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ESTEROIDES Dra. Pilar Martín Escudero Escuela Profesional de Medicina de la Educación Física y el Deporte Facultad de Medicina Universidad Complutense de Madrid UCM www.pilarmartinescudero.es 2015 Lista de sustancias prohibidas AMA 2015 (Tanto en Competición como Entrenamiento) 1. AGENTES ANABOLIIZANTES: 2. HORMONAS PEPTIDICAS Y FACTORES DE CRECIMIENTO Y SUSTANCIAS AFINES: SUSTANCIAS PROHIBIDAS 3.- BETA 2 AGONISTAS: 4.- MODULADORES DE HORMONAS Y DEL METABOLISMO: 5.- DIURETICOS Y OTROS AGENTES ENMASCARANTES: 6.- MANIPULACION DE LA SANGRE Y DE COMPONENTES SANGUÍNEOS: METODOS PROHIBIDOS 7.- MANIPULACIÓN QUÍMICA Y FÍSICA: 8.- DOPAJE GENETICO: Lista dLista de sustancias prohibidas AMA 2015 (Tanto en Competición como Entrenamiento) 1. AGENTES ANABOLICOS: EXÓGENOS: 1-androstenediol (5α-androst-1-en-3β,17β-diol); 1-androstenediona (5αandrost-1-en-3,17-diona); bolandiol (estr-4-en-3β,17β-diol); bolasterona; boldenona; boldiona (androsta-1,4-dieno-3,17-diona); calusterona; clostebol; danazol ([1,2]oxazolo[4',5':2,3]pregna-4-en-20-in-17 α -ol); dehidroclorometiltestosterona (4-cloro-17β-hidroxi-17α-metilandrosta-1,4dien-3-ona); desoximetiltestosterona (17α-metil-5α-androst-2-en-17β-ol); drostanolona; estanozolol; estenbolona; etilestrenol (19-norpregna-4-en-17 α-ol); fluoximesterona; formebolona; furazabol (17α-metil[1,2,5]oxadiazolo[3',4':2,3]-5α-androstan-17β-ol); gestrinona; 4hidroxitestosterona (4,17β-dihidroxiandrost-4-en-3-ona); mestanolona; mesterolona; metandienona (17β-hidroxi-17α-metilandrosta-1,4-dien-3-ona); metandriol; metasterona (17β-hidroxi 2α, 17α-dimetil-5α-androstan-3-ona-); metenolona; metildienolona (17β-hidroxi-17α-metilestra-4,9-dien-3-ona); metil-1-testosterona (17β-hidroxi-17α-metil-5α-androst-1-en-3-ona); metilnortestosterona (17β-hidroxi-17α-metilestr-4-en-3-ona); metiltestosterona; metribolona (metiltrienolona, 17β-hidroxi-17α-metilestra4,9,11-trien-3-ona); mibolerona; nandrolona; 19-norandrostendiona (ester-4en-3,17-diona); norboletona; norclostebol; noretandrolona; oxabolona; oxandrolona; oximesterona; oximetolona; prostanozol (17β-[(tetrahidropiran2-il)oxi]-1'H-pirazolo[3,4:2,3]-5α-androstan); quimbolona; 1-testosterona (17βhidroxi-5α-androst-1-en-3-ona); tetrahidrogestrinona (17-hidroxi-18a-homo19-nor-17α pregna-4,9,11-trien -3-ona); trembolona (17β-hidroxiestr-4,9,11trien-3-ona); y otras sustancias con estructura química o efectos biológicos similares. ENDÓGENOS: androstendiol (androst-5-en-3β,17β-diol); androstendiona (androst-4-en-3,17-diona); dihidrotestosterona (17β-hidroxi-5α-androstan-3-ona); prasterona (dehidroepiandrosterona, DHEA, 3βhidroxiandrost-5-en-17-ona); testosterona y sus metabolitos e isómeros, que incluyen pero no se limitan a: 5α-androstan-3α,17α-diol; 5α-androstan-3α,17β-diol; 5α-androstan-3β,17α-diol; 5α-androstan-3β,17β-diol; androst-4-en-3α,17α-diol; androst-4-en-3α,17β-diol; androst-4-en-3β,17α-diol; androst-5-en-3α,17α-diol; androst-5-en-3α,17β-diol; androst-5-en-3β,17α-diol; 4androstendiol (androst-4-en-3β,17β-diol); 5androstendiona (androst-5-en-3,17-diona); epidihidrotestosterona; epitestosterona; etiocolanolona; 3α-hidroxi-5α-androstan-17-ona; 3β-hidroxi-5αandrostan-17-ona; 7 α -hidroxi-DHEA; 7 β -hidroxiDHEA; 7-ceto-DHEA;19-norandrosterona; 19noretiocolanolona. T/E relación mayor de (4) Se tiende a buscar perfil esteroideo OTROS: Clenbuterol, moduladores selectivos del receptor de andrógeno (SARMs), tibolona, zeranol, zilpaterol. Historia de los esteroides: • El conocimiento de su empleo en el Deporte se remonta a los años cincuenta. • Si bien hasta la década de los ochenta no pudo ser detectado en el laboratorio. • Muy extendido su uso entre los deportistas de fuerza. • El año 2000, fue denominado “El año de la Nandrolona” Aparte del Canadiense Ben Jhonson, Linford Christie, los también británicos Walker y Cadigan, la plusmarquista Griega de los 10.00 m. Alejandra Tziuouti, el Americano C.J.Hunter esposo de Marion Jones, etc. fueron atletas en los que se demostró su utilización. Historia del dopaje por esteroides: En la Edad Antigua (Grecia), los atletas olímpicos, tomaban la testosterona extraída de la orina de animales, antes de las competiciones e incluso durante épocas prolongadas antes de la competición. A principios del siglo XX, los científicos empiezan a producir las primeras inyecciones experimentales de andrógenos obtenidas a través de la filtración de grandes cantidades de orina o extrayendo testosterona de los testículos de los animales. En 1930, se sintetiza por primera vez la Testosterona y alteran su estructura molecular variando su actividad androgénica, estrogénica y anabólica, lo que indirectamente produce un aumento de su interés sobre su uso terapéutico y su aplicación en el deporte. Esto facilitó el desarrollo de esteroides con alta actividad anabólica y muy poca actividad androgénica/estrogénica. En 1935 Ruzicka, junto con Butenandt compusieron el primer grupo de sintéticos de la testosterona. El descubrimiento tuvo tanto impacto, que tanto Butenandt como Ruzicka en 1939 fueron galardonados con el Premio Nobel por su trabajo en química. A mediados de 1950, ya se habían producido más de 1000 análogos de la testosterona, nandrolona y dihidrotestosterona, pero ninguno probó ser un compuesto puramente anabólico. www.nida.nih.gov/InfoFacts/Steroids-Sp.html El Médico que dopó a Ben Johnson George M. Astaphan, “trabajó” con él y también con otro grupo de atletas canadienses que también dieron positivos como: M. MacKoy, Desai Williams y Angella Issajenko entre otros. En los juegos olímpicos de Seúl en el año 1988, se descubrió que Ben Johnson había consumido esteroides anabólicos como parte de su entrenamiento. Fue despojado de su oro y se convierte en un punto de ejemplo para muchos como el principio del fin al uso de esteroides en el deporte Durante los años 90 hasta el 2000 se incrementa la lucha contra el dopaje y en el año 1999, se crea la WADA. En el año 2005 se observa que el 43% de los resultados adversos en los controles de dopaje corresponden a esteroides anabolizantes, siendo los más predominantes testosterona, nandrolona y estanozolol. A partir del año 2000 se empieza a tenerse en cuenta la relación Testosterona/Epitestosterona. Que en un primer momento era de seis y luego fue de cuatro. Administración y Preparados. • La administración es por vía oral, parches subcutáneos o parenteral. • La duración de los efectos varía en función de la dosis y la forma de administración. • Desde las 24 hasta las 72 h. • O entre las 3 y 6 semanas. • Los efectos de preparados “depot” pueden llegar hasta los 3-4 meses. • Hay “Ciclos de carga” y de “Limpieza o lavado” alternativos. Empleo Terapéutico y Contraindicaciones Indicaciones Terapéuticas • Deficiencias de Testosterona • Osteoporosis. • Cáncer de mama. Contraindicaciones. • • • • • Cáncer de Próstata. Enfermedades Hepáticas. Embarazo. Nefrosis. Cáncer de mama Características Químicas: Esteroides Androgénicos (Producidos en el Ovario, Testículo y Corteza Suprarrenal) • Testosterona. • Dehidro-testosterona. • Nandrolona. Su control secretorio se efectúa en la hipófisis. Bioquímica: • La transformación de Testost. y D.H. Testost. a Nandrolona es hepática. • Esta es la 19Nortestosterona, que carece del grupo metilo en el carbono 19. • La eliminación se hace por vía renal en forma de 17 cetosteroides. Modificaciones de los esteroides OH 18 12 19 11 1 9 2 A 3 O 10 B 13 14 8 D 16 15 Disminuir en el efecto androgenico Prolongar el efecto anabolizante. Enmascarar. 7 5 4 C OH Dotar actividad vía oral. 17 O 6 1-Metiltest.: 17 a metil androst-1,4-dien 17b ol 3 ona Testosterona: Androst-4-en 17b ol 3 ona OH OH OH CH3 O O N NH H Metiltest.: 17 a metil androst-4-en 17b ol 3 ona 14 Nandrolona: estran-4-en 17b ol 3 ona Estanozolol Efectos que producen estas modificaciones bioquímicas PERFIL ESTEROIDEO: Biosíntesis de esteroides endógenos. Colesterol Pregnenolona 17α-Hidroxipregnenolona O DHEA HO DHEA HO 4-Androstendiona OH O 5-Androsten 3β,17β-diol UGT2B17 UGT2A1 O C H3 5α DHT HO OH C H3 OH OH 5β DHT O Testosterona O UGT2B7 UGT2B1 O H Epitestosterona O OH UGT2A1 C H3 H OH OH UGT2B17 UGT2B17 UGT2A1 UGT2B15 UGT2B7 UGT2A1 O UGT2B7 C H3 UGT2B17 HO HO H Androsterona 15 H UGT2B15 UGT2B7 5α-Androstan-3α,17β-diol HO O UGT2B7 UGT2A1 HO H 5β-Androstan-3α,17β-diol H Etiocolanolona Factores que influyen en el Perfil Esteroideo. TESTOSTERONA (oral o inyectada) [ T ],(T/E) A/T TESTOSTERONA (gel) [ T ], [5αA], (T/E), (5αA/E), (A/E) DHEA [E], LH [A], [Etio], [3α,5-ciclo-DHEA] , [5-androsten-3β,17β-diol], [DHEA] DHT [DHT], [5αA], [A], DHT/Etio, DHT/E, 5αA/5βA, A/Etio 4 ANDROSTENDIONA [T], [E], [A], [Etio], [DHT], (T/E) 5 ANDROSTENDIOL [T], [E], [A], [DHT], (T/E), LH EPITESTOSTERONA [ Epi ], (T/E) OTROS Supresión del perfil esteroideo (Ej. Probenecida, Ketoconazol) Etanol: [T], (T/E) [A], (A/T) Anticonceptivos orales: (T/E) [E] Actividad bacteriana: 5α-Androstandiona y 5β-Androstandiona [T]libre, (T/E) 16 Procedimientos de control para esteroides endógenos. La caracterización del perfil esteroideo en el ámbito del control del dopaje se lleva a cabo con O técnicas de altaAndrosterona selectividad, como es la cromatografía de gases acoplada con la espectrometría O de masas. HO H Inicialmente se determina la concentración de ciertos compuestos característicos y algunas Etiocolanolona HO H relaciones entre ellos. OH La Agencia Mundial AntidopajeOHestablece los siguientes criterios de evaluación para determinar que el resultado puede ser NO NEGATIVO: HO 5β-Androstan-3α,17β-diol H HO De modo, que en caso 5α-Androstan-3α,17β-diol DHEA O de que se cumplan alguno de estos criterios (muestras sospechosas), se pueden requerir posteriores investigaciones tales como: C H3 C H3 H OH HO Epitestosterona CRITERIOS VIGENTES: TD2004EAAS Testosterona C H3 OH C H3 • T/E > 4. Análisis de la muestra mediante cromatografía de gases con celda de combustión y 5α DHTde •Concentración espectrometría masas de relaciones isotópicas para la confirmación de Eti ó A(GC/C/IRMS), > 10000 ng/ml. aportes exógenos de esteroides.Relaciones: •Concentración T ó E >T/E, 200A/Etio, ng/ml. 5aDiol/5bDiol, y 5aDiol/E •Concentración DHEA >A/T, 100 A/E ng/ml.. Seguimiento longitudinal del deportista. O O OH O 17 H EFECTOS SECUNDARIOS DEL USO DE ESTEROIDES ANABOLIZANTES: EFECTOS SECUNDARIOS DEL USO DE ESTEROIDES ANABOLIZANTES: EFECTOS SECUNDARIOS DEL USO DE ESTEROIDES ANABOLIZANTES: Efectos en la Mujer CLINICA. • • • • • • • • Acné. Hirsutismo. Voz Ronca. Caída de cabello. Hipertrofia del Clítoris. Disminución de las mamas. Masculinización. E idénticos efectos negativos a nivel hepático y cardíaco que en el varón. Aumento de Musculación en la mujer en el Deporte. EFECTOS SECUNDARIOS DEL USO DE ESTEROIDES ANABOLIZANTES: Efectos Clínicos: Efectos Androgénicos Anabolizantes. y efectos • Invierte el efecto catabólico tras el ejercicio intenso. • Aumenta la masa y la muscular. fuerza • Disminuye la sensación de fatiga. • Aumenta la lipólisis y la agresividad competitiva. • Eleva el hematocrito y la liberación de la GH. Efectos Androgénicos: • Favorece la aparición de los caracteres sex. secundarios • En el niño produce el cierre precoz de los cartílagos de crecimiento,(Dismin. Talla). • Hiperplasia prostática. • Alopecia Androgénica. • Aumento de la coagulación. • Disminuye el HDL. • Presenta toxicidad hepática. • Produce Hipogonadismo y Ginecomastia. • Hipertrofia Miocárdica. Esteroides Anabolizantes: EFECTOS SECUNDARIOS Los efectos secundarios de los esteroides anabolizantes son distintos en el hombre que en la mujer. Desde cuadros leves y reversibles hasta procesos muy graves que afectan a la vida del sujeto. Los efectos secundarios de los Esteroides anabolizantes: • Riesgo de lesiones neoplásicas en hígado, páncreas y próstata. • Alteraciones en el metabolismo de fijación del calcio y que afectan a los cartílagos de crecimiento de los adolescentes. Alteraciones Metabólicas: Ciertas disfunciones a nivel metabólico alteran las fracciones de colesterol y triglicéridos. También los efectos pueden repercutir negativamente en el área psíquica: cambios del carácter inicialmente y cuadros psicopáticos posteriormente. El Desarrollo Muscular: • Uno de los elemento más apreciables a simple vista es la hipertrofia de la masa muscular. • La generación de la actividad de la mitocondria muscular mediante la adicción de los esteroides anabolizantes determina un incremento en la masa o del volumen. El Cáncer de Próstata: • La Próstata, glándula de secreción interna y externa se localiza en torno a la uretra, a la salida de esta de la vejiga urinaria. Por efecto de los esteroides anabolizantes experimenta inicialmente un aumento de tamaño + 40 gr.(incremento de testosterona). • Posteriormente este aumento genera la elevación del PSA en varones jóvenes (30-40 años). • Y el riesgo de aparición de adenocarcinoma, generalmente en la zona periférica de la glándula. (Murió a los 38 años de un ataque cardiaco...anabolizantes.?) Florence Griffith falleció el 1 de septiembre de 1998 en su casa de Misión Viejo, California, mientras dormía. La causa oficial de su muerte fue asfixia (con una almohada), tras sufrir una apoplejía. Su temprana muerte disparó los rumores de que se debió al consumo de sustancias dopantes durante su carrera (un rumor que siempre la persiguió por su extraordinaria musculatura), aunque según la autopsia, Griffith sufría un mal congénito en el cerebro que le causó la apoplejía. Detección: • Se detecta en muestras biológicas de orina. • La producción endógena obliga a la valoración cuantitativa. Nandrolona. • Dosis máximas de 2 mg. Para varones y 5 para mujeres. Testosterona. • Cociente Testosterona/ Epitestosterona superior a 4. Escu.M.E.Física y Deportes. F.Belinchón. Los Análisis por Sorpresa. Criterios Actuales. • Tomas de muestras fuera de competición “Por sorpresa”. • Evitando así la táctica de los ciclos de “limpieza” o “aclaramiento”. • El caballo de batalla de la llamada secreción endógena obliga a la toma seriada de muestras. • Y aún así siguen las dudas... (Caso Gurpegui en el club Atlético de Bilbao). Procedimientos de control para esteroides endógenos. La caracterización del perfil esteroideo en el ámbito del control del dopaje se lleva a cabo con O técnicas de altaAndrosterona selectividad, como es la cromatografía de gases acoplada con la espectrometría O de masas. HO H Inicialmente se determina la concentración de ciertos compuestos característicos y algunas Etiocolanolona HO H relaciones entre ellos. OH La Agencia Mundial AntidopajeOHestablece los siguientes criterios de evaluación para determinar que el resultado puede ser NO NEGATIVO: HO 5β-Androstan-3α,17β-diol H HO De modo, que en caso 5α-Androstan-3α,17β-diol DHEA O de que se cumplan alguno de estos criterios (muestras sospechosas), se pueden requerir posteriores investigaciones tales como: C H3 C H3 H OH HO Epitestosterona CRITERIOS VIGENTES: TD2004EAAS Testosterona C H3 OH C H3 • T/E > 4. Análisis de la muestra mediante cromatografía de gases con celda de combustión y 5α DHTde •Concentración espectrometría masas de relaciones isotópicas para la confirmación de Eti ó A(GC/C/IRMS), > 10000 ng/ml. aportes exógenos de esteroides.Relaciones: •Concentración T ó E >T/E, 200A/Etio, ng/ml. 5aDiol/5bDiol, y 5aDiol/E •Concentración DHEA >A/T, 100 A/E ng/ml.. Seguimiento longitudinal del deportista. O O OH O 37 H El Fisioculturismo: • Un deportes donde resulta evidente y casi obvio este empleo es en el Fisioculturismo. • Los volumen de masa muscular obtenida y la definición. son impensables con una simple rutina de trabajo de pesas en el gimnasio La Mujer y el Fisioculturismo: • Al igual que en el varón en el caso de la mujer el empleo similar de estrategias encaminadas a incrementar la masa muscular determina una imagen amén que virilizada, la presencia de un desarrollo muscular que nada tiene que ver con el somatotipo de la mujer. Escu.M.E.Física y Deportes. F.Belinchón. 41 Los más Populares: • • • • • • • • • Clostebol. Clembuterol. Fluoximesterona. Metandienona. Nandrolona. Norethandrolona. Oximesterona. Stanozolol. Testosterona. • Decanoato de Nandrolona. • Fenpropionato Nandrolona. • Ciclopentilpropionato de Testosterona. • Cipionato de Testosterona. • Enantato de Testosterona. • Propionato de Testosterona. DECADURABOLIN 50 (Decanoato de Nandrolona) WINSTROL Farmacocinética de los esteroides (1): Farmacocinética de los esteroides (2): 1.- Las preparaciones de testosterona oral, bucal , inyectables , implantables subdérmica y transdérmicos están disponible para uso clínico . La mejor preparación es la que sustituye a los niveles séricos de testosterona en lo más cercano a las concentraciones fisiológicas como sea posible. 2.- La administración oral de los resultados de la preparación de undecanoato de testosterona disponibles actualmente en alta interindividual y la variabilidad intraindividual de los valores séricos de testosterona . 3.- Administración bucal diaria o dos veces al día de las tabletas de testosterona aumenta la testosterona sérica a el rango normal . La aceptabilidad de este formulario de solicitud aún no se ha determinado . 4.- La testosterona disponible ésteres para inyección intramuscular ( propionato de testosterona , enantato de testosterona, cipionato de testosterona, testosterona ciclohexanocarboxilato ) siguen siendo ampliamente utilizado pero subóptima para el tratamiento del hipogonadismo masculino . Las dosis y la inyección intervalos de uso más frecuente en cabeza clínica rubricar los niveles de testosterona suprafisiológicas y valores subnormales antes de la siguiente inyección . Para obtener las concentraciones séricas de testosterona de forma continua en el rango normal , pequeñas dosis inaceptablemente frecuentes tendrían que ser inyectado . 5.- La inyección intramuscular de 1000 mg de undecanoato de testosterona para hombres con hipogonadismo mantiene los niveles séricos de testosterona dentro del rango normal para un máximo de 12 semanas . Recientemente aprobado para uso clínico , el undecanoato de testosterona por vía intramuscular se convertirá en una preparación valiosa para la terapia de sustitución de depósito de hipogonadismo masculino y para la contracepción masculina . 6.-Un único procedimiento de implantación de gránulos de testosterona proporciona los niveles séricos de testosterona en el rango normal para un máximo de seis meses. Extrusión de pellets se produce en aproximadamente el 10 % de la implantación procedimientos . Debido al efecto de larga duración y el inconveniente de la eliminación , preferiblemente gránulos debe ser utilizado por hombres en los que los efectos beneficiosos y la tolerancia para el reemplazo de andrógenos La terapia ya ha sido establecida. 7.- La inyección subcutánea de microcápsulas de testosterona en hombres con hipogonadismo aumenta en suero los niveles de testosterona en el rango normal de cinco a siete semanas . Una desventaja de la formulación de microcápsulas de testosterona parece ser la liberación por reventamiento inicial de testosterona . 8.- La aplicación transdérmica de testosterona en parches escrotal o no escrotal aumenta los niveles séricos de la testosterona en el rango normal e incluso imita la testosterona circadiano fisiológico ritmo. Los parches de testosterona no escrotales causan irritaciones de la piel hasta en el 60 % de los pacientes , o fuerza tener problemas de adherencia . 9.- La administración diaria de gel de testosterona aumenta los niveles séricos de testosterona en hipogonadismo los pacientes dependiendo de la dosis a la gama normal. La aceptabilidad del gel es alta y se ha convertido una terapia estándar de reemplazo en los primeros años después de su aprobación . Ciclos de esteroides: Para usuarios intermedios Semana del ciclo Proviron mg / día 1 Boldenona mg / semana Winstrol mg / EOD Nolvadex mg / dia Clomid mg / día HCG U.I / E3D 400 2 50 400 10 3 50 400 10 4 50 300 10 5 50 300 50 10 6 50 300 50 10 7 50 200 50 10 8 50 200 50 10 9 50 10 1000 10 50 10 1000 11 30 100 12 20 50 13 20 50 Ciclos de esteroides: Para mujeres Semana Oxandrolona (mg/ED) Primobolan (mg/sem) Winstrol Oral (mg/ED) Clomid (mg/ED) 1 10 50 - - 2 10 50 - - 3 10 50 8 - 4 10 50 8 - 5 10 50 8 - 6 10 50 8 - 7 - 50 8 - 8 - 50 8 - 9 - - - 25 Ciclos de esteroides: Para masa Semana del ciclo Boldenona mg / semana Sustanon mg / semana Dianabol mg / día 1 200 250 25 2 250 250 25 25 10 6 3 300 500 30 25 20 9 4 350 500 30 50 20 9 5 350 500 30 50 20 9 6 250 500 30 50 20 9 7 200 500 30 50 20 9 8 100 250 25 50 20 9 25 20 9 9 10 11 12 Proviron mg / diá Nolvadex mg / día Liv 52 tab / día Serophene mg / día H C G U .I / s e m a n a 100 2 5 0 0 50 2 5 0 0 50 2 5 0 0 6 25 10 9 Resumen: Medidas Coordinadas. • Análisis con muestras sanguíneas. • Controles por Sorpresa fuera de Competición. • Concienciación o Educación Antidoping en la población deportista desde su inicio. • Actuación conjunta a nivel Internacional WADA, CIO, Gobiernos. • Implicación de los Estados y modificaciones del Código Penal. • Detección precoz e inmediata de nuevas sustancias enmascarantes como la DMT Desoximetiltestosterona. • Tener en cuenta la raza y la delección genética: Lista de sustancias prohibidas AMA 2015 (Tanto en Competición como Entrenamiento) 4.- MODULADORES DE HORMONAS Y DEL METABOLISMO: 1. Inhibidores de la aromatasa, que incluyen pero no se limitan a: aminoglutetimida, androsta-1,4,6-trien-3,17-diona (androstatriendiona), 4-androsten-3,6,17 triona (6oxo), anastrozol, exemestano, formestano, letrozol, testolactona. 2. Moduladores selectivos de los receptores de estrógeno (SERMs), que incluyen pero no se limitan a: raloxifeno, tamoxifeno, toremifeno. 3. Otras sustancias antiestrogénicas, que incluyen pero no se limitan a: clomifeno, ciclofenil, fulvestrant. 4. Agentes modificadores de la(s) funcion(es) de la miostatina, que incluyen pero no se limitan a: inhibidores de miostatina. 5. Moduladores Metabolicos: a) Insulinas b) Agonistas del Receptor Activado por Proliferadores de Peroxisomas δ (PPARδ) (p.ej. GW 1516) y los agonistas del eje PPARδ-proteína kinasa activada por la AMP (AMPK) (p.ej. AICAR). HAVOC: prohormonas Las prohormonas ejercen sus efectos a través de muchos mecanismos diferentes, pero el más importante para la gente que considere su uso es su influencia sobre los receptores androgénicos, estrogénicos y progestogénicos del cuerpo. Se piensa que estos receptores son los principales mediadores de los efectos de las prohormonas, siendo el resto de vías de secundaria importancia. Las prohormonas, al igual que los esteroides anabólicos, son agonistas de los andrógenos, lo que significa que funcionan a través de los receptores androgénicos. Un agonista potente del receptor androgénico implica que los efectos relacionados con la hormona masculina testosterona serán especialmente prominentes. Esto incluye agresividad y motivación aumentadas, mayor impulso sexual, y características “macho alfa” en general, así como un riesgo aumentado de efectos secundarios relacionados con niveles altos de andrógenos como mayor susceptibilidad, pérdida del cabello y acné, aunque estos efectos secundarios son muy individuales y dependen de cada persona. Usualmente suelen ser un problema sólo para los que ya son propensos a este tipo de problemas. Debido a estos efectos androgénicos las hormonas pueden producir notables ganancias en fuerza y masa muscular, y un efecto “endurecedor” en los músculos, de modo que estos parecen más densos y sólidos. Las prohormonas que no se convierten a estrógenos, como Epistane o Havoc de RPN, suelen proporcionar este tipo de ganancias musculares sin retención de agua. 1,- Halodrol- 50(4-chloro17a-methyl-1,4-diene-3,17 diol). 2,-Havoc/Epistane (2a-3aepithio-17a-methyl-5aandrostan-17b-ol). 3,-Delta 2 (Delta-2 Androstenone),etc… Influencia de la genética en el perfil esteroideo del deportista. Aplicaciones y consecuencias MICINN I+D DEP2009-14788-C03-01 (subprograma DEPO) Introducción • El marcador principal del consumo de prohormonas de testosterona es la relación urinaria de concentraciones entre testosterona/epitestosterona (T/E), cuando el valor es superior a 4, se considera que ha podido ocurrir una administración exógena. Agencia Mundial Antidopaje (WADA-AMA) Mayo 2004 • UGT2B7, UGT2B15 y UGT2B17 son los principales catalizadores de la glucuronización de andrógenos y sus metabólitos en el ser humano. Glucuronidación.- La reacción consiste en agregar un grupo glucuronil en un grupo hidroxilo, amino o sulfhidrilo del tóxico. La enzima que cataliza la reacción es la UDP glucuronil transferasa y el donador del grupo polar es el ácido UDP glucurónico. La enzima se encuentra localizada en el retículo endoplásmico, a diferencia de las otras enzimas de la Fase II que se localizan en el citosol. Los compuestos glucuronidados son muy solubles en agua y aparecen en la orina y en la bilis. Existe un número muy grande de xenobióticos que son substrato de esta enzima. UGT2B17: la mayor enzima para la glucuronización de la testosterona Será posible que el perfil esteroideo en deportistas tenga relación con parámetros fisiológicos y genéticos. Se podrán desarrollar de modelos matemáticos para la determinación de niveles umbrales de esteroides en control de dopaje. AEA-LCD: D. J. A. Muñóz-Guerra Revilla, Dña S. Vargas Gª-Tenorio, Dña E. Serrano Garde, Dña A. B. Soldevilla. EPMD: D Francisco Miguel Tobal, Dña Pilar Martín Escudero, Dña Mercedes Galindo Canales UAI-UG_HCSC: Dña. Cristina Fernández, Dña Náyade del Prado, D. Manuel Enrique Fuentes Ferrer, Dña. Laura Barreales Tolosa, Dña. Sara Cano Escudero. Dña. Mª Luisa Maestro de las Casas, Dña. Dña. Silvia Veganzones de Castro, Dña. Sara Rafael Fernández. MICINN I+D DEP2009-14788-C03-01/02/03 (subprograma DEPO) Objetivos: • Caracterizar el perfil esteroideo en deportistas y su relación con parámetros fisiológicos mediante la medición de la concentración en orina de: Testosterona, Epitestosterona, Androsterona, Etiocolanolona, Dehidrotestosterona y Dehidroepiandrosterona. Así mismo se medirá la variabilidad de una serie de relaciones entre anabolizantes (Testosterona / Epitestosterona) y la concentración de la hormona Hormona Luteneizante (LH) inductora de la síntesis de esteroides. • Construir modelos matemáticos que permitan establecer intervalos de confianza dentro del cual cualquier fluctuación de los parámetros característicos del perfil esteroideo será considera como “normal”. • Estudio de la influencia genómica en la determinación del perfil esteroideo: describir la frecuencia de aparición de la deleción polimórfica; UGT2B17. • Validar el modelo mediante el estudio longitudinal retrospectivo de muestras de orina de deportistas de élite suministrados de modo anónimo por la Comisión de seguimiento y Salud del Deportista [CCSSD] dependiente del Consejo Superior de Deportes. Objetivos principales: • Estimar la prevalencia de las diferentes formas de expresión del gen UGT2B17 en deportistas • Estudiar como su mutación afecta a los valores urinarios del perfil esteroideo. Diseño del estudio (1): • Cohorte prospectiva • Ámbito: Población deportista, de 16 a 55 años, de ambos sexos y diferentes modalidades deportivas. • Población muestreada: 141 deportistas estratificados por edades El tamaño de muestra se justifica por la variabiliadad observada en muestras pilotos obtenidas en una población similar al conjunto de muestras que debe procesar el LCD durante un periodo de tiempo aproximado de tres meses, encontrándose una variación de la relación testosterona / epitestosterona de 0.15 con un nivel de confianza del 95% y un error de precisión de 0,01. Diseño del estudio (2): • Criterios de inclusión; deportistas sanos de 16 a 55 años de ambos sexos, de diferentes especialidades deportivas y que hayan firmado previamente al estudio un consentimiento informado de someterse a dicho estudio (los menores de 18 años dicho consentimiento será firmado por su tutor legal y por el mismo). Diseño del estudio (3): • Variables dependientes de estudio: • Concentración en orina de • Testosterona • Epitestosterona, • Testosterona / Epitestosterona Variables independientes: Cuestionario Edad, sexo, raza, estado civil, nivel de estudios Números de horas de entrenamiento día/semana, tipo de deporte realizado Genéticos (polimorfismo de deleción UGT2B17) Reclutamiento Contacto Federaciones Consentimiento escrito Cuestionario Estudio nutricional Estudio antropométrico Muestra sanguínea (1 muestra, 15mml) Parámetros sanguíneos, bioquímicos Genética Muestras orina 10 muestras (50mm durante 48 horas consecutivas, respetando el descanso nocturno). de 7 a 9h, 10 a 11h, de 13 a14h, de 15 a 18h y de 21 a 22 h de cada día. Seguimiento 3 meses (1 por mes) LIAC-HCSC Base de datos anonimizada AEA-LCD CONSIDERACIONES ÉTICAS DEL ESTUDIO: • Informe de un Comité de Ética e Investigación Clínica independiente para la realización del estudio (HCSC). • En todo momento los investigadores cumplieron con las normativas nacionales e internacionales de investigación en humanos y se aseguró el anonimato de los voluntarios sometidos a estudio y los datos solo son utilizados para los objetivos de este estudio. ANALISIS ESTADISTICO: • Las variables cualitativas se presentan con su distribución de frecuencias. • Las variables cuantitativas se resumen en su media y su desviación estándar (DE) y, las variables asimétricas se expresan con mediana y rango intercuartil (RIQ = P25 - P75). • Se evaluó la asociación entre la raza y el tipo de genotipo mediante el test exacto de Fisher. • La comparación de los niveles medianos de T/E se realizó mediante el test no paramétrico de la mediana. • Para todas las pruebas se aceptó un valor de significación del 5%. • El análisis de los datos se realizó con el paquete estadístico STATA 11.0. ANALISIS ESTADISTICO: • Se estudió el efecto independiente de las variables explicativas (sexo, edad, tipo de deporte y genotipo) con la variable niveles de T/E en orina a través de un modelo de regresión lineal múltiple modelado a través de ecuaciones de estimación generalizadas (GEE). • En el modelo se introdujo la variable dependiente trasformada logarítmicamente. • Se presentan las razones de medias ajustadas junto a sus intervalos de confianza al 95%. RESULTADOS Características socio-demográficas (N=141) n (%) Edad media (DE) 29,3 (11,5) Sexo Hombres 88 (62,4) Mujeres 53 (37,6) Española 125 (93,3) Caucasiana 130 (92,2) Nacionalidad Raza Asiática 10 (7,1) Negra 1 (0,7) Distribución de deportistas por especialidades deportivas n=41 Baloncesto n=25 Montaña n=16 Rugby n=11 Ciclismo Halterofilia n=9 Otros n=9 Voleibol n=8 Artes marciales n=8 Trialtlón n=5 Atletismo n=5 n=4 Lucha libre olimpica 0 5 10 15 Nº de deportistas 20 25 30 % 50 n=65 45 40 n=47 35 Resultados descriptivos 3: 30 25 n=29 20 15 10 5 0 Anaerobico Mixta Areóbico Tipo de deporte Tabla. Características antropométricas (N=141) Media (DE) Índice cintura cadera* 0,80 (0,73-0,84) Peso 71,0 (12,2) Talla 172,3 (9,0) Índice de masa corporal 23,8 (2,9) Componente endomorfo 4,2 (1,4) Componente mesomorfo 23,3 (5,8) Componente ectomorfo 4,3 (2,2) * Mediana y rango intercuartílico Resultados genéticos: 39,72 Polimorfismo heterocigoto 48,23 Homocigot o Wt Homocigot o mutado homo mutado homo w t Heterocigot o 12,06 Resultados analíticos 1: Individuo deporte ID DEPORTISTA 0 RAZA: 1 (cauc), 2 (negro), 3 (asiatico) 1 Baloncesto 1 Seguimiento Testosterona y Epitestosterona sexo (1 hombre) 2 (mujer) edad 1 350 7000 120 300 6000 100 250 5000 80 200 4000 60 150 3000 40 100 2000 20 50 1000 0 0 7:45 10:30 12:40 17:40 Testosterona 21:30 9:00 11:00 13:50 17:30 0 23:30 Epitestosterona 7:45 10:30 12:40 17:40 21:30 5a-androstan-3a,17b-diol relacion Testosterona/Epitestosterona 9:00 11:00 13:50 17:30 2,50 0,60 0,50 2,00 0,40 10:30 12:40 17:40 21:30 9:00 11:00 13:50 17:30 Etiocolanolona 1,50 0,30 0,30 1,00 0,20 0,20 0,50 0,10 0,10 23:30 7:45 10:30 12:40 17:40 21:30 9:00 11:00 13:50 17:30 0,00 0,00 23:30 7:45 Testosterona / Epitestosterona relacion 5aAdiol/epitestosterona 2,00 200,00 1,50 150,00 1,00 100,00 0,50 50,00 7:45 10:30 12:40 17:40 21:30 9:00 5aDiol / Epitestosterona 9:00 11:00 13:50 17:30 11:00 23:30 7:45 10:30 12:40 17:40 21:30 13:50 17:30 0,00 23:30 7:45 10:30 12:40 17:40 21:30 9:00 11:00 13:50 17:30 Androsterona / Etiocolanolona relacion androsterona/testosterona 250,00 23:30 10:30 12:40 17:40 21:30 5aDiol / 5bDiol 2,50 0,00 heterocigoto relacion androsterona/etiocolanolona relacion 5aAdiol/5bAdiol 0,40 7:45 Androsterona 0,60 0,00 23:30 5b-androstan-3a,17b-diol 0,70 0,50 polimorfismo Seguimiento androsterona y etiocolanolona Seguimiento 5aA diol y 5bAdiol 140 23:30 24 9:00 Androsterona / Testosterona 11:00 13:50 17:30 Testosterona Epitestosterona Androsterona Etiocolanolona 5a-androstan-3a,17b-diol 5b-androstan-3a,17b-diol Testosterona / Epitestosterona 5aDiol / 5bDiol Androsterona / Etiocolanolona 5aDiol / Epitestosterona Androsterona / Testosterona media CV 28,3 80,1 4194,2 2506,3 121,8 272,9 0,5 0,4 1,7 1,6 149,6 22% 32% 26% 28% 22% 20% 22% 13% 20% 20% 20% Resultados analíticos 2: Individuo deporte 2 Baloncesto 0 ID DEPORTISTA RAZA: 1 (cauc), 2 (negro), 3 (asiatico) sexo (1 hombre) 2 (mujer) 1 Seguimiento Testosterona y Epitestosterona edad 1 500 8000 70 450 7000 400 6000 350 50 5000 300 40 250 4000 30 200 3000 150 20 0 2000 100 10 1000 50 23:00 8:00 10:30 12:35 17:00 Testosterona 21:30 9:00 11:00 13:30 17:30 0 0 23:00 Epitestosterona 8:00 relacion Testosterona/Epitestosterona 1,60 0,45 1,40 0,40 17:00 21:30 9:00 11:00 13:30 17:30 23:00 8:00 10:30 12:35 17:00 21:30 Androsterona 5b-androstan-3a,17b-diol 9:00 11:00 13:30 17:30 Etiocolanolona relacion androsterona/etiocolanolona 2,50 2,00 0,35 1,20 1,50 0,30 1,00 0,25 0,80 1,00 0,20 0,60 0,15 0,40 0,50 0,10 0,20 0,05 23:00 8:00 10:30 12:35 17:00 21:30 9:00 11:00 13:30 17:30 0,00 0,00 23:00 8:00 Testosterona / Epitestosterona relacion 5aAdiol/epitestosterona 3,00 120,00 2,50 100,00 2,00 80,00 1,50 60,00 1,00 40,00 0,50 20,00 8:00 10:30 12:35 17:00 21:30 9:00 5aDiol / Epitestosterona 12:35 17:00 21:30 9:00 11:00 13:30 17:30 11:00 23:00 8:00 10:30 12:35 17:00 21:30 13:30 17:30 0,00 23:00 8:00 10:30 12:35 17:00 21:30 9:00 11:00 13:30 17:30 Androsterona / Etiocolanolona relacion androsterona/testosterona 140,00 23:00 10:30 5aDiol / 5bDiol 3,50 0,00 12:35 relacion 5aAdiol/5bAdiol 0,50 0,00 10:30 5a-androstan-3a,17b-diol 1,80 polimorfismo homo. Wt Seguimiento androsterona y etiocolanolona Seguimiento 5aA diol y 5bAdiol 80 60 32 9:00 Androsterona / Testosterona 11:00 13:30 17:30 Testosterona Epitestosterona Androsterona Etiocolanolona 5a-androstan-3a,17b-diol 5b-androstan-3a,17b-diol Testosterona / Epitestosterona 5aDiol / 5bDiol Androsterona / Etiocolanolona 5aDiol / Epitestosterona Androsterona / Testosterona media CV 51,7 45,1 5114,2 2899,3 116,5 305,0 1,4 0,4 1,8 2,5 97,4 35% 37% 39% 41% 39% 39% 10% 8% 22% 12% 22% Resultados analíticos 3: HETEROCIGOTO HOMOCIGOTO WT HOMOCIGOTO MUTADO Relación del genotipo con la raza de los deportistas. Heterocigoto (ins/del) Homocigoto mutado (del/del) Homocigoto wt (ins/ins) Total n (%) n (%) n (%) n (%) Caucásica 53 (40,8) 9 (6,9) 68 (52,3) 130 (100,0) Otras 1 (100,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 1 (100,0) Asiática Total P<0,001 2 (20,0) 8 (80,0) 0 (0,0) 10 (100,0) 56 (39,7) 17 (12,1) 68 (48,2) 141 (100,0) Resultados estadísticos: Tabla. Modelo de regresión lineal múltiple (GEE). Razón de medias IC 95% p Sexo Hombres 1 Mujeres 0,89 0,71 1,12 0,325 Edad cuartiles (años) <21 1 21-27 0,89 0,66 1,19 0,429 28-35 0,89 0,65 1,20 0,439 >35 1,08 0,74 1,58 0,685 Polimorfismo Heterocigoto 1 Homo mutado 0,17 0,12 0,25 <0,001 Homo wt 1,53 1,22 1,91 <0,001 Tipo de deporte Anaeróbico Significa que los homocigotos mutados presentan una reducción relativa del 83% en los niveles medios de testo /epi frente a los heterocigotos, ajustado a las variables incluidas en el modelo. 1 Mixto 1,02 0,76 1,37 0,886 Aeróbico 0,95 0,67 1,35 0,772 Significa que los homocigotos wt presentan un aumento del 53 % en los niveles medios de testo /epi frente a los heterocigotos, ajustado a las variables incluidas en el modelo. epitestosterona en función del polimorfismo de deleción UGT2B17 P<0,001 Modelo de regresión lineal múltiple (GEE). Relación del sexo, edad, tipo de deporte y genotipo con el índice de testosterona/epitestosterona en orina. Sexo Hombres Razón de Límite inferior medias IC 95% Límite superior IC95% p 0,71 1,12 0,325 0,66 0,65 0,74 1,19 1,20 1,58 0,429 0,439 0,685 0,12 1,22 0,25 1,91 <0,001 <0,001 0,76 0,67 1,37 1,35 0,886 0,772 1 Mujeres 0,89 Edad cuartiles (años) <21 1 21-27 0,89 28-35 0,89 >35 1,08 Polimorfismo Heterocigoto 1 Homocigoto mutado 0,17 Homocigoto wt 1,53 Tipo de deporte Anaeróbico 1 Mixto 1,02 Aeróbico 0,95 IC: intervalo de confianza 95% CONCLUSIONES: • Los deportistas que son homocigotos mutados (del/del) según el estudio realizado muestran una reducción relativa de los niveles medianos de testosterona /epitestosterona (T/E) frente a los heterocigotos (ins/del) y a los homocigotos (ins/ins). • Esto quiere decir que los deportistas que presentan esta mutación y que suponen, en nuestra muestra, el 80% de los deportistas de raza oriental analizados en nuestra serie, presentan una clara ventaja frente a otros deportistas de otras razas como la caucasiana, en los márgenes de no detección de abuso del consumo de esteroides. Ensayo clínico cruzado en población deportiva según polimorfismoUGT2B17. Impacto en el perfil esteroideo Los objetivos concretos del estudio son: 1.- Contrastar de la variabilidad del perfil esteroideo durante periodos prolongados de dos meses frente a la variabilidad observada durante el periodo de 2 días consecutivos, evaluada con anterioridad en el desarrollo del estudio descrito anteriormente 2.- Continuar con el desarrollo de un modelo matemático válido para caracterizar el perfil esteroideo durante periodos de tiempo prolongados. 3.- Caracterizar la alteración del perfil esteroideo cuando se administra Testosterona 4.- Desarrollar y validar un procedimiento de trabajo de análisis que permita minimizar la incertidumbre de medida en la estimación del perfil esteroideo en aquellos casos en que el rango de concentración de los compuestos determinados sean del orden de 10ng/mL o inferiores. 5.- Determinar los parámetros del perfil esteroideo que sean más estables y sensibles a la administración exógena de esteroides anabolizantes de carácter endógeno, de manera que la ventana de detección de la administración sea máxima 6.- Estudiar la influencia genómica sobre el perfil esteroideo cuando se efectúa una administración exógena, estudiando el comportamiento de las variables del perfil esteroideo en función del polimorfismo de UGT2B17. 7.- Evaluar la eficacia del análisis CIRMS en la población seleccionada (consumo de esteroides) en función del genotipo Contrastar la eficacia del análisis CIRMS con la eficacia del modelo matemático desarrollado para la detección del consumo de sustancias dopantes. 8.- Identificar otros metabolitos de testosterona que no se vean alterados por la deleción genética pero sí se vean alterados de forma significativa por la administración exógena de esteroides anabolizantes. Programación de la administración y toma de muestras: Muestras de orina: por individuo se recopilarán un total de 40 determinaciones de orina (10 más si el sujeto no participaba en el estudio anterior) que se extenderán al menos durante 7 meses. La distribución de las recolecciones se muestra en la figura adjunta. Todas las muestras, excepto las diez primeras (se toman en dos días) se tomarán en la primera micción del día. Análisis de sangre: se realizará un análisis de sangre antes de la primera administración, en caso de que el deportista no haya participado en el estudio anterior también se realizará la determinación del polimorfismo UGT2B17. Se realizará dos análisis de seguridad uno a los 20 días de cada una de las administraciones para observar alteraciones y modificaciones sugerentes de inadecuación a la medicación inyectada. Finalmente se realizará un último análisis tras tres meses después de la última administración (ver figura más abajo). Previa a la administración Día 20 postadministración ADMINISTRACIÓN 20 días Día 20 post-administración ADMINISTRACIÓN 3 meses postadminstración