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IRAC
Espec
2013
CLASIFICACIÓN, MICROMANIPULACIÓN Y CONGELADO DE
EMBRIONES BOVINOS
Fecha: __02 de junio 2014_________
Suarez Figueroa ___________________
Nombre y Apellido: Facundo
Objetivo:
1. Transferir lo estudiado a lo largo del curso en la resolución de las actividades
presentadas.
Criterios de evaluación:
1. Manejo conceptual, nivel de profundización y capacidad para establecer
relaciones.
2. Capacidad crítica y posibilidad de realizar análisis personales.
3. Integración y transferencia de lo estudiado a situaciones concretas.
1. Observe las fotografías de embriones y en base al Sistema de Evaluación de
embriones de la Sociedad Internacional de Embriones (IETS) haga una
clasificación de los embriones según:
a. el estadio de desarrollo
b. la Calidad (grado 1,2,3,4).
c. Explique para cada fotografía la/s característica/s que tuvo en cuenta
para calificar los embrión.
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2. Realice una comparación entre el método de congelado y la vitrificación de
embriones teniendo en cuenta: medios de congelado, toxicidad, curva de
congelado, método de descongelado y practicidad (costos, entrenamiento,
etc.).
3. Enumere al menos 3 factores importantes para la obtención de preñeces a
partir de la transferencia de embriones micro manipulados (hemi-embriones)
Desarrollo
Foto 1 : Código de estado 4
Calidad
:
2 . Clasifico con esta calidad ya que se observa una
ruptura de la zona pelucida , lo que imposibilitaría congelarlo o vitrificarlo , pero
puede ser transferido fresco .
Foto 2 : código de estado 7
Calidad
2 . Se observan algunas blastomeras sueltas , no
puede congelarse o vitrificarse pero si transferirse frescos
Foto 3 : Código de estado 4
Calidad
1 . Carecen de imperfecciones ( esféricos ,
simétricos , color y textura uniformes
Foto 4 : Codigo de estado 4
Calidad
3 , Presenta vacuolas y el macizo celular representa
el 50% , podrían utilizarse frescos si sobran receptoras
Foto 5 : Codigo de estado 4
Calidad
3 . Se observan numerosas blastómeras sueltas ,
células degeneradas y vesículas . También pueden utilizarse frescos si sobran
receptoras
Foto 6 : Codigo de estado 4
Calidad
2 . Clasifico así ya que el macizo celular representa
mas del 60% que las células desprendidas .
Foto 7 : Codigo de estado 1
Calidad
4 . Infertilizado
2_
congelado : la congelación de embriones con glicerol 1.5 M se realiza
para evitar la formación de cristales intracelulares que puedan dañar la célula ,
esto se logra sacando el agua intracelular por la solución crioprotectora (
glicerol o etilenglicol ) y para evitar la formación del núcleo de congelación , que
libera energía latente con producción de calor que afecta a los embriones .
esto se evita realizando el seeding y congelando a una tasa de congelación
lenta luego mantenerlas en nitrógeno liquido . y para descongelarlo es
recomendable exponer la pajuela unos 10 segundos a temperatura ambiente
antes de descongelarla a baño maría a 20 a 30º c durante 15 a 30 segundos ,
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lo que disminuye la incidencia de zonas pelucidas lesionadas y facilita que
pueda verse bajo la lupa estereoscópica .Luego hay que extraer el crioprotector
de la celula donde hay que tener cuidado con las soluciones ya que si
colocamos al embrión en una solución isotónica dañaría la celula al entrar el
agua mas rápido que lo que sale el crioprotector de la celula .
No pasaría lo mismo si el crioprotector es el etilenglicol ya que este tiene una
permeabilidad mayor que el glicerol (teniendo en cuenta siempre la
temperatura ) ya que a 39ºc la velocidad con que sale el glicol de la celula es
mayor que a 20ºc y de esta forma evitamos el shock osmótico
El etilenglicol es el crio protector que se utiliza para la transferencia directa,
donde el tiempo de exposición de el embrión al crio protector es mas corto por
lo tanto son pasos mas estrictos que los congelados con glicerol ( los cuales
deben descongelarse , extraer el crioprotector y una vez estabilizada la celula
cargarse en una pajuela para ser transferido ) .
Vitrificación : es una nueva técnica de conservación de embriones ya sean
fertilizados in vitro como in vivo u otras gametas . Se caracteriza por la
utilización de altas concentraciones de crioprotectores ( 5 a 7 M )y evita el
enfriamiento que es el punto donde pueden producirse cristales y el embrión
con el crioprtector se introduce directamente en el nitrógeno liquido lo que
simplifica mucho la técnica .Lo complicado de la técnica es que al exponer los
embriones a altas concentraciones de el crioprotector aumenta la toxicidad
química y osmóticamente .Por eso se estandarizo un protocolo utilizando
medios que ya vienen listos para usar ( hapes HCDM-2) VM1 ( 5m de
etilenglicol , 0.5 M de galactosa y HCDM-2 mas hialuronato de sodio y alcohol
polivinilico ) y VM2(7 M de etilenglicol , etc ) .De esta forma se congela
directamente los embriones para transferencia directa .
Por lo tanto la vitrificación parecería ser la mejor opción para conservar
embriones ya que la técnica es mas sencilla y rápida y los resultados a campo
no varian con los resultados obtenidos con transferencias de embriones
congelados . .
3- 1º realizar correctamente la bipartición del embrión ( preferentemente en
estadio de morula ) estos se transfieren libres de zona pelucida ya que se
regenera
2º Los hemi embriones deben ser de embriones de calidad 1 y frescos ( no
congelados o vitrificados ) ya que si no lo son disminuye su viabilidad
3º los embriones de elección deben ser producidos in vivo , no invitro