Download microemulsiones basadas en lecitina que contienen enzimas

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OFICINA ESPAÑOLA DE
PATENTES Y MARCAS
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kInt. Cl. : A61K 7/155
11 Número de publicación:
2 190 530
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ESPAÑA
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TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA
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kNúmero de solicitud europea: 97920886.5
kFecha de presentación: 19.05.1997
kNúmero de publicación de la solicitud: 0 955 991
kFecha de publicación de la solicitud: 17.11.1999
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54 Tı́tulo: Microemulsiones basadas en lecitina que contienen enzimas proteolı́ticos y procedimiento
para la depilación enzimática permanente.
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73 Titular/es: Evangelia Protopapa
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72 Inventor/es: Protopapa, Evangelia;
30 Prioridad: 22.05.1996 GR 96100168
6, Agrafon Street, Anixis
145 65 Attikis, GR
Aristotelis Xenakis
Spyridon Avramiotis y
Konstantinos Sekeris
45 Fecha de la publicación de la mención BOPI:
01.08.2003
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45 Fecha de la publicación del folleto de patente:
ES 2 190 530 T3
01.08.2003
Aviso:
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Xenakis, Aristotelis;
Avramiotis, Spyridon y
Sekeris, Konstantinos
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74 Agente: Curell Suñol, Marcelino
En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletı́n europeo de patentes,
de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina
Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar
motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de
oposición (art. 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas).
Venta de fascı́culos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid
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ES 2 190 530 T3
DESCRIPCION
Microemulsiones basadas en lecitina que contienen enzimas proteolı́ticos y procedimiento para
la depilación enzimática permanente.
La presente invención se refiere a las preparaciones depilatorias de microemulsiones basadas
en lecitina que contienen enzimas proteolı́tocos.
La invención propuesta introduce por primera
vez la utilización de microemulsiones como medio para la solubilización de sistemas enzimáticos
proteolı́ticos, que favorecen la penetración de
moléculas activas a través de las membranas fosfolipı́dicas. Además, la presente invención se refiere a un procedimiento de depilación, que aplica
las preparaciones de la microemulsión que contienen el enzima α-quimitripsina, o el enzima tripsina, para la depilación de cualquier tipo de piel,
ası́ como a un procedimiento de depilación basado en la aplicación sucesiva de la preparación
de la microemulsión que contiene el enzima αquimiotripsina, seguido de la aplicación de la preparación de la microemulsión que contiene la enzima tripsina, dependiendo de las particularidades de cada tipo de piel. La aplicación de las
preparaciones depilatorias de las microemulsiones
que contienen bien el enzima α-quimiotripsina, o
el enzima tripsina, o la aplicación sucesiva en primer lugar de la preparación de la microemulsión
que contiene el enzima α-quimiotripsina, seguida
de la aplicación de la preparación de la microemulsión que contiene el enzima tripsina, se realiza
mediante una simple extensión a intervalos apropiados.
Los estudios experimentales publicados por
primera vez en la bibliografı́a internacional, han
mostrado que la acción del enzima α-quimiotripsina provoca la destrucción de las células madre
del folı́culo piloso, lo que explica los resultados
positivos en la depilación. La tripsina presenta
también resultados positivos similares en la depilación capilar, pero con una acción más suave.
Las microemulsiones son sistemas consistentes
en un medio orgánico inerte, en el que las gotitas
de agua se dispersan con la ayuda de la lecitina
que actúa como un tensioactivo natural. La dispersión de la fase acuosa, en la que se sitúan las
moléculas del enzima α-quimiotripsina o tripsina,
se consigue mediante una simple agitación suave.
La presente invención mejora la acción depilatoria de los enzimas α-quimiotripsina y tripsina,
debido al hecho de que se aplican mediante la microemulsión. El tipo de microemulsión es tal que
permite su fácil extensión sobre la superficie total de la piel que se ha de depilar. Además, la
presencia de la microemulsión ofrece la facilidad
para que se aplique en todos los tipos de piel,
tales como las pieles secas sensibles o las grasas
resistentes.
Se ha observado asimismo que la aplicación
sucesiva en primer lugar de la preparación de la
microemulsión que contiene el enzima α-quimiotripsina, seguida de la aplicación de la preparación de la microemulsión que contiene el enzima
tripsina, provoca una degradación importante del
folı́culo piloso, y que la aplicación sucesiva en primer lugar de la preparación de la microemulsión
que contiene el enzima α-quimiotripsina y a con2
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tinuación de la preparación de la microemulsión
que contiene el enzima tripsina presenta resultados depilatorios mejores que la aplicación sucesiva en primer lugar de la preparación de la microemulsión que contiene el enzima tripsina seguida de la aplicación de la que contiene el enzima α-quimiotripsina. Se ha observado asimismo
que la aplicación sucesiva en primer lugar de la
preparación de la microemulsión que contiene αquimiotripsina seguida de la aplicación de la preparación que contiene tripsina, presenta resultados depilatorios mucho mejores que la aplicación
de únicamente una de cada preparación de microemulsión depilatoria que contiene cualquiera de
los dos enzimas. Además, se ha observado que la
aplicación sucesiva de la preparación de la microemulsión que contiene α-quimiotripsina seguida
de la aplicación de la preparación de la microemulsión que contiene tripsina, incluso a bajas concentraciones de 0,05 mg/ml, presenta un efecto
degradante sobre el folı́culo piloso, haciendo de
este modo, a las preparaciones con bajas concentraciones de enzima apropiadas para ser aplicadas sobre las superficies secas, sensibles de la
piel. Por otra parte, se ha observado que la utilización de grandes concentraciones de enzima en
pieles secas, sensibles, conduce a una depilación
significativa pero con una intensa irritación. Por
consiguiente se recomienda aplicar, en tales tipos de pieles, preparaciones con bajas concentraciones de enzima. Además, la utilización de microemulsiones como vehı́culo para la transferencia
transdérmica de las macromoléculas activas, tales
como los enzimas propuestos, ofrece una considerable mejora de la metodologı́a de depilación por
la enzima, ya que la lecitina de la microemulsión
interfiere con la membrana fosfolipı́dica de las
células epiteliales, permitiendo la penetración de
los enzimas en las células.
Los enzimas proteolı́ticos α-quimiotripsina y
tripsina propuestos se utilizarán en estado absolutamente puro. Los enzimas se guardarán liofilizados en un congelador (-18◦ C) con el fin de que
se mantengan inalterados, evitando la desnaturalización. Para la producción de las preparaciones se disolverán las enzimas en una solución de
ácido clorhı́drico 0,001 M en agua bidestilada (pH
3) obteniéndose concentraciones de 1 a 5 mg/ml,
y se mantendrán en un medio estéril en un congelador (-18◦ C). Mediante este procedimiento la
actividad del enzima se mantiene invariable durante por lo menos 8 meses.
En paralelo, se prepararán microemulsiones
de lecitina según el siguiente procedimiento: Por
cada ml de solución final, se mezclan 0,75 a 1
ml de hidrocarburo alifático con 20 a 75 mg de
lecitina, 0 a 0,25 ml de alcohol alifático y 0,005
a 0,05 ml de solución tampón, pH 7 a 9. Mezclando los componentes anteriores, después de
una agitación suave, se obtiene una solución (microemulsión) transparente. Esta solución es termodinámicamente estable y tiene, por lo tanto,
un periodo de conservación ilimitado. Para evitar perturbar la estabilidad mediante una posible evaporación parcial de los constituyentes
orgánicos y por consiguiente alterar la composición total de la microemulsión, se almacena la
solución en recipientes tapados.
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La selección de las soluciones de tampón utilizadas para las preparaciones de las microemulsiones que contienen los enzimas proteolı́ticos αquimiotripsina o tripsina, se basa en el valor de
pH óptimo para las actividades de los enzimas anteriores, que son 7,8 y 8,8 respectivamente. Una
posible solución tampón para utilizar en la preparación de las microemulsiones de lecitina, es la
solución de 0,1 M tris-hidroximetilamino-metanoácido clorhı́drico, para el intervalo de pH 7,5 a 9,
aunque se pueden utilizar muchos otros tampones, que abarcan el intervalo de valores de pH
deseado.
Un poco antes de aplicar las preparaciones,
la solución del enzima se mezclará con la microemulsión de lecitina para la preparación del producto final, que si se almacena a una temperatura
de aproximadamente 2 a 6◦ C, conserva su acción
depilatoria durante tres dı́as por lo menos.
Según una materialización sugerida de la presente invención, se colocarán 2 ml de microemulsión de lecitina en isooctano en viales esterilizados de 2,5 ml, preparada mezclando 1,8 ml de
isooctano, 64 mg de lecitina de soja, 0,2 ml de
propanol-1 y, bien 0,03 ml de solución tampón 0,1
M tris-hidroximetilamino-metano-ácido clorhı́drico, pH 7,5 a 8 para las preparaciones de α-quimiotripsina, ó 0,03 ml de solución tampón 0,1 M trishidroximetil-aminometano-ácido clorhı́drico, pH
8,5 a 9 para las preparaciones de tripsina. En pequeñas cápsulas esterilizadas situadas en los viales e incopradas en una tapa especial, se colocarán
0,03 ml de la solución que contiene, bien la enzima α-quimiotripsina o la enzima tripsina a una
concentración de 3,4 mg/ml. La microemulsión
que contienen los viales, y las cápsulas pequeñas
se guardará a una temperatura de aproximadamente 2 a 6◦ C. Antes de utilizar las preparaciones
y antes de abrir el vial, presionando ligeramente
la tapa, se romperá la cápsula y se mezclará la so-
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lución enzimática contenida con la microemulsión
contenida en el vial. Mediante agitación de forma
reiterada del vial, se preparará la microemulsión
final que contiene el enzima α-quimiotripsina o
el enzima tripsina a una concentración final de
0,05 mg/ml, lista para ser utilizada. Como alternativa a la cápsula pequeña, se puede mantener
la solución enzimática en un vial independiente y
mezclar de manera similar con la solución de la
microemulsión poco antes de su utilización. La
aplicación de las preparaciones finales sobre la
piel a depilar se realizará inmediatamente después
y durante tres dı́as consecutivos. Durante este
intervalo las preparaciones se almacenarán en un
congelador (-18◦ C).
De este modo se ofrecen finalmente para su
utilización:
a) Preparaciones de microemulsiones basadas
en lecitina que contienen el enzima α-quimiotripsina a una concentración de 0,05 mg/ml y pH
7,5 a 8, y según una aplicación propuesta de la
invención a pH 7,8.
b) Preparaciones de microemulsiones basadas
en lecitina que contienen el enzima tripsina a una
concentración de 0,05 mg/ml y pH 8,5 a 9, y según
una aplicación propuesta de la invención a pH 8,8.
Para las superficies de las pieles grasas resistentes se propone aplicar sucesivamente en primer
lugar la preparación de la microemulsión que contiene el enzima α-quimiotripsina y a continuación
la preparación de la microemulsión que contiene
el enzima tripsina, mientras que en las superficies
de las pieles secas sensibles se propone aplicar las
preparaciones que contienen tripsina. Se deja a
juicio del especialista proponer la utilización de
las preparaciones de la microemulsión que contienen bien α-quimiotripsina o tripsina para aplicaciones sucesivas, para aumentar la cantidad total
de uno u otro enzima, dependiendo del tipo de
piel.
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REIVINDICACIONES
1. Preparación depilatoria en forma lı́quida,
basada en la acción de enzimas proteolı́ticos solubilizados en microemulsiones y aplicada mediante
una simple extensión, en la que la concentración
del enzima oscila entre 0,01 y 0,1 mg/ml y la microemulsión está constituida por 40 a 150 mg de
lecitina, 1,5 a 2 ml de hidrocarburo alifático, 0 a
0,5 ml de alcohol alifático y 0,01 a 0,1 ml de solución tampón, pH 7 a 9, abarcando el intervalo
de pH óptimo para la actividad del enzima.
2. Preparación depilatoria en forma lı́quida,
según la reivindicación 1, caracterizada porque
la enzima proteolı́tica es α-quimiotripsina, solubilizada en microemulsiones y aplicada mediante
una simple extensión, siendo la concentración del
enzima es 0,05 mg/ml y estando constituida la
microemulsión por 64 mg de lecitina, 1,8 ml de
isooctano, 0,2 ml de propanol-1 y 0,06 ml de solución tampón de tris-hidroximetilamino-metanoácido clorhı́drico, pH 7,5 a 8, abarcando el intervalo de pH óptimo para la actividad del enzima
α-quimiotripsina.
3. Preparación depilatoria en forma lı́quida,
según la reivindicación 1, caracterizada porque
la enzima proteolı́tica es tripsina, solubilizada en
microemulsiones y aplicada mediante una simple extensión, siendo la concentración del enzima
es 0,05 mg/ml y estando constituida la microemulsión por 64 mg de lecitina, 1,8 ml de isooctano, 0,2 ml de propanol-1 y 0,06 ml de solución
tampón de tris-hidroximetilamino-metano-ácido
clorhı́drico, pH 7,5 a 8, abarcando el intervalo
de pH óptimo para la actividad del enzima αquimiotripsina.
4. Procedimiento para la preparación de las
preparaciones depilatorias, caracterizado por-
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que:
- se introducen 2 ml de una microemulsión que
contiene 1,5 a 2 ml de hidrocarburo alifático, 40 a
150 mg de lecitina, 0 a 0,5 ml de alcohol alifático
y 0,01 a 0,05 ml de solución tampón, pH 7 a 9, en
viales esterilizados de 2,5 ml,
- se introducen en pequeñas cápsulas esterilizadas situadas en los viales e incorporadas en la
tapa, 0,01 a 0,05 ml de una solución de enzimas
proteolı́ticos a una concentración de aproximadamente 1 a 5 mg/ml,
- antes de utilizar las preparaciones y antes
de abrir el vial se rompe la cápsula, presionando
ligeramente la tapa, y la solución enzimática contenida se mezcla con la microemulsión contenida
en el vial,
- agitando repetidamente el vial, se obtiene la
preparación depilatoria final lista para ser utilizada,
- como alternativa a la cápsula pequeña, la
solución enzimática se puede mantener en un vial
independiente y mezclar de manera similar con
la solución de la microemulsión poco antes de su
utilización.
5. Procedimiento cosmético de depilación para particularidades de tipos de piel intermedia,
caracterizado por la aplicación de la preparación depilatoria según la reivindicación 2.
6. Procedimiento cosmético de depilación para tipos de piel seca y sensible, caracterizado
por la aplicación de la preparación depilatoria
según la reivindicación 3.
7. Procedimiento cosmético de depilación para tipos de piel grasa y resistente, caracterizado
por la aplicación sucesiva en primer lugar de la
preparación depilatoria según la reivindicaciones
2, seguida de aplicaciones sucesivas de la preparación depilatoria según la reivindicación 3.
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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva
del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD
2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicación
del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del
7-10-1992, no producirán ningún efecto en España
en la medida en que confieran protección a productos quı́micos y farmacéuticos como tales.
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Esta información no prejuzga que la patente esté o
no incluı́da en la mencionada reserva.
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