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El kits de prueba Veriflow esta certificados
por la AOAC Internacional, la organización
mundial de pruebas de normalización para la
industria alimentaria.
OBJETIVOS:


Tecnología empleada para detección directa y
cualitativa de E. coli O157:H7 en diferentes muestras de
alimentos.
Herramienta que permite garantizar de forma fácil y
confiable el suministro de alimentos seguros, tanto para
fabricantes como para el gobierno regulador.
ESCHERICHIA COLI O157:H7

Es una cepa enterohemorrágica de la bacteria E. coli y
una causa de intoxicación alimentaria debido a la
producción de verotoxina.

La infección conduce frecuentemente a una diarrea
hemorrágica y ocasionalmente a una falla renal
(Síndrome urémico hemolítico).

Afecta principalmente a niños y ancianos.

La transmisión se da a través de la vía fecal oral.
PRUEBA DE PCR:

La reacción en cadena de la polimerasa, es una técnica
de biología molecular empleada para obtener un gran
número de copias de un fragmento de ADN particular,
partiendo de un mínimo; en teoría basta partir de una
única copia de ese fragmento original, o molde.

Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN;
su utilidad es que tras la amplificación resulta mucho
más fácil identificar con una muy alta
probabilidad, virus o bacterias causantes de
una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o
hacer investigación científica sobre el ADN amplificado.
PASOS PARA REALIZAR UNA PCR:
1)
2)
3)
4)
5)
6)
Extracción del ADN deseado
Preparación de la mezcla de reacción (Master
mix)
Separación de master mix en alícuotas y
agregado del ADN de interés
Amplificación en Termociclador
Electroforesis en gel de agarosa
Observación en transiluminador UV
COMPONENTES DE LA MASTER MIX

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


H2O ultrapura
Buffer
Mg+2
dNTPs
Primer forward
Primer reverse
ADN polimerasa
ADN de
interés
Termociclador
REVELADO

Los fragmentos de PCR se revelan mediante
electroforesis en gel de agarosa.
Gel de agarosa y buffer
de corrida TAE o TBE
Siembra 5 µl de
muestra + 2 µl de azul
de bromofenol
INMUNOENSAYO FLUJO LATERAL
Un inmunoensayo es un método analítico que usa
anticuerpos para detectar y medir analítos
espesificos.
 VENTAJAS:
• Anticuerpos específicos permiten la detección del
microorganismo target
• No es necesario purificar la muestra antes de
analizarla
• Requiere pasos mínimos y sencillos de
preparación de muestra comparado con otros
métodos específicos (proteínas).

CARACTERÍSTICAS DE UN INMUNOENSAYO DE
FLUJO LATERAL
Simple
 Rápido
 Sensible
 Económico
 Confiable
 Apto para trabajo de campo

FLUJO LATERAL
PRODUCTOS RAPIDCHEK
DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO:
Veriflow para E. coli O157: H7 representa una clase de diagnostico
ultra-sensible y fácil de usar:
Tecnología de captura de firma de ADN para la detección cualitativa
de la especie E. coliO157: H7.


Esta técnica tiene la capacidad de conservar multiplers genes de E.
coli O157:H7 ofreciendo una precisión superior en comparación con
metodologías actuales.

La tecnología de flujo vertical patentado permite la sensibilidad de
las pruebas de PCR en tiempo real, pero con la facilidad de uso
asociado con los ensayos de flujo lateral. El resultado es un sistema
eficaz y rápida que minimiza la preparación de muestras, agiliza el
tiempo de resultados, mejora la precisión de la prueba, y proporciona
fácil interpretación los datos para el usuario final.
KITS DE PRUEBA VERIFLOW O157:H7
 Mastermix
 Reactivos
 Veriflow
O157: H7 Casetes
 1,5 ml de muestra mBPW o mTSB
 El termociclador
 Se modifica agua de peptona tamponada
(IS mBPW) Grande
 Se modifica caldo de soja tríptico (IS
mTSB) Grane
 Bandeja de carga de PCR
METODOLOGÍA
Enriquecimiento:
Después de 18 horas de enriquecimiento, transferir la muestra de 500
μl a un tubo de 1,5 ml.
Calentar la muestra durante 10 minutos, luego dejar enfriar a
temperatura ambiente.

Amplificación:
Transferir 5 µl de muestra en el tubo de reactivo proporcionado.
Colocar el tubo dentro del termociclador y ejecutar del programa.

Detección:
Retirar el tubo de reactivo del termociclador.
Colocar el contenido del tubo de reactivo en la ventanilla de casete de
prueba.
Esperar 3 minutos y observar los resultados.

RESULTADOS
Determinación
cualitativa de E. coli
O157:H7
VENTAJAS DE LA VERIFLOW:
RAPIDO Y FACIL:
 Reduce la detección tradicional de 120 horas a solo 18 horas.
 NO requiere de purificación de ADN.
 Enriquecimiento de 1-paso para todas las matrices de alimentos.
ALTA SENSIBILIDAD
 La amplificación de múltiples marcadores de genes conservados de E. coli
O157: H7 proporciona una sensibilidad superior.
INCLUSIVIDAD SUPERIOR Y EXCLUSIVIDAD
 Tasa de inclusividad 100%
 Tasa de exclusividad del 100%
ECONÓMICO
 Termociclador compacta reduce la huella de equipos
 Eliminación de los sistemas complejos reduce los costes de equipamiento en un
80% sin sacrificar la eficiencia operativa y la precisión.
 Facilidad de uso con personal menos capacitados para la ejecución del sistema.
VENTAJAS DE LA VERIFLOW
Comparada con la tecnología de flujo
lateral:
Comparada con la tecnología RT-PCR:
Produce resultados 3 min después de la
adición de la muestra.
No hay resultados ambiguos.
Proporciona una mayor sensibilidad de
detección.
No requiere de purificación de ADN o
engorrosos pasos de muestreo.
Formación mínima.
Detecta firmas moleculares permitiendo
una mayor especificidad.
Fácil despliegue.
MUCHAS GRACIAS!!!