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Soluciones ELISA Introducción Cultek Introducción Dentro de los procedimientos inmunológicos, los más útiles y prácticos son los que se basan en la especificidad de la unión antígeno-anticuerpo. La propiedad que tienen las inmunoglobulinas de unirse a un antígeno, la especificidad de esta unión y el hecho de que pueda ser visualizable por fenómenos de precipitación, aglutinación y otros mecanismos indirectos (marcaje con fluoresceína, con radiosótopos o con enzimas) hace que éstos métodos se utilicen de forma muy amplia. Aunque el principio es idéntico en todas las técnicas (unión antígeno-anticuerpo) hoy en día se emplean diversos métodos, basados cada uno de ellos en un procedimiento distinto para visualizar la unión: • Técnicas de precipitación. Cuando la reacción Ag-Ac se realiza en determinadas condiciones, el complejo formado se inestabiliza y precipita, de tal forma que el precipitado formado es fácilmente detectable y cuantificable. • Técnicas de aglutinación. Cuando el antígeno se encuentra unido o formando parte de células, bacterias o partículas, la reacción Ag-Ac puede ser detectada por el aglutinado celular o bacteriano formado, que es fácilmente visualizable. • Técnicas de fluorescencia. El anticuerpo se marca con fluoresceína, con lo que se puede conocer la unión Ag-Ac a través del seguimiento de la fluorescencia emitida por el mismo. • Técnicas de citometría. La señal producida por la excitación del fluorocromo permite conocer el porcentaje de células que es reconocido por el anticuerpo monoclonal empleado. • Técnicas de radioinmunoensayo. Se une al anticuerpo un isótopo radiactivo, siendo posible la cuantificación del complejo Ag-Ac a través de la radiactividad emitida. • Técnicas de enzimoinmunoensayo. El anticuerpo se une a una enzima, con lo que es posible la cuantificación del complejo Ag-Ac a través de la acción que dicha enzima ejerce sobre un substrato cuyos cambios son fácilmente cuantificables. • Técnicas de nefelometría. Se basa en la medida de los efectos producidos por los complejos Ag-Ac sobre un rayo de luz que se hace pasar a través de la suspensión en donde se forman dichos complejos. • Otras técnicas. Se incluyen técnicas en las que el anticuerpo se utiliza marcado, por ejemplo, con ferritina u oro coloidal visualizables al microscopio electrónico. Técnicas Inmunoenzimáticas. Estas técnicas también se conocen con el nombre de ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbed Assay) y se caracterizan por su elevada sensibilidad, especificidad, rapidez y economía, comparables e incluso superiores a numerosas técnicas de diagnostico serológicas (inmunofluorescencia, inmunoelectroforesis, radioinmunoensayo, etc.); si a todo esto se añade su gran versatilidad en campos como la Parasitología, Bacteriología, Micología, Virología, Toxicología, etc., es fácil deducir la gran importancia de estas técnicas y sus enormes posibilidades de aplicación sobre todo en Patología Animal y Vegetal en los que gracias a estas técnicas se pueden estudiar grandes poblaciones en un corto plazo y de manera sencilla, rutinaria y sin instalaciones costosas. No se puede decir que los ELISAs fueran desarrollados en un solo trabajo, sino que fueron numerosos los autores que contribuyeron, en mayor o menos medida, a su completo desarrollo: • Avrameas y Uriel (1966) concibieron la idea de marcar antígenos y anticuerpos con enzimas. • Nakane y Pierce (1966) y Wincker y Avrameas (1969) marcaron anticuerpos mediante enzimas con la finalidad de localizar antígenos virales en cortes de tejidos animales. • Engvall y Perlmann (1971, 1972) utilizando los métodos anteriormente mencionados, describieron el primer método ELISA para titular inmunoglobulinas utilizando como inmunoadsorbente tubos de poliestireno • Voller (1974) puso a punto el método en microplaca de poliestireno y sugirió su uso para titular anticuerpos inducidos por enfermedades infecciosas. • En 1975 aparece el primer trabajo empleando el ELISA para la detección de anticuerpos anti-Trichinella spiralis (Ruitenberg, Steerenberg y Brosi). Desde el año 1977 hasta la actualidad se observa un gran auge en la aplicación de estas técnicas para el diagnóstico de diferentes enfermedades animales, vegetales y humanas. Hoy en día la técnica de ELISA se aplica en la mayoría de laboratorios, constituyendo uno de los métodos de diagnóstico más extensamente utilizados en análisis rutinarios así como en investigación. 02.2006 www.cultek.com Página 1 de 1
