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RESUMEN En México el aguacate es un fruto de gran importancia económica, ya que ocupa el primer lugar a nivel mundial en producción con más de 987,323 toneladas anuales (INEGI 2005). Cabe señalar que en la industrialización del aguacate se ocupa la parte comestible del aguacate, desechándose la cáscara y la semilla, pudiendo tener éstas alguna utilidad. Actualmente existe un incremento en las enfermedades crónico degenerativas siendo el principal factor de riesgo el aumento en el consumo de grasas saturadas provenientes de alimentos de origen animal. Se busca que la población inicie el consumo de alimentos de origen vegetal, los cuales contienen ácidos grasos monoinsaturados y poliinsaturados, como los contenidos en el aceite de aguacate. Esto ayuda a reducir la concentración de colesterol en sangre. También a la semilla de aguacate se le atribuyen algunas propiedades farmacológicas. El surgimiento y expansión de las industrias, encargadas de extraer y procesar el aceite de origen vegetal, lleva consigo un incremento en los volúmenes de aguas residuales que se descargan al medio ambiente y que ocasionan severos problemas de contaminación y de salud. En el presente trabajo se llevara acabo estudios de: efecto hipocolesterolemiante del aceite de aguacate obtenido por la tecnología del IPN, a través del desarrollo de diferentes dietas administradas a un modelo biológico (ratón), la evaluación de los nutraceúticos presentes en este aceite, se llevó a cabo el tratamiento biológico del efluente resultante de una industria productora de aceite vegetal y la evaluación de la hepatotoxicidad de la semilla de aguacate. Los resultados más sobresalientes obtenidos en este proyecto son: Se encontró que el aceite de aguacate obtenido por la tecnología limpia desarrollada en el IPN presenta un perfil de ácidos grasos que proporciona cantidades balanceadas de ácidos grasos monoinsaturados y poliinsaturados. Las cantidades de nutraceúticos encontradas en el aceite de aguacate obtenido por la tecnología desarrollada en el IPN, le dan un valor agregado. Se pudo comprobar que el aceite de aguacate obtenido por tecnología limpia en el IPN ayuda a aumentar los niveles de colesterol HDL. Consumiendo el aceite de aguacate producido por la Doctoras Dorantes y Ortiz junto con una dieta hipercalórica no se obtiene una disminución en la concentración de colesterol total. Se obtuvieron enriquecidos microbianos capaces de degradar parcialmente los contaminantes presentes en el efluente industrial tratado fisicoquímicamente (ácidos minerales-filtración). El cultivo microbiano más eficiente removió el 56% de la demanda química de oxígeno. Los resultados del análisis proximal realizado, tanto a la semilla como al pericarpio de aguacate son similares a los informados en la literatura. En la prueba preliminar que se realizó no se encontró que la administración de semilla de aguacate en ratones produzca un daño hepático. Se están montando las técnicas para aislar, caracterizar y purificar los compuestos antifúngicos del pericarpio de aguacate y probar la actividad antifúngica. INTRODUCCIÓN En México las principales causas de mortalidad son las enfermedades isquémicas del corazón (10.9% en mujeres y 10.7% en hombres), y así como la diabetes mellitus (15.4% en mujeres y 10.3% en hombres). Ambas enfermedades tienen como factor de riesgo a la obesidad y el sobrepeso (Instituto Nacional de Salud Pública, 2005) El sobrepeso y la obesidad son factores de riesgos para contraer enfermedades del corazón, hipertensión, diabetes mellitus no dependiente de insulina, enfermedades de la vesícula biliar y algunos tipos de cáncer. La obesidad consiste en un fallo crónico de equilibrar la ingestión de nutrientes con su eliminación (Bray, York y Fisler, 1989). Hay varias causas de obesidad; por un lado, la obesidad puede deberse simplemente a un exceso de consumo de alimentos en relación con los requisitos energéticos. En estos casos los factores hereditarios juegan un importante papel, que puede surgir incluso cuando la alimentación se compone principalmente de carbohidratos. Por otro lado, están aquellos tipos de obesidad en los que la composición de la dieta, principalmente una elevada ingestión de grasas, es el eje central de la alimentación. Cualquiera de estos tipos puede controlarse modificando la alimentación, reduciendo el consumo de alimentos o aumentando la oxidación de los nutrientes (FAO/OMS, 1993) Las hiperlipemias o hiperlipoproteinemias representan la elevación plasmática de las concentraciones de colesterol, de triglicéridos o ambos. Con el término dislipidemia se designan alteraciones de los lípidos plasmáticos que incluyen la elevación del colesterol total y del transportado por las lipoproteínas de baja densidad cLDL, con aumento de la trigliceridemia y descenso del colesterol transportado en las lipoproteínas de alta densidad cHDL (Carmena, 1999) La hipercolesterolemia es la forma de dislipidemia con mayor potencial aterogénico. Existen varias enfermedades, cuyo común denominador es el aumento del colesterol sérico (Villa Poza, 2001) Los ácidos grasos constituyen el factor más importante que determina las concentraciones de lípidos plasmáticos (Bonada y Sola, 1998). Estos se distinguen por el efecto que tienen sobre el colesterol. Los poliinsaturados disminuyen el colesterol plasmático y tienen un efecto hipotrigliceridemiante (Villa et al; 2001), mientras que los monoinsaturados, presentan un comportamiento neutro respecto a las LDL, pero incrementa moderadamente el nivel de las lipoproteínas de alta densidad HDL (FAO/OMS, 1993). El colesterol total (CT) está formado por varias fracciones, el colesterol ligado a las lipoproteínas de baja densidad, el asociado a las lipoproteínas de alta densidad y al de las lipoproteínas de muy baja densidad ,por sus siglas en inglés, C-LDL, C-HDL y C-VLDL, respectivamente ( Villa Poza, 2001) Actualmente los productos naturales y las comidas sanas han recibido mucha atención por parte de la población ya que ayudan al bienestar general además de prevenir diferentes enfermedades (Ramaa et al. , 2006) Con este propósito diferentes tipos de frutas y vegetales están siendo reevaluadas y reconocidas como excelentes fuentes de nutraceúticos, los cuales son alimentos o componentes de los alimentos que tienen un efecto fisiológico definido (Feugang, 2006) Más que otras enfermedades, la etiología de los problemas cardiovasculares presentan diferentes factores de riesgo que pueden ser tratados por medio de la intervención de los nutraceúticos. La capacidad de estos para influenciar positivamente sobre los factores de riesgo de las enfermedades cardiovasculares debe ser reconocida como una enorme oportunidad para el tratamiento de estas enfermedades de alta prevalencia. El uso de estos alimentos reduce el riesgo de efectos adversos y el costo de la salud pública. Dentro de los nutraceúticos que presentan una actividad sobre el manejo de las enfermedades cardiovasculares encontramos a los ácidos grasos- omega-3, productos derivados de soya, fibra dietaria, vitaminas, antioxidantes, fitoesteroles, flavonoides, prebióticos y prebióticos (Ramaa, 2006) Actualmente existe un incremento en las enfermedades crónico degenerativas siendo el principal factor de riesgo el aumento en el consumo de grasas saturadas provenientes de alimentos de origen animal. Se busca que la población inicie el consumo de alimentos de origen vegetal, los cuales contienen ácidos grasos monoinsaturados y poliinsaturados, como los contenidos en el aceite de aguacate. Esto ayuda a reducir la concentración de colesterol en sangre. En diferentes fuentes de información se ha encontrado que el aceite de aguacate tiene efectos sobre el colesterol-LDL, por lo que a través del desarrollo de diferentes dietas administradas a un modelo biológico (ratón) se puede evaluar el efecto hipocolesterolemiante. Por otra parte se debe considerar que durante los procesos de producción de aceites vegetales se generan aguas residuales con una alta concentración de materia orgánica, las cuales pueden ocasionar problemas severos de contaminación y de salud si no son tratadas adecuadamente. Las características fisicoquímicas y los volúmenes de las aguas residuales producidas varían significativamente de una Industria a otra, e incluso se presentan variaciones en las propiedades de los efluentes de una misma Industria. Dichas variaciones se deben a las diferentes operaciones unitarias y procesos químicos que se utilizan durante la extracción y refinación de los aceites, así como a la diferente composición química de los vegetales (Institute of Shortening and Edible Oils, 2002; Azbar y Yonar, 2004). Las aguas residuales de estas Industrias contienen cantidades variables de aceite vegetal debido a que se presentan pérdidas de este material a lo largo de las diferentes etapas del proceso de producción. Además, contienen diversas sustancias químicas que se emplean para la extracción y refinación del aceite (tales como el hidróxido de sodio, ácido fosfórico, ácido sulfúrico y disolventes), así como para la limpieza y sanitización de los equipos (World Bank Group, 1998). El alto contenido de materia orgánica de estos efluentes industriales ocasiona serios problemas de contaminación cuando los efluentes se descargan al medio ambiente sin tratamiento alguno. Los aceites vegetales presentes en estas aguas son contaminantes peligrosos cuando se encuentran en ecosistemas acuáticos, ya que forman películas (natas) sobre la superficie y se depositan en los bordes de los cuerpos de agua, con lo que interfieren con los procesos naturales de oxigenación e iluminación de éstos, además afectan el metabolismo de los organismos vivos y causan finalmente la descomposición de los ecosistemas (El-Masry y col., 2004a; Laws, 1993; Pereire y col., 2002). Los tratamientos fisicoquímicos en la mayoría de los casos son insuficientes para eliminar los aceites de las aguas residuales, por lo que es conveniente aplicar algún proceso biológico para disminuir aun más la carga de contaminantes. Se ha informado que los efluentes industriales que contienen aceites de origen vegetal pueden ser tratados efectivamente si se diluyen con aguas residuales domésticas (Mkhize y col., 2000). Las aguas residuales que contienen aceites han sido tratadas biológicamente utilizando sistemas inmovilizados y sistemas en suspensión. El surgimiento y expansión de las industrias, encargadas de extraer y procesar el aceite de origen vegetal, lleva consigo un incremento en los volúmenes de aguas residuales que se descargan al medio ambiente y que ocasionan severos problemas de contaminación y de salud. Las aguas residuales generadas durante la producción de aceites vegetales poseen un alto contenido de compuestos oleosos, los cuales son considerados como contaminantes peligrosos porque forman películas (natas) sobre la superficie del agua y se depositan en los bordes de los cuerpos de agua, con lo que interfieren con los procesos naturales de oxigenación e iluminación de éstos, afectan el metabolismo de los organismos vivos y conducen finalmente a la descomposición del ecosistema. Los aceites, además, recubren las superficies con las que están en contacto y causan iridiscencia, así como diversos problemas de operación y de mantenimiento de los equipos e instalaciones de las plantas industriales y de las de tratamiento de aguas residuales. Con la finalidad de practicar tecnologías limpias es que se está buscando darle un valor agregado a los subproductos de la industria, por tal razón es importante destacar que a la semilla de aguacate se le atribuyen varias propiedades cosmetológicas y farmacéuticas por ejemplo: en países como Bolivia, Colombia, Ecuador, Honduras, México y Perú la semilla en infusión se utiliza en problemas digestivos, disentería y en algunos de ellos es utilizada como desparasitante. También son empleadas para contrarrestar los efectos del veneno de serpiente (Jíbaros) en Ecuador. En países como Bolivia se utiliza como dilatador del cuello uterino, y en infecciones post parto y en ocasiones se usa como diurético. En Perú, Colombia y Ecuador se utiliza como anticonceptivo. (Pardo, O. 2003) En el área de la cosmetología la semilla tostada y pulverizada se utiliza en el tratamiento de la caída de cabello, para el tratamiento de la caspa y su aceite como humectante (http://www.living-food.com) Considerando que la administración y consumo de un producto debe tener un soporte científico, es importante investigar la alteración que la semilla del aguacate puede causar al organismo. En este trabajo se plantea el estudio del efecto hepatotóxico y la posible alteración que pueda tener sobre la fertilidad en ratones machos. A la semilla de aguacate se le atribuyen algunas propiedades farmacológicas debido a la presencia de ácidos grasos, compuestos polifenólicos y esteroles, y ha sido usada desde épocas precolombinas contra padecimientos tales como dolores musculares, parásitos y micosis (García, 1999). En el 2000 Benavides y col. realizaron un estudio in vivo del efecto del extracto acuoso de la semilla de aguacate al 20% sobre la morfología y el desarrollo de embriones preimplantados de ratón. Los resultados evidenciaron una disminución significativa de embriones normales en los grupos administrados con extracto acuoso de aguacate. También se observó un aumento de embriones deformados (el embrión pierde su forma esférica, además presenta membrana(s) celular(es) rotas), que es de 12,31 % frente a 3,90% en el grupo control. En cuanto al retraso en el desarrollo embrionario se observa un incremento de embriones de 1 a 8 células en el grupo del aguacate y a su vez se observa un descenso en la frecuencia de estadios posteriores como blastocisto expandidos. Algunos autores proponen que el aceite de la semilla de P. americana incrementa la actividad de la fosfatasa alcalina; esta enzima está relacionada con procesos y mecanismos de diferenciación temprana, a partir del estadio de 2 células (Werman et al., 1989), lo que podría alterar el desarrollo embrionario normal. Valeri y Gallo (1953), comprobaron que la semilla contiene una sustancia de tipo gluco-lípido que era tóxica para Sarcina lutea y probablemente contra otras bacterias que determinarían, principios tóxicos para el ratón blanco y sustancias químicas (fotoquímicos, glucídos, taninos, etc.). En 1992 Marcano Fondear menciono que la corteza, semilla y hojas del Aguacate (Persea americana) pueden ser causantes de esterilidad y tienen un efecto abortivo. (htt:/www.sodiaf.org.do) HIPÓTESIS. Debido a que el aguacate contiene un alto porcentaje de ácidos grasos monoinsaturados, clorofila, β-sitoesteroles y sitoestanoles se considera que tiene un efecto hipocolesterolemiante. Además de que las semillas de aguacate poseen diferentes propiedades farmacológicas y cierto grado de toxicidad. Se logrará remover la materia orgánica presente en las aguas residuales generadas por una Industria productora de aceites vegetales, utilizando métodos biológicos. MÉTODOS Y MATERIALES META 1 (10%) ¾ Determinar el perfil de ácidos grasos del aceite de aguacate. Métodos. Se identificaron y cuantificaron los ácidos grasos presentes en el aceite de aguacate obtenido según la metodología de Ortiz (2003) mediante cromatografía de gases. También se determinó la configuración cis o trans de dichos ácidos grasos mediante la técnica de trifluoroacetilación. Resultados. PERFIL DE ÀCIDOS GRASOS DEL ACEITE DE AGUACATE IPN. Ácido oleico Ácido linoleico Ácido linolénico AGUACATE g/100g 62 12 2 OLIVOg/100g 72 8 1.5 COMPARACIÓN ENTRE ω-3,ω-6 Y ω-9 DE LOS ACEITES DE AGUACATE IPN Y ACEITE DE OLIVO COMERCIAL. Ácidos grasos Ácido palmítico C16:0 Ácido palmitoléico C16:1 Ácido esteárico C18:0 Ácido oleico (C18:1) Ácido linoleico (C18:2) Ácido linolénico (C 18:3) Ácidos grasos Ácido palmítico C16:0 Ácido palmitoléico C16:1 Ácido esteárico C18:0 Ácido oleico (C18:1) Ácido linoleico (C18:2) Ácido linolénico (C 18:3) g/100g 21.1 8.9 0.5 62 12 2 g/100g 21.1 8.9 0.5 62 12 2 Discusión de resultados. Como puede observarse en los cuadros anteriores los valores en los ácidos grasos omega del aceite de aguacate obtenido por la metodología desarrollada en el IPN es muy semejante a los contenidos en el aceite de olivo. Destacándose el alto contenido en el ácido oleico, esto es de gran relevancia ya que este compuesto interviene benéficamente en el metabolismo humano para mantener un balance adecuado del perfil de ácidos grasos incidiendo en un menor padecimiento de enfermedades cardiovasculares. Respecto a los ácidos grasos indispensables (linoleico ω6 y linolénico ω3) en el aceite de aguacate se encuentran dentro de las recomendaciones de Neuringer, donde señala que debe guardarse una relación para la ingesta diaria de un máximo de 10:1 ω6/ω3 y un mínimo de 4:1 ω6/ω3. En el aceite de olivo se tiene una relación de 5:1, mientras que para el aceite de aguacate de 6:1. Conclusión. Se encontró que el aceite de aguacate obtenido por la tecnología limpia desarrollada en el IPN presenta un perfil de ácidos grasos que proporciona cantidades balanceadas de ácidos grasos monoinsaturados y poliinsaturados. META 2 (10 %) ¾ Cuantificar el contenido de nutraceúticos del aceite de aguacate: vitamina E, luteína y β sitoesterol. Métodos. • Vitamina E y Luteína. Para la cuantificación de la vitamina E y la luteína se realizó un cromatografía en HPLC utilizando una columna Lichrobsorb Si 60 4.6mm x 25cm. La muestra se preparó disolviendo 0.5 g de aceite en solución de isoropanolhexano (1.5: 98.5 vol/vol). Esta fue inyectada en bolos de 2 uL con un flujo de bomba de 1.0mL/min. Para la cuantificación de vitamina E se utilizó un espectrofotómetro fluorescente con una longitud de onda para la lectura de 330nm; mientras que para cuantificación de la luteína se utilizó un espectrofotómetro leyendo a una longitud de onda de 440nm • β sitoesterol. El β sitoesterol se cuantificó utilizando un cromatógrafo de gases con una columna Econo Cap EC-1 30 m x 0.32 mm x 0.25 um. La muestra fue previamente tratata con isopropanol, hexano, benceno y dimetil sulfòxido. Resultados. Contenido de nutraceúticos en aceite de aguacate. Nutraceúticos Aceite IPN Vitamina E UI/100g 5.8 Luteína mg/100g 33.7 ß Sitoesterol mg/100g 46.5 Aceite IPN 12 meses 5.4 31.6 43.6 Discusión de resultados. Se encontró que el aceite de aguacate obtenido por tecnología limpia cuenta con una cantidad considerable de nutraceúticos, y que su variación durante el almacenamiento a temperatura ambiente durante 12 meses no resulta considerable, esto nos indica que el aceite obtenido por la tecnología desarrollada en el IPN es estable en su contenido de nutraceúticos. La importancia de estos nutraceúticos radica en que la vitamina E funciona como antioxidante disminuyendo la formación de radicales libres que pueden causar daño en las células durante el envejecimiento y causar daños al corazón y diversos tipos de cáncer, incluyendo el de boca y faringe. La luteína es un carotenoide, que ayuda a proteger los daños del ojo tales como el desarrollo de cataratas. El β-sito esterol puede inhibir la absorción del colesterol en el intestino, resultando un menor nivel de colesterol en la sangre. Estudios en animales han demostrado que este compuesto influye en la inhibición de tumores cancerosos. Conclusión. Las cantidades de nutraceúticos encontradas en el aceite de aguacate obtenido por la tecnología desarrollada por las Doctoras Dorantes y Ortiz, le dan un valor agregado. META 3 (50 %) ¾ Evaluar la concentración de lípidos plasmáticos en ratones obesos alimentados con dietas adicionadas con un 5% de grasa provista por diferentes aceites de aguacate. Métodos. • Preparación de dietas. Se prepararon tres dietas diferentes empleando las siguientes formulaciones: FORMULACIÓN DE LA DIETA HIPERCOLESTEROLÉMICA. Ingredientes % Colesterol 1 Colato de sodio 0.5 Mantequilla Fern sin sal 5 Azúcar Glass 30 Caseína 10 Alimento Lab Rodent 5001 53.5 FORMULACIÓN DE LA DIETA CON 2.5 % DE GRASA APORTADA POR EL ACEITE DE AGUACATE. Ingredientes % Colesterol 1 Colato de sodio 0.5 Mantequilla Fern sin sal 2.5 Aceite de Aguacate IPN 2.5 Azúcar Glass 30 Caseína 10 Alimento Lab Rodent 5001 53.5 FORMULACIÓN DE LA DIETA CON 2.5 % DE GRASA APORTADA POR EL ACEITE DE AGUACATE. • Evaluación Biológica. Se emplearon ratones macho cepa NIH con un peso de 25-28g, los cuales fueron distribuidos aleatoriamente en 4 grupos conformados por 6 individuos cada uno. Dichos animales fueron alimentados con una dieta rica en colesterol durante cuatro semanas. Se contó con un grupo testigo al que se le dio alimento estándar en polvo (Harlan 2018S). Al término del tratamiento, y previo ayuno de 12 horas, se colectaron las muestras de sangre mediante punción retroorbital, se centrifugaron 13000 rpm durante 15 minutos, para la obtención del suero, donde se determinó la concentración de colesterol total, colesterol de Lipoproteínas de baja densidad (LDL), colesterol de Lipoproteínas de alta densidad (HDL) y triacilglicéridos mediante un equipo autoanalizador Selectra II, Wiener Lab. Resultados. Porcentajes de efecto sobre el perfil lipídico producido por diferentes aceites de aguacate Hass. Ingredientes Colesterol Colato de sodio Aceite de aguacate IPN Azúcar Glass Caseína Alimento Lab Rodent 5001 % 1 0.5 5 30 10 53.5 Tratamiento Dietético Testigo normocolesterolé mico Control hipercolesterolémi co Aceite IPN 2.5% Coleste rol Triacilglicérid os Índice Aterogénico 0.0 ± 2.6 8.20 ± 0.05 0.24 ± 0.07** 100 ± 4.4b 100 ± 1.4c 100 ± 0.05d 1.61 ± 0.13 19.0 ± 7.0 17.7 ± 2.2 -9.8 ± 0.07 1.6 ± 0.16 Colesterol de LDL Colesterol de HDL -87.91 ± 1.2** 100 ± 5.3a 18.4 ± 8.9 -53.8 ± 1.6* * 34.9 ± 41.8 ± 10.3 23.9 ± 2.8 8.2 ± 0.09 1.8 ± 0.18 12.7 Valores expresados como porcentajes de reducción con respecto al grupo control hipercolesterolémico (media ± error estándar); n=6. Diferencia significativa con respecto al control hipercolesterolémico con prueba t-student **P<0.01, *P<0.05. a68.9 mmol/L; b42.3 mmol/L; c 26.4mmol/L;d0.61 mmol/L. Aceite IPN 5% Discusión de resultados. El modelo probado, sugiere la posibilidad de que tras la sustitución dietaria del 2.5 o 5 % de aceites saturados por monoinsaturados derivados del aguacate, podría no reducir las concentraciones plasmáticas de colesterol total o colesterol de LDL, pero sí beneficiar el incremento de colesterol de HDL con respecto al testigo normocolesterolémico, en cambio al compararse con el control hipercolesterolemico se encontró una disminución en el valor de colesterol total y colesterol HDL en la sustitución del 2.5%. Se observó una relación Dosis-Respuesta con respecto a las concentraciones de colesterol total, colesterol de LDL y colesterol de HDL en todos los grupos suministrados con dieta hipercolesterolémica complementada con el 2.5 y 5% Al parecer las dietas complementadas con aceite de aguacate favorecen la elevación del colesterol de HDL y mantienen a discreción los valores séricos de triacilglicéridos, a pesar del aporte calórico ingerido. No obstante, la relación aterogénica (LDL/HDL) en todos los grupos de tratamiento, fue similar al grupo control. Conclusiones. Se pudo comprobar que el aceite de aguacate obtenido por tecnología limpia en el IPN ayuda a aumentar los niveles de colesterol HDL. Consumiendo el aceite de aguacate producido por la Doctoras Dorantes y Ortiz junto con una dieta hipercalórica no se obtiene una disminución en la concentración de colesterol total. META 4 (15%). ¾ Remover la materia orgánica presente en el agua residual, utilizando métodos biológicos Métodos. Se utilizaron diferentes fuentes de inóculo para obtener cultivos microbianos capaces de remover la materia orgánica presente en el efluente industrial previamente tratado por métodos fisicoquímicos. La composición química mineral del medio de cultivo que se utilizó fue la siguiente: K2HPO4, 1.12 g/L; KH2PO4, 0.48 g/L; NaCl, 5 g/L; MgSO4.7H2O, 0.1 g/L y (NH4)2SO4, 2.0 g/L. Se utilizó la técnica del cultivo de enriquecimiento por lote para obtener cultivos microbianos capaces de remover los contaminantes presentes en el agua tratada fisicoquímicamente. Resultados. En la tabla se presentan las concentraciones de la demanda química de oxígeno, demanda bioquímica de oxígeno y de grasas y aceites del efluente industrial sin tratamiento alguno, del agua residual obtenida después del tratamiento biológico con el enriquecido y los límites máximos permitidos por la legislación mexicana vigente. Discusión de resultados. Los niveles de DQO, DBO5 y de GyA residuales del agua tratada se encuentran dentro de los límites establecidos por las Normas Oficiales Mexicanas. Cuando se utilizó como medio de enriquecimiento al efluente industrial sin ningún tratamiento fisicoquímico, se obtuvieron siete enriquecidos microbianos; el más eficiente removió el 55.27% de la DQO del agua residual. Las mayores eficiencias de remoción de la DQO, DBO5 y de GyA del proceso biológico en cultivos continuos de una etapa fueron de 97.16, 99.24 y 98.88%, respectivamente. Niveles de DQO, DBO5 y de grasas y aceites residuales después del tratamientos biológico. Efluente Agua tratada Agua tratada Parámetro Norma industrial fisicoquímicamente biológicamente [mg/L] (mg/L) (mg/L) (mg/L) (mg/L) DQO 6505.83 630 277.55 800 219 DBO5 2400.00 P.M. = 30162 150(a) P.D. = 60– 200(a) 15–25(a) 86 P.M. = 50(b) GyA 1704.20 27 P.D. = 75(b) Instantáneo =100(b) P.M. = Promedio mensual. P.D. = Promedio diario.(a) = Norma Oficial Mexicana NOM-001-ECOL-1996. Descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales.(b) = Norma Oficial Mexicana NOM-002-ECOL-1996. Descargas de aguas residuales a los sistemas de alcantarillado urbano o municipal. Conclusión. Se obtuvieron enriquecidos microbianos capaces de degradar parcialmente los contaminantes presentes en el efluente industrial tratado fisicoquímicamente (ácidos minerales-filtración). El cultivo microbiano más eficiente removió el 56% de la demanda química de oxígeno. META 5 (15%). ¾ Aislar e identificar los principales componentes de la semilla y cáscara del aguacate para proponer usos potenciales, además de evaluar la hepatotoxicidad del aceite de la semilla y cáscara. Métodos. • Análisis de la semilla de aguacate y del aceite obtenido de la semilla de aguacate. Se realizó el análisis proximal de la semilla de aguacate variedad Hass empleando los métodos especificados en la AOAC. • Estudio de hepatotoxicidad. Se administró por vía oral 500 mg/kg de peso corporal de la semilla molida y homogenizada en un mortero con 5 ml de agua y 2 gotas de Tween con una cánula intragástrica durante 6 días. Al término de la administración a los animales se obtuvo sangre por punción retroorbital y centrifugó a 13000 rpm durante 15 minutos para obtener el suero sanguíneo. El análisis se efectuó en un espectrofotómetro marca Wiener Lab Group modelo Vitalab Selectraz junto con el kit de reactivos para las diferentes enzimas que indican daño hepático: TGO (Transaminasa glutamil oxaloacética), TGP (Transaminasa glutámico pirúvica) y GGT (Gamma glutamil transaminasa). Resultados. Análisis proximal de la semilla de aguacate variedad Hass. Componentes Humedad Cenizas Proteína Fibra Cruda Grasa Carbohidratos g/100g 47.5 1.23118 2.2684 3.5 2.3646 56.8641 Características fisicoquímicas del aceite de semilla de aguacate variedad Hass. Determinación Densidad a 25 °C Índice de refracción a 25 °C Punto de fusión Ácidos grasos libres Índice de peróxidos Índice de saponificación Índice de yodo Resultados 0.9214 g/ml 1.466 17 °C 3.22% 4.85 meq/kg 196 82.4 Análisis proximal de cáscara de aguacate Hass. Componente Humedad Carbohidratos Grasa total Fibra Proteínas Cenizas g/ 100 g 72.81 13.0 5.39 7.14 0.67 0.99 Valores de las principales enzimas que indican el daño hepático. Testigo Semilla de aguacate TGO (UI/l) 130.67 TGP (UI/l) 90.47 GGT (UI/l) 3.37 146.7 74.03 3.72 Discusión de resultados. Se encontró que la semilla representa un 15-16% del peso del fruto y el pericarpio un 19-25%. El estudio de estas dos partes del fruto es importante porque el pericarpio se emplea en la industria cosmética como exfoliante, si se le adicionan enzimas estimula el crecimiento celular, la formación de colágeno y mejora el tono y textura de la piel, reduce el tamaño del poro y mejora la pigmentación irregular. También es utilizado como antifúngico ya que el 85% de estos compuestos se localizan en el mesocarpio. Por esto se propone darle un uso al pericarpio como antifúngico mediante técnicas novedosas y económicas. En el caso de la semilla, con el estudio fotoquímico, se encontró que contiene ácidos grasos, compuestos polifenólicos, taninos, antraquinonas y esteroles. Por lo que se le atribuyen varias propiedades cosmetológicas y farmacológicas. En países como Bolivia, Colombia, Ecuador, Honduras, México y Perú la semilla en infusión se utiliza en problemas digestivos, disentería y en algunos es utilizada como desparasitante. También son empleadas para contrarrestar los efectos del veneno de serpiente (Jíbaros) en Ecuador. En países como Bolivia se utiliza como dilatador del cuello uterino, y en infecciones post parto y en ocasiones se usa como diurético. En Perú, Colombia y Ecuador se utiliza como anticonceptivo. (Pardo, O. 2003). En el área de la cosmetología la semilla tostada y pulverizada se utiliza en el tratamiento de la caída de cabello, para el tratamiento de la caspa y su aceite como humectante. Considerando que la administración y consumo de la semilla debe tener un soporte científico, se investigó la alteración que esta produce puede causar al organismo. En este trabajo se estudió del efecto hepatotóxico en ratones machos. En la evaluación del efecto hepatotóxico se emplearon las enzimas TGO, TGP Y GGT como indicadores del daño hepático ya que estas son moléculas que solo se encuentran en el hígado. Cuando la concentración de dichas enzimas esta elevada se puede hablar de un daño celular que se manifiesta con una lisis del tejido liberándose dichas enzimas al torrente sanguíneo y permitiendo su cuantificación. En el caso de los animales administrados con la semilla de aguacate se encontró que no hay una diferencia entre los valores del testigo, a los que no se les administró la semilla y aquellos que fueron tratados con la semilla, esto nos indica que no existe un daño hepático. Se debe continuar con la investigación del daño hepatotóxico variando las dosis de semilla que se administren y el tiempo de exposición. Conclusión. Los resultados del análisis proximal realizado, tanto a la semilla como al pericarpio de aguacate son similares a los informados en la literatura. En la prueba preliminar que se realizó no se encontró que la administración de semilla de aguacate en ratones produzca un daño hepático. Se están montando las técnicas para aislar, caracterizar y purificar los compuestos antifúngicos del pericarpio de aguacate y probar la actividad antifúngica. IMPACTO Se pudo comprobar la alta calidad del aceite de aguacate extravirgen obtenido mediante una tecnología limpia desarrollada en el IPN. Además de buscar un valor agregado a los principales desechos como son la semilla y la cáscara. Esto es de gran importancia para darlo a conocer a los productores de aguacate y principales industrias de este ramo para una posible transferencia de la tecnología.