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Diagnóstico laboratorial de procesos inflamatorios:
Proteínas de fase aguda y electroforesis capilar
PROTEÍNAS DE FASE AGUDA
Ante una inflamación, el organismo reacciona
con una respuesta inmune no específica conocida como respuesta de fase aguda. Durante esta respuesta se liberan citoquinas, tales
como interleucina-1, interleucina-6 o interferón
que desarrollan una importante función mediadora. Tras su liberación por células endoteliales, fibroblastos, macrófagos y granulocitos, las
citoquinas se dirigen por el torrente sanguíneo
hacia el hígado.
Ante una infección, daño tisular, crecimiento
neoplásico o desorden inmunológico, estas
células inmunocompetentes estimulan, junto a
cortisol, la síntesis de aproximadamente 20 proteínas de fase aguda (APPs) diferentes.
Estas APPs a nivel local son las responsables
de limitar la infección así como de eliminar toxinas o sustancias nocivas por fagocitosis. A
nivel sistémico, protegen el organismo frente
endotoxinas y son responsables del desencadenamiento de la respuesta inmune, resultando
en el incremento de la temperatura corporal y
en el aumento del recuento leucocitario. Según
la variación que se produce en su concentración estas proteínas pueden ser clasificadas en
proteínas de fase aguda positivas o negativas.
Las proteínas de fase aguda positivas son
aquellas cuya concentración se ve aumentada
al menos un 25% durante la reacción de fase
aguda. En contraste, la concentración de las
proteínas de fase aguda negativas disminuye
durante la reacción de fase aguda.
Proteína C reactiva
La proteína C reactiva (CRP) es considerada
un marcador importante para el diagnóstico de
inflamación durante la reacción de fase aguda.
Debido a su estructura molecular, esta glicoproteína es capaz de unirse a multitud de bacterias
patógenas y antígenos intracelulares, así como
de reconocer moléculas extrañas, y realizar un
cambio estructural durante la opsonización de
bacterias. Adicionalmente conduce a la activación del complemento, estimula la fagocitosis
y la producción de citoquinas antiinflamatorias. El análisis de la concentración de CRP es útil
para el diagnóstico en el caso de infecciones
microbianas, lesiones tisulares necróticas agudas secundarias a trauma o a cirugía, y en
caso de que exista sospecha de enfermedad
autoinmune acompañada de inflamación (por
ejemplo artritis reumatoide, vasculitis inmune),
siendo las infecciones bacterianas las que provocan un mayor estímulo.
En infecciones agudas o traumas, la síntesis
de CRP se inicia a las 6 horas, alcanzando su
máximo a las 48 horas para descender posteriormente, con una vida media de 48 horas. La
concentración de CRP es directamente proporcional al daño tisular o severidad de la inflamación, volviendo a descender rápidamente tras el
tratamiento. Por lo tanto, CRP es un excelente
marcador del éxito de la terapia antibiótica en
perros. Adicionalmente, la concentración de CRP aumenta antes que el nivel de leucocitos, los cuales requieren de 3 días.
En el gato, la CRP parece no reaccionar ante
una inflamación, por lo tanto no se debería de
tener en cuenta para el diagnóstico de inflamación.
Amiloide A sérico
El amiloide A sérico (SAA) es una proteína de
fase aguda y bajo peso molecular, unida a lipoproteínas de alta densidad (HDL) en el plasma.
SSA es el precursor de la proteína A amiloidea,
principal componente del amiloide A y decisivo
durante el desarrollo de amiloidosis e inflamaciones crónicas.
Durante la respuesta de fase aguda SAA es sintetizado en hígado tras la estimulación de interleucina-6.
Desde un punto de vista diagnóstico su determinación permite identificar infecciones bacterianas o virales, así como inflamaciones leves.
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El nivel de SAA aumenta aproximadamente 8h
tras el inicio de la respuesta de fase aguda, sobrepasando el intervalo de referencia antes que
la CRP. A diferencia de la CRP, la SAA suele estar aumentada en infecciones leves, tales como
las infecciones virales. Adicionalmente, SAA es
más sensible a inflamaciones leves, y por lo
tanto sirve para distinguir infecciones virales de
bacterianas.
El análisis de SAA está disponible en caballo,
perro, gato y ganado vacuno.
Haptoglobina
La haptoglobina (Hp) es una glicoproteína que
se sintetiza en hígado, pero también en pulmones, tejido adiposo, bazo y riñón. La HP se
une a la hemoglobina libre (fHb) en plasma, la
cual es tóxica y actúa como mediador pro-inflamatorio. FHb contiene hierro que en su forma libre puede unirse a radicales de oxígeno
desarrollando efectos dañinos. En caso de hemólisis intravascular, Hp se une a fHb evitando
la pérdida renal de hierro. Adicionalmente Hp
protege las células del daño oxidativo, inhibe la
quimiotaxis de los granulocitos, la fagocitosis y
el efecto bactericida. Además, parece inhibir la
proliferación de los mastocitos. La identificación de una disminución o aumento en su concentración tiene importante valor
diagnóstico. Por un lado, la disminución en los
niveles de Hp es indicativa de hemólisis, y por
el otro el aumento de su concentración es indicativo de una reacción de fase aguda secundaria a inflamación, infección o enfermedades
autoinmunes.
El análisis de haptoglobina es usado en el ganado vacuno.
Electroforesis de proteínas séricas
El proteinograma es una técnica útil para orientar un diagnóstico y evaluar infecciones o inflamaciones agudas y crónicas. Adicionalmente
permite la identificación de gammapatías monoclonales y síndromes que cursan con pérdida de proteínas.
La separación de las proteínas se lleva a cabo
a pH alcalino, debido a la carga neta, punto
isoeléctrico y al peso molecular de las proteínas.
Electroforesis capilar
La electroforesis capilar permite la separación
de las proteínas presentes en una disolución de
pH básico (9-10). La separación se lleva a cabo
en un capilar estrecho (diámetro interno de 50200 μm). Tras aplicar un voltaje de aproximadamente 7.000 voltios los componentes migran
hacia el cátodo separándose en diferentes zonas según su movilidad y carga. Las moléculas
neutrales también migran hacia el cátodo, pero
no se separan. Las fracciones de proteínas se
cuantifican en el cátodo mediante el detector ultravioleta, obteniendo una curva con 8 fracciones que incluye:
Albúmina, alfa 1 y alfa 2 globulinas, ß1 y ß2 globulinas (o ß globulinas), y gamma globulinas.
La electroforesis capilar es una técnica altamente eficiente ya que los volúmenes requeridos
son muy pequeños, reduce los tiempos de análisis, y permite la automatización del análisis.
Así mismo, permite identificar enfermedades o
grupos de enfermedades utilizando el electroferograma (curva de electroforesis), aporta información sobre la actividad inflamatoria de una
enfermedad, y finalmente es una ilustración esquemática muy útil para la evaluación del curso
de una enfermedad.
Electroforesis capilar: fracciones
Fracción albúmina: prealbúmina
albúmina
a-lipoproteína (HDL)
Alfa globulina: alfa 1: - glicoproteína a ácida
- a antitripsina
alfa 2: - a macroglobulina
- haptoglobina
Beta globulina: beta 1: - hemopexina
- transferrina
beta 2: - C4 complemento
- CRP
- C3 complemento
Gamma globulina: inmunoglobulina
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Figura 1: perro con la inflamación aguda (alfa globulina)
y producción de inmunoglobulinas (beta, gamma-globulinas)
Kapillarelektrophorese
Fracción Albúmina:
Alfa:
Beta Gamma
% g/dlPerro:
28,7 41,33
Alb.:
47 - 59 %
27,5 39,60
Alfa-glob.:
9 - 15 %
10,7 15,41
Beta-glob.:
14 - 24 %
33,1 47,66
Gamma-glob.: 8 - 18 %
Alb/Glo: 0,40
Proteínas totales: 144 g/dl
Figura 2: gato con gammapatía monoclonal (gammaglobulina)
Kapillarelektrophorese
Fracción % g/dl
Albúmina: 27,3 44,09
Alfa:
11,8 19,06
Beta 5,5 8,88
Gamma 55,1 89,47
Gatto:
Alb.:
45 - 60 %
Alfa-glob.:
8 - 15 %
Beta-glob.:
10 - 20 %
Gamma-glob.: 10 - 28 %
Alb/Glo: 0,38
Proteínas totales: 161,5 g/dl
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