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PRUEBAS PRETRANSFUSIONALES -Antony Barrantes J. -Daniela Sequeira C. Siglo XVII: Jean-Baptiste Denis realiza la primera transfusión sanguínea Crisis hemolítica intravascular con muerte del paciente CONDICIONES DEL DONANTE • Gozar de buen estado de salud. • Tener entre 18 y 65 años de edad. • Pesar más de 50 kilos. • Si el donante es hipertenso, es posible que done sangre. • No presentar fiebre o haber padecido alguna enfermedad en los últimos 7 días. • Descansar por lo menos 6 horas la noche anterior a la donación. • Tomar el desayuno habitual, el almuerzo o la cena completos dependiendo de la hora en que se done sangre. • Es preferible no tomar ningún tipo de medicamento dos semanas antes de la donación (excepto los anticonceptivos). • Si tiene tatuajes o piercing, tener al menos un año de haberlos hecho. • Cualquier persona que solo utilice hipoglicemiantes orales o metformina para su tratamiento puede donar SITUACIONES DE RIESGO • El uso de drogas intravenosas • Relaciones sexuales con parejas ocasionales (no estables). • Los tatuajes, perforaciones en cualquier parte del cuerpo (piercing) y acupuntura. • El uso de objetos cortantes no esterilizados. PRUEBAS: De compatibilidad: -clasificación sanguínea ABO -clasificación sanguínea -rastreo e identificación de anticuerpos irregulares o inesperados -pruebas cruzadas Para la determinación de agentes infecciosos en la sangre donada: -Virales: VIH, Citomegalovirus y los virus de la Hepatitis B y C -Parasitarios: Malaria y la Enfermedad de chagas -Bacterianos: Treponema Pallidum causante de sífilis, salmonella y otros agentes capaces de provocar sepsis en el receptor . BANCO DE SANGRE DEL HOSPITAL DR.R.A CALDERÓN GUARDIA BANCO DE SANGRE DEL HOSPITAL DR.R.A CALDERÓN GUARDIA Mencione tres condiciones que debe tener el donante SISTEMA ABO PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN DEL GRUPO ABO • Se basa en una técnica de hemaglutinación. • Se utilizan reactivos, que tiene anticuerpos específicos para cada antígeno. Después de mezclar una gota de antígeno con una de sangre, debe observarse la presencia de hemaglutinación. • PARTE #1: Buscar en los eritrocitos la presencia de antígenos A y/o B en la membrana, llamado esto prueba globular o directa. • PARTE #2: Realizar la prueba sérica o inversa, que consiste en buscar en el suero o plasma la presencia de anticuerpos anti-A y/o anti-B según corresponda. **Ambas pruebas deben hacerse tanto en donantes como receptores EQUIPO UTILIZADO EN EL HOSPITAL DR.R.A CALDERÓN GUARDIA *Las siguientes son situaciones de riesgo para un donador de sangre: a) Relaciones sexuales con parejas estables, tatuajes, perforaciones, y uso de objetos cortantes no esterilizados b) Tratamientos con acupuntura, uso de drogas intravenosas, hipertensión arterial y tatuajes c) Uso de drogas intravenosas, relaciones sexuales con parejas no estables, tatuajes y perforaciones. d) Uso de objetos cortantes no esterilizados, anticonceptivos orales, tatuajes y perforaciones uso de CLASIFICACIÓN SANGUÍNEA RH • El Antígeno D - El antígeno D es después de los antígenos A y B el más importante en la medicina de transfusión. - La presencia del antígeno D está determinada por el gen d que es amorfo por lo que no se ha podido demostrar la existencia de un antígeno d ni un anticuerpo anti-d”. RH POSITIVO RH NEGATIVO Presenta el antígeno No presenta el antígeno • El principio del método se basa en la aglutinación directa de los hematíes por el anticuerpo específico. • La aglutinación de los hematíes ocurre en dos fases: la primera fase llamada fase de sensibilización consiste en la unión del anticuerpo al antígeno correspondiente en la membrana de la célula. Seguidamente en la segunda fase se produce la aglutinación de los hematíes sensibilizados. DETERMINACIÓN DEL ANTÍGENO D CON PORTAOBJETOS DETERMINACIÓN DEL ANTÍGENO D CON TUBOS DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE PRESENCIA DEL ANTÍGENO D DÉBILMENTE EXPRESADO Mencione el principio de la prueba para la determinación del grupo ABO ANTICUERPOS INESPERADOS • Son anticuerpos distintos a anti-A o anti-B que reaccionan con antígenos que están ausentes de la membrana de los hematíes del individuo que los produce. • La producción de estos anticuerpos por parte del individuo ocurre por la isoinmunización con hematíes a través de embarazos o transfusiones. • Objetivo de la prueba: Prevenir la transferencia pasiva de anticuerpos al receptor, disminuyendo el riesgo de reacciones posttransfusionales. • El principio de esta prueba se basa en la capacidad del suero del individuo de aglutinar y/o hemolizar células cuya composición antigénica es conocida en cuanto a los antígenos más importantes en inmunohematología. DETERMINACIÓN EN SUERO 1. Tubo C1, Tubo C2 2. 2 gotas de suero + células pantalla (I y II) 3. Centrifugar e incubar 4. AGLUTINACIÓN? 5. 2 gotas de albúmina bovina 6. Centrifugar e incubar 7. AGLUTINACIÓN? 1. 3-4 lavados de las células 2. Suero anti globulina poliespecífico 3. Centrifugar 4. AGLUTINACIÓN? 5. En débiles: células de control de Coombs 6. Centrifugar 7. AGLUTINACIÓN? Describa las formas existentes para la determinación del grupo Rh PRUEBAS CRUZADAS Autotestigo Se realiza para verificar que el receptor no posea anticuerpos sensibilizando sus propios hematíes. Prueba menor Prueba mayor Verifica que en el suero o plasma del donante no existan anticuerpos contra los hematíes del receptor. Tiene como propósito determinar que en el suero del receptor no existan anticuerpos de importancia clínica contra los antígenos eritrocitarios del donante. PRUEBA CRUZADA MAYOR FASE I TUBO PM Agregar 2 gotas del suero del receptor SR AGREGAR Una gota de suspensión de eritrocitos al 5%del donante ED CENTRIFUGAR 1000 rpm por 1 min Aglutinación y/o Hemolisis INTERPRETACIÓN • Positivo (detener la prueba) • Negativo : Continuar fase II OBSERVAR AGLUTINACIÓN Y/O HEMOLISIS Desprender el botón de células del fondo • FASE II TUBO Agregar 2 gotas de albumina Mezclar INCUBAR A 37ºC durante 15 min CENTRIFUGAR 1000 rpm por 1 min Aglutinación y/o Hemolisis INTERPRETACIÓN • Positivo (detener la prueba) • Negativo : Continuar fase III OBSERVAR Hemólisis y desprender el botón de células del fondo • FASE III TUBO PM Lavar 4 veces con solución salina a 3000 rpm durante 2 min En cuarto lavado Desechar elsobrenadante AGREGAR 2 gotas del reactivo de antiglobulina poliespecifico Aglutinación y/o Hemolisis INTERPRETACIÓN • Positivo (detener la prueba) • Negativo : COMPATIBLE Centrifugar de inmediato Observar con la ayuda de lupa o microscopio PRUEBA CRUZADA MENOR Se utilizan 2 gotas de suero del donador, más una gota de suspensión de eritrocitos al 5% del receptor Se realiza el procedimiento mencionado antes mencionado No se realiza siempre y cuando el banco de sangre realice la detección o rastreo de anticuerpos inesperados a sus donantes Interpretación Si no se visualiza hemolisis o aglutinación en alguna de las fases: COMPATIBILIDAD AUTOTESTIGO TUBO Agregar 2 gotas de suero del receptor SR AGREGAR Una gota de suspensión de eritrocitos al 5% del receptor Proceso simultáneo con prueba mayor Aglutinación y/o Hemolisis INTERPRETACIÓN • Positivo (detener la prueba, en casos que no sean de ) • Negativo : COMPATIBLE OBSERVAR AGLUTINACIÓN Y/O HEMOLISIS NECESIDAD DE TRASFUSIÓN EN SITUACIONES URGENTES • El médico debe considerar el riesgo de trasfundir sangre sin los estudios de pruebas cruzadas VS riesgo de complicación del paciente mientras se realizan las pruebas cruzadas. 2. PRUEBAS PARA LA DETERMINACIÓN DE AGENTES INFECCIOSOS • Las pruebas para la detección de agentes infecciosos se encuentran establecidas en la legislación de cada país. • Según la resolución Nº 2008-017301, inciso d. Se indica que las pruebas por las que se tamiza la sangre en Costa Rica son: • Anticuerpos contra el HIV I y II • Anticuerpos contra la Hepatitis C • Anticuerpos y antígeno de la Hepatitis B • Anticuerpos contra la sífilis o VDRL • Anticuerpos contra el HTLV • Anticuerpos contra el Trypanosonoma cruzi • Además menciona que el Banco de Sangre debe buscar el equilibrio más seguro entre oferta y demanda de hemoderivados que minimice el riesgo de infección para el receptor, de modo que se evite el consumo de recursos en el tratamiento o secuelas o enfermedades provocadas por la transfusión de sangre, así como el deterioro de la calidad de vida de los costarricense • Se utilizan métodos de Inmunodiagnóstico, los cuales en su mayoría se basan en la detección de anticuerpos contra el agente infeccioso • Mencione la utilidad de las pruebas cruzadas DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS PARA EL VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA(HIV1/HIV2) • Según la OMS: “El SIDA se trata de una enfermedad infectocontagiosa de carácter grave, con una gran heterogeneidad de síntomas y signos clínicos, debido a la presencia de un virus que una vez ingresado al organismo ataca fundamentalmente su sistema inmune, disminuyendo sus defensas orgánicas y dejando al individuo suceptible a múltiples agentes infecciosos que pueden provocar su muerte” • El virus reduce el número de linfocitos T colaboradores, provocando que los individuos sean susceptibles a tumores e infecciones oportunistas. • La presencia del virus causa la producción de anticuerpos específicos frente a VIH-1 o VIH-2. • El EIA de tipo indirecto es utilizado en los bancos de sangre como prueba presuntiva para determinar los anticuerpos para el HIV-1/HIV-2. • Otras pruebas presuntivas utlizadas consisten en pruebas de aglutinación, saliva y orina, mientras que el Western Blot, Inmunoflorescencia y radioinmunocrepitación. ANÁLISIS INMUNOENZIMÁTICO INDIRECTO Figura: Esquema resumido del principio biológico del EIA indirecto El EIA indirecto es también utilizado en… • Determinación de anticuerpos para : • Virus Linfotrópico T humano (HTLV-1) • Virus de la Hepatitis C (HCV) • Tripanosoma cruzi, causante de la enfermedad de Chagas. TRYPANOZOMA CRUZI • A partir de setiembre del 2003 en los Bancos de Sangre de la CCSS se implementó la tamización del 100 % de los donantes de todo el territorio nacional. Figura. Distribución de la seropositividad por T. cruzi en los donantes de sangre , según Banco de Sangre CCSS, Costa Rica. De setiembre de 2003 a setiembre de 2004. Torres et al, Prevalencia de anticuerpos contra el Trypanosoma cruzi en donantes de sangre de la Seguridad Social- Costa Rica, Setiembre 2003 - Setiembre 2004. Revista Costarricense de Ciencias Médicas, 2004. DETERMINACIÓN DEL ANTÍGENO DE SUPERFICIE DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B (HBSAG) • HBsAg significa antígeno de superficie de la hepatitis B, también conocido como antígeno Australia. • Para la determinación del HBsAg en suero o plasma del donantes de alto o bajo riesgo es utilizado el EIA tipo sándwich. • ¿Cuál es el tipo de EIA utilizado para la detección de Anticuerpos ante el virus de HIV1/HIV-2 , T. cruzi, VHC y HTLV-1.? ANÁLISIS INMUNOENZIMÁTICO TIPO SANDWICH Figura : Esquema resumido del principio biológico del EIA tipo sandwich ANTÍGENO CORE DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B(ANTI-HBC) • Individuos infectados con HBV pueden arrojar resultados negativos para el HBsAg, por lo que se ha implementado la determinación de anticuerpos para el antígeno core de la hepatitis B. • El antígeno Core de la Hepatitis B consiste en una proteína intracelular que se expresa ante la infección por el virus. • Usualmente el EIA utilizado para la detección del antígeno Anti-HBc es de tipo competitivo. ANÁLISIS INMUNOENZIMÁTICO DE TIPO COMPETITIVO Figura: Esquema resumido del principio biológico del EIA competitivo. DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS NO TREPONÉMICOS, ASOCIADOS A LA INFECCIÓN POR TREPONEMA PALLIDUM • La infección por T. pallidum, agente etiológico de la sífilis da lugar a la formación de anticuerpos denominados reaginas o no treponémicos • Dichas sustancias están dirigidos contra componentes del tejido como cardiolipina, lecitina y colesterol, cuando dichos anticuerpos se detectan en el suero del individuo se puede sospechar de la presencia de T. pallidum. • Las pruebas diseñadas para determinar anticuerpos no treponémicos son poco específicas y frecuentemente arrojan resultados falsos positivos en presencia de anticuerpos antifosfolipídicos que se generan en enfermedades como la lepra, mononucleosis infecciosa, malaria y lupus eritrematoso sistémico. • Los métodos para la determinación de anticuerpos no treponémicos son el VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) y RPR( Prueba rápida para la reagina). Toda prueba positiva para anticuerpos no treponémicos deberá confirmarse con exámenes como el FTA-abs (Fluorescent Treponemal Antibody-absorption), con el cual se confirma el diagnótico de sífilis. VDRL Y RPR • Se tratan de preparados no treponémico especialmente diseñados para la detección y semi-cuantificación de reaginas plasmáticas, un grupo de anticuerpos dirigidos contra componentes tisulares producidos por los pacientes infectados por T. pallidum. • Las "reaginas" presentes en el suero de individuos infectados con Treponema pallidum, se detectan por acción de las mismas con antígeno de cardiolipina, lecitina y colesterol adsorbido sobre partículas de carbón. • La reacción produce una aglutinación visible macroscópicamente, favorecida por las partículas de carbón. PaGIA • El inmunoensayo de partículas en gel (PaGIA por sus siglas en inglés) es un método que consiste en microtubos que contienen una matriz de gel y un polímero particulado rojo sensibilizado con los antígenos recombinados TpN15, TpN16 y TpN47 en una suspensión lista para usar. • El inmunoensayo en partículas de gel mostró una sensibilidad de 98.8% y una especificidad de 100%, además tiene un tiempo de reacción de 20 minutos lo cual lo destaca frente a los otros métodos. Quesada C. Seguridad transfusional: La determinación de anticuerpos contra Treponema pallidum en donantes de sangre. Asociación Mexicana de medicina transfusional, 2012. •Gracias