Download informe actividad virucida

INFORME ACTIVIDAD VIRUCIDA
-Herpes simplex virus Tipo 1Introducción:
Un producto que presenta Actividad Virucida se define como aquel que es capaz
de inactivar partículas virales, provocando una pérdida en la infectividad una vez que
entra en contacto con ellas.
Se realizaron experimentos cualitativos que permitieron evaluar la existencia de
Actividad Virucida del producto al 50% y al 90% contra el Virus Herpes Simples Tipo
1 (HSV-1).
En los experimentos cualitativos se utiliza el Efecto Citopático (ECP) viral para
evaluar la in activación viral provocada por el producto. Se define ECP, como cambios
morfológicos específicos observados en una monocapa de una línea celular como
consecuencia de la replicación de un virus infectante.
Metodología:
Los experimentos consistieron en enfrentar dosis del producto al 90% y al 50%
con una cantidad conocida y definida del virus. Para el control viral se enfrentó la
misma cantidad de virus pero con agua. Se realizó una dilución 1:10 de los tres inóculos
anteriores y se sembraron en monocapas confluentes de células Vero, susceptibles al
virus HSV-1. Posteriormente se incubaron en exactamente las mismas condiciones. Los
ensayos se revelaron mediante la técnica de Cristal Violeta donde éste colorante es
medido por espectrofotometría y es proporcional al número de células viables en la
monocapa. Cada ensayo se realizó por triplicado.
La dilución 1:10 del producto con el virus permite evaluar actividad virucida del
producto en altas concentraciones sin tener que enfrentarlas a las células ya que
resultarían tóxicas y por lo tanto imposibles de ensayar. Lo que sí se expone a las
células es un 9% y 5% del producto respectivamente, concentraciones que en ensayos
anteriores se habían probado no tóxicas. Dado a que lo que se expone al virus es el
producto en altas concentraciones (90% y 50%) es la actividad virucida de éstos la que
se reporta.
Resultados:
En la gráfica 1 se muestra la Absorbancia medida en el ensayo a 570nm, la cual
es proporcional al número de células viables para cada monocapa analizada. La línea
superior representa la cantidad de células vivas que se detectaron en un control de
células donde no se agregó ni producto ni virus (máxima absorbancia). La columna gris
más clara indica la cantidad de células vivas que se detectaron en una infección viral en
ausencia del producto. Las dos columnas restantes indican la cantidad de células vivas
que se detectaron en presencia del producto al 90% y 50%.
Actividad Virucida
CC
Abs 570 nm
3
2,5
CV
2
1,5
1
0
50
90
[ ]%
Gráfica 1: Absorbancia a 570 nm del control de infección (CV)
y producto a dos diferentes concentraciones. Se muestra
también la medida del control de células (CC).
Otra forma de expresar estos resultados se observa en la gráfica 2, en la cual se muestra
el porcentaje de inhibición del efecto citopático (% IEC) producido por el virus, en
relación a un control de infección. Claramente se observa que el producto a una
concentración del 90% inhibe en un 49% la producción de efecto citopático; mientras
que a una concentración del 50% lo hace en un 17%.
Actividad Virucida
CC
100
90
80
% IEC
70
60
49
50
40
30
17
20
10
CV
0
50
90
[]%
Gráfica 2:se muestra el porcentaje de Inhibición del Efecto Citopático
(%IEC) o protección de la monocapa en función del producto
en las dos concentraciones ensayadas.
Conclusiones:
.Al detectarse mayor cantidad de células viables en las monocapas infectadas
con HSV-1 en presencia del producto que en las células sin el producto puede inferirse
un porcentaje de protección de la monocapa por parte del producto.
.Por la metodología que se empleo se puede concluir que el producto, a
concentraciones superiores al 50% está actuando inactivando a la partícula viral,
bloqueando su infectividad.
.Comparando la viabilidad celular de las monocapas enfrentadas con virus y
producto con las monocapas correspondientes al control de células, donde las células no
fueron inoculadas ni con virus ni con producto se puede obtener mediante una
formulación matemática un porcentaje de protección de la monocapa. Para el ensayo
realizado se observó un 17% de protección con el producto al 50% y un 49% de
protección con el producto al 90%.
Dr. Juan Arbiza