejido pulmonar • Algunas bacterias retenían el colorante después del lavado y otras no • Grampositivas • Gramnegativas I ¿QUE SE NECESITA? Colorantes • Cristal Violeta • Lugol • Alcohol-Cetona. • Safranina. Otros • Charola de tinción. • Asa bacteriológica. • Frasco lavador. • Lámina portaobjetos Muestra bacteriana • Sólida (agar) • Líquida (caldo) • Especímen clínico. I ¿COMO SE HACE? 1. Extensión I ¿COMO SE HACE? 2. Coloración 2.1 Violeta de Genciana 1 min I ¿COMO SE HACE? 2. Coloración 2.2 Lugol de Gram 1 min I ¿COMO SE HACE? 2. Coloración 2.3 Alcohol Acetona (Decoloración) (Etanol al 75 % y acetona al 95 %) 15 - 30 seg I ¿COMO SE HACE? 2. Coloración 2.4 Safranina 30 seg I ¿COMO SE HACE? 3. Secado I ¿COMO SE HACE? 4. Observación 4.1 Aplicar aceite de inmersión I ¿COMO SE HACE? 4. Observación 4.2 M.O con objetivo de 100x Gramnegativas Grampositivas II-P1 COLORACION DE GRAM Violeta Safranina Violeta Claro COLORACION DE ZIELH NEELSEN • Franz Ziehl (bacteriólogo) y Friedrich Neelsen (patólogo). • Tinción diferencial • Fundamento: Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen ácidos grasos (por ejemplo, el ácido micólico) de cadena larga (50 a 90 átomos de C) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido VARIANTES • Clásica – En caliente – Para Micobacterias • Variante de Kinyoun – En frío – Para Actinomyces y Nocardia TECNICA • Realizar frotis • Fijar • Fucsina-fenicada 5 minutos – Emisión de vapores (no hierva) • Lavar • Decolorar con alcohol-ácido (2 min o hasta decolración total) • Lavar • Aplicar azul de metileno (1 minuto). • Lavar CONSULTA • Tinción negativa • Tinción para esporas • Tinción de Loeffler • Rojo Congo