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PRRS
RESULTADOS DE LA PRUEBA DE RFLP
R. Ortega, R. Sánchez, M. Ortega,
J. Vázquez, J. Chapa
Investigación Aplicada S.A. de C.V.
RFLP Enzimas de restricción o endonucleasas Restriction Fragment Lenght Polymorfismo
Polimorfismo de longitud de los fragmentos de restricción
Definición: Enzimas que cortan los enlaces fosfodiester del
material genético a partir de una secuencia que reconocen
en lugares concretos.
Sitios reconocidos de 4 y 8 pb del DNA amplificado.
- En contacto con el material amplificado.
- Electroforesis para observar los sitios de corte.
- Patrones de corte como referencia.
Objetivo
•  Presentar resultados obtenidos con la prueba
de RFLP para diferenciar virus de PRRS
detectados por la prueba de RT-PCR o
aislamiento viral.
Referencias
•  Wesley, R. et al. Differen(a(on of a porcine reproduc(ve and respiratory syndrome virus vaccine strain from North American field strains by restric(on fragment length polymorphism analysis of ORF 5. J. Vet. Diagn. Invest. 10: 140–144, 1998 •  Itou, T. et. al. Analysis of open reading frame 5 in Japanese porcine reproduc(ve and respiratory syndrome virus isolate by restric(on fragment length polymorphism. J. Med. Vet. Sci. 63 (11): 1203 – 1207, 2001 Tipos de patrones de RFLP
Productos (716 bp) de ORF 5
* Wesley, R. et al. J. Vet. Diagn. Invest. 10: 140–144, 1998
Tipos de patrones de RFLP
Productos (716 bp) de ORF 5 * Itou, T. et al J. Med. Vet. Sci. 63 (11): 1203 – 1207, 2001
Diferencias
Wesley
Itou
Primers (P420 y P620) DNA 716 bp
Primers (P420 y P620) DNA 716 bp
Enzimas: MluI, HincII, SacII,
MluI, HincII, SacII, HaeIII, MspI
Patrones: 2 – 8 – 4
Patrones: 2 – 5 – 2 – 5 – 2
VR-2332: 2-5-2
VR-2332: 2-5-1-1-1
RFLP PRRS ORF 5
Muestras con diferentes patrones de
corte a la cepa vacunal
1
2
1 1
Mlu I
+
2
M
3 3 5
Hinc II
2 2 1
Sac II
RFLP PRRS ORF5
Muestras que de acuerdo al patrón de corte son iguales
a la cepa vacunal (C +). Codigo: 2-5-1-1-1
1 2 3 4 + M
2
ORF 5 Mlu I
Mlu I
5
Hinc II
ORF 5 Sac
1
ORF 5 Hinc II
1
Sac II Hae III
1
Msp I
Resultados Resultados Análisis de la información Análisis de la información RFLP GTO 2010
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
GTO
GTO
GTO
GTO
GTO
GTO
1,1,2,1,1
1,1,2,5,1
1,2,1,1,N
1,3,1,1,1
1,5,1,2,1
1,5,2,1,1
Ventajas del RFLP
•  Distingue el virus de una vacuna particular de las cepas
de campo.
•  Facilita el reporte y el manejo de los datos.
•  No hay una prueba serológica para diferenciar animales
vacunados de expuestos a cepas de campo.
•  Puede ser usado para seguir la epidemiología de una
cepa particular del VPRRS.
•  Accesible y relativamente económica.
•  Herramienta accesible para el análisis de la información.
Condiciones para realizar RFPL •  Muestras obtenidas de RT-PCR o aislamiento
del virus.
•  Tener suficiente cantidad de virus en la muestra.
•  Realizar la prueba de RT-PCR para ORF 5.