Download procedimiento de proteccion y de conservacion de microorganismos

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OFICINA ESPAÑOLA DE
PATENTES Y MARCAS
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ES 2 074 551
kInt. Cl. : A23K 1/00
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ESPAÑA
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C12N 1/04
TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA
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kNúmero de solicitud europea: 90400558.4
kFecha de presentación : 28.02.90
kNúmero de publicación de la solicitud: 0 413 615
kFecha de publicación de la solicitud: 20.02.91
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54 Tı́tulo: Procedimiento de protección y conservación de microorganismos, en particular bacterias.
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73 Titular/es: Legarda, Joseph-Louis
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72 Inventor/es: Legarda, Joseph-Louis
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74 Agente: Gil Vega, Vı́ctor
30 Prioridad: 17.07.89 FR 8909583
37, rue des Cigales
F-33980 Audence, FR
45 Fecha de la publicación de la mención BOPI:
16.09.95
45 Fecha de la publicación del folleto de patente:
16.09.95
Aviso:
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En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletı́n europeo de patentes,
de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina
Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar
motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de
oposición (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas).
Venta de fascı́culos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid
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DESCRIPCION
Procedimiento de protección y conservación
de microorganismos, en particular bacterias.
La presente invención tiene por objeto un procedimiento de protección y conservación de microorganismos, en particular bacterias.
Los microorganismos tales como las levaduras
o las bacterias, se utilizan actualmente de manera
corriente en los campos de la agronomı́a y de la
agroalimentación. Por tanto, es necesario disponer de medios eficaces que permitan conservar sus
actividades biológicas y protegerlos de las acciones exteriores durante su almacenamiento para
permitir su utilización ulterior. Actualmente, las
técnicas de protección y conservación más utilizadas son la congelación y la liofilización. Ambos procedimientos proporcionan resultados muy
satisfactorios, pero someten las bacterias a variaciones de presión y temperatura que pueden perjudicar su integridad y que presentan además el
inconveniente de necesitar un equipo costoso.
En la patente francesa núm. 76/32722 se describe un procedimiento de protección y conservación de microorganismos por medio de arcillas,
destinado a ser utilizado en agronomı́a para el
tratamiento de los suelos.
Esta técnica no es utilizable en el campo
agroalimentario, en el cual las bacterias han de ser
incorporadas en la alimentación. En efecto, las
actividades enzimáticas de ciertas bacterias hacen
que constituyan unos aditivos biológicos que tienen una eficacia zootécnica particularmente interesante, especialmente al nivel del tracto gastrointestinal, para la utilización óptima de la ración
alimenticia de los animales.
La solicitud de patente europea EP-A0.131.114, describe un procedimiento de producción de una preparación seca y estable, en
forma de polvo o de gránulos y que contiene bacterias revitalizables, que después de su rehidratación, contiene, por lo menos, 109 células viables
por cada gramo de preparación, incluyendo dicho
procedimiento una etapa de secado de la masa
producida por medio de un gas muy caliente.
En la solicitud de patente francesa FR-A2.609.044, se describe un método para la preparación de una asociación de Lactobacillus bulgaricus y Streptococcus thermophilus, en la cual las
dos bacterias se inoculan en condiciones estériles
en un terreno de cultivo a base de leche en polvo
y/o suero en polvo, de extracto de malta, de autolisato de levadura y otros sustratos de cultivo
apropiados.
Por consiguiente, la presente invención tiene
por objeto proponer un procedimiento de protección y conservación de bacterias poco costoso,
cómodo y que permite que las bacterias sean directamente consumidas por los animales.
El procedimiento de la invención consiste en
efectuar, por lo menos, las tres etapas sucesivas
siguientes en condiciones no estériles:
- una primera etapa de reproducción de bacterias consistente en una mezcla de bacterias procedentes de colección y de bacterias
obtenidas de la naturaleza,
- una segunda etapa de amortiguación me2
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diante la puesta en contacto de las bacterias, después de la etapa de reproducción,
con un medio nutritivo que contiene leche
en polvo enriquecida con biocatalizador y
minerales,
- una tercera etapa de estabilización mediante la puesta en contacto del producto
obtenido en la segunda etapa con un medio
que contiene por lo menos un extracto de
cereales.
De este modo las bacterias, después de su reproducción, se deshidratan progresivamente en presencia de un medio nutritivo.
De acuerdo con una forma particular de
puesta en práctica de la invención, la etapa de
reproducción de las bacterias se efectúa en un
tiempo de 12 a 48 horas.
La etapa de reproducción permite obtener una
población mixta de bacterias estables en la cual se
encuentran todas las bacterias importantes para
la mezcla probiótica.
En estas condiciones, al final de la reproducción, se dispone de un número de bacterias
lácticas igual o superior a 107 por ml y un número
de levaduras igual o superior a 104 por ml.
De acuerdo con otra forma particular de
puesta en práctica de la invención, la etapa de
amortiguación se realiza poniendo en contacto las
bacterias, después de la etapa de reproducción,
con leche en polvo enriquecida con minerales.
Entre los minerales preferidos pueden mencionarse los catalizadores.
De manera ventajosa, la etapa de amortiguación se efectúa en un tiempo de 18 a 24 horas.
La etapa de amortiguación asegura una primera absorción del agua contenida en las bacterias, lo que las prepara para el choque osmótico al
cual serán sometidas en la etapa de estabilización,
aportándolas al mismo tiempo los elementos nutritivos necesarios para su metabolismo.
De acuerdo con una forma preferida de puesta
en práctica de la invención, la etapa de estabilización se realiza poniendo en contacto el producto
obtenido en la segunda etapa por lo menos con un
extracto de cereales, tales como el maı́z, el trigo,
la soja, el arroz o una mezcla de los mismos.
La etapa de estabilización se efectúa ventajosamente por medio de carozos de maı́z triturados,
extrudidos o transformados en copos, durante un
perı́odo de tiempo de 45 minutos.
Según una forma ventajosa de puesta en
práctica de la invención, las tres etapas se realizan en condiciones no estériles.
La invención se entenderá claramente con la
lectura de la descripción que sigue, la cual se da
únicamente a tı́tulo de ilustración del procedimiento de la invención.
Las bacterias se seleccionan partiendo de familias o cepas bacterianas cuyas actividades enzimáticas son conocidas, y se eligen en función de
la utilización biológica prevista.
Estas familias y cepas bacterianas pueden proceder de colección y, por tanto, estar perfectamente identificadas y registradas, o pueden obtenerse mediante técnicas clásicas de adquisición
en la naturaleza, dilución, siembra y cultivo en
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un medio nutritivo.
Puede utilizarse una mezcla de bacterias constituida a la vez por bacterias procedentes de colecciones tales como:
- Lactobacillus plantarum
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- Lactobacillus acidophilus
(estas cepas son bacterias lácticas, huéspedes habituales del tubo digestivo de los mamı́feros),
y de bacterias obtenidas mediante adquisición
en la naturaleza, las cuales presentan frecuentemente, como consecuencia de mutaciones naturales, una resistencia más elevada a las acciones
exteriores.
La etapa de reproducción de las bacterias se
efectúa a partir de un litro de bacterias mezclado en 20 litros de agua con 5 kilos de leche
en polvo enriquecida con biocatalizadores y minerales. La mezcla se deja descansar durante
un perı́odo de tiempo de 24 horas a 37 grados
centı́grados. La multiplicación de las bacterias da
lugar a una reducción del pH que pasa de aproximadamente 5’7 a 4. La utilización de bacterias
obtenidas mediante adquisición en la naturaleza
y por tanto protegidas genéticamente contra infestaciones y contaminaciones exteriores, permite
operar en condiciones no estériles durante las tres
etapas del procedimiento.
La mezcla que contiene las bacterias, obtenida
después de la etapa de reproducción, se pone a
continuación en contacto con 25 kilos de leche en
polvo enriquecida con biocatalizadores y minerales, para la etapa de amortiguación. La mezcla
se deja descansar durante 24 horas a una temperatura de 37 grados centı́grados. Se observa una
primera absorción de agua que permite preparar
las bacterias de la mezcla para el choque osmótico
de la etapa de estabilización. Durante la etapa de
amortiguación se observa una reducción del pH
que pasa de aproximadamente 5’2 a 4’3.
El producto obtenido después de la etapa de
amortiguación se mezcla a continuación con carozos de maı́z extrudidos para la etapa de estabilización, siendo la proporción de aproximadamente
600 kilos de carozos de maı́z por 100 kilos del
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producto obtenido después de la etapa de amortiguación. La mezcla ası́ preparada se deja descansar durante 45 minutos a la temperatura de
37 grados centı́grados. Durante esta etapa, se observa un incremento del pH que pasa de aproximadamente 4’3 a 5’3.
La mezcla inicial en la cual las bacterias se
han reproducido contenı́a un 75% de agua, mientras que el producto final, obtenido después de
la etapa de estabilización, contiene tan solo un
2% de agua y puede ser conservado durante un
tiempo de tres meses en un lugar seco a 37 grados centı́grados.
El producto obtenido por el procedimiento
según la invención puede ser incorporado directamente en la alimentación de los animales para
los cuales constituye un aditivo biológico de eficacia zootécnica muy interesante. En efecto, la
simbiosis microbiana, gracias a los productores de
enzimas tales como las celulasas y las amilasas, refuerza el potencial del animal para una mejor utilización de la ración alimenticia. De esta manera
es posible favorecer la lactancia, el crecimiento, la
digestión o el apetito de los animales.
A tı́tulo de ejemplo, la utilización en los
bóvidos de un producto obtenido de acuerdo con
el procedimiento de la invención, incorporado en
la ración alimenticia del animal a razón de 17 a
50 gramos por dı́a, permite obtener, en particular, una mejor digestión de la ración, mejorar el
crecimiento, orientar el metabolismo del animal
hacia la producción de proteı́nas, y mejorar su
estado sanitario.
El producto obtenido por el procedimiento de
la invención puede constituir también, según la
naturaleza de las bacterias utilizadas, un aditivo
biológico para el tratamiento de los estercoleros.
Entre otras cosas permite mejorar la homogeneidad del estercolero, disminuir la formación de
amonı́aco y reducir los olores.
El procedimiento de la invención es fácil de poner en práctica y no requiere un equipo costoso y
sofisticado. El producto obtenido es fácil de utilizar, encuentra aplicaciones diversas y puede ser
almacenado durante un largo perı́odo de tiempo
sin perjudicar las actividades biológicas de los microorganismos que contiene.
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que contiene por lo menos un extracto de
cereales.
REIVINDICACIONES
1. Procedimiento de protección y conservación de bacterias, caracterizado porque se
efectúan por lo menos las tres etapas sucesivas
siguientes, en condiciones no estériles:
- Una primera etapa de reproducción de bacterias, que consiste en mezclar bacterias
procedentes de colecciones y bacterias obtenidas mediante adquisición en la naturaleza.
- Una segunda etapa de amortiguación mediante la puesta en contacto de las bacterias, después de la etapa de reproducción,
con un medio nutritivo que contiene leche
en polvo enriquecida con biocatalizador y
minerales.
- Una tercera etapa de estabilización mediante la puesta en contacto del producto
obtenido en la segunda etapa con un medio
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2. Procedimiento de protección y conservación
de bacterias según la reivindicación 1, caracterizado porque la etapa de reproducción se efectúa
durante un perı́odo de tiempo de 12 a 48 horas.
3. Procedimiento de protección y conservación de bacterias según la reivindicación 1 ó 2,
caracterizado porque la etapa de amortiguación
se efectúa durante un perı́odo de tiempo de 18 a
24 horas.
4. Procedimiento de protección y conservación de bacterias según la reivindicación 1, caracterizado porque la etapa de estabilización se
realiza poniendo en contacto el producto obtenido
en la segunda etapa con carozos de maı́z triturados, extrudidos o transformados en copos.
5. Procedimiento de protección y conservación de bacterias según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque
la etapa de estabilización se efectúa durante un
perı́odo de tiempo de 18 a 24 horas.
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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva
del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD
2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicación
del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del
7-10-1992, no producirán ningún efecto en España
en la medida en que confieran protección a productos quı́micos y farmacéuticos como tales.
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Esta información no prejuzga que la patente esté o
no incluı́da en la mencionada reserva.
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